Патент на изобретение №2240000

(54) ХЛАДООГРАЖДАЮЩИЙ РАСТВОР ДЛЯ ЗАМОРАЖИВАНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ СУБУМЕРЕННО-НИЗКОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ

(57) Реферат:

Изобретение относится к физиологии и медицине, касается создания хладоограждающего раствора для замораживания лейкоцитов и сохранения их в физиологически активном состоянии после оттаивания. Хладоограждающий раствор для замораживания лейкоцитов в соотношении 1:1 при умеренно-низкой температуре и рН 7,0-7,4, содержащий гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину и воду для инъекций, при этом замораживают лейкоциты до -20°С, а раствор дополнительно содержит оксиметилэтилпиридин сукцинат при следующем соотношении ингредиентов, %: гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 26,0-30,0, оксиметилэтилпиритдин сукцинат 0,1-0,2, вода для инъекций до 100 мл. Технический результат заявленного изобретения – хладоограждающий раствор при замораживании лейкоконцентрата до -20°С обеспечивает сохранность высокого процента физиологически активных лейкоцитарных клеток. 3 табл.

Изобретение относится к физиологии, медицине, а именно к созданию хладоограждающего раствора для замораживания лейкоцитов, в частности человека.

Существенным недостатком прототипа является то, что фумарат натрия, примененный в растворе для криконсервирования лейкоцитов, не обладает мембраностабилизирующим действием, не восстанавливает нарушенные структуры и функции мембран, не тормозит процессы перекисного окисления липидов, а также указанный раствор для замораживания лейкоцитов до -20°С не использовался, т.к. этот способ не был разработан.

Техническим результатом настоящего изобретения является создание хладоограждающего раствора для замораживания лейкоцитов при температуре до -20°С.

Технический результат достигается тем, что раствор для замораживания лейкоцитов при субумеренно-низкой температуре (до -20°С), включающий криопротектор-гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину (ГМБТОЭМ) и воду, дополнительно содержит оксиметилэтилпиридина сукцинат (ОМЭПС). Оксиметилэтилпиридина сукцинат (ОМЭПС) обладает антиоксидантным, мембраностабилизирующим действием, восстанавливает нарушенные структуры и функции мембран клеток, а также тормозит процессы перекисного окисления липидов, которые имеют место при криоконсервировании. Надо отметить, что сукцинат – производное янтарной кислоты [Мецлер Д. Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Т.2. – М.: Мир, 1980. – с.317-319, с.321-322] участвуют в энергетическом обмене клетки, обеспечивающем ее жизнедеятельность, а пиридин – в нуклеиновом обмене [Герман А.С. Пиридин. Большая медицинская энциклопедия. – М., 1981. – Т.17. – с.1054-1055]. Хладоограждающий раствор имеет оптимальный для лейкоцитарных клеток рН среды 7,0-7,4. Все ингредиенты, примененные в данном растворе, тропны лейкоцитарным клеткам и производятся в Российской Федерации.

ПРИМЕР ИСПОЛЬЗОВАНИЯ СРЕДСТВА

Экспериментальные исследования выполнены на базе лаборатории криофизиологии крови Института физиологии Коми НЦ УрО РАН и консервирования крови и тканей ГУ Кировского НИИ гематологии и переливания крови МЗ РФ.

Изучены три варианта хладоограждающих растворов для лейкоконцентрата, различающихся по концентрации входящих в них ингредиентов. Состав растворов представлен в таблице 1.

Конечная концентрация веществ, входящих в состав растворов N1, N2 и N3 после смешивания 1:1 с лейкоконцентратом, оказывалась в 2 раза ниже исходной (таблица 2), рН среды не изменялась, оставаясь в пределах 7,0-7,4.

При проведении исследований по введению лейкоцитов в холодовой анабиоз (-20°С) определена их морфологическая сохранность и функциональная активность (табл.3).

Биологическую полноценность лейкоцитов, прежде всего нейтрофилов, определяет их фагоцитарная активность. Этот тест, наиболее надежно характеризующий физиологические свойства клеток, был лучшим после замораживания – отогрева при использовании хладоограждающего раствора с оптимальным соотношением его ингредиентов.

Готовый оптимальный раствор прозрачен, с легким желтоватым оттенком, без запаха, рН 7,0-7,4, хорошо смешивается во всех соотношениях с лейкоцитным концентратом, не вызывает конгломерацию клеток и обеспечивает функциональную и морфологическую сохранность при положительной температуре до замораживания. Раствор проявляет выраженное хладоограждающее свойство при замораживании лейкоцитов по экспоненциальной программе с +20°С до -20°С.

Таким образом, разработанный хладоограждающий раствор при замораживании лейкоконцентрата до -20°С обеспечил сохранность высокого процента физиологически активных лейкоцитарных клеток. Он может быть применен в учреждениях медицинского профиля, где имеется необходимое холодильное оборудование.

Формула изобретения

Хладоограждающий раствор для замораживания лейкоцитов в соотношении 1:1 при умереннонизкой температуре и рН 7,0-7,4, содержащий гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину и воду для инъекций, отличающийся тем, что замораживают лейкоциты до -20°С, а раствор дополнительно содержит оксиметилэтилпиридина сукцинат при следующем соотношении ингредиентов, %:

Гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 26,0-30,0

Оксиметилэтилпиридина сукцинат 0,1-0,2

Вода для инъекций До 100 мл

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 05.12.2005

Извещение опубликовано: 20.02.2007 БИ: 05/2007