Патент на изобретение №2237486

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ЛИПОФИЛЬНОЙ И ГИДРОФИЛЬНОЙ ФРАКЦИЙ ПЛАЦЕНТЫ СВИНОЙ

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, ветеринарии и косметологии. Способ заключается в том, плаценту отмывают, фрагментируют, подвергают замораживанию парами жидкого азота до температуры (-80)-(-120)С, проводят измельчение в криомельнице при охлаждении парами жидкого азота до температуры (-80)-(-120)С до размера частиц 20-30 мкм, полученный порошок лиофилизируют при температуре (-10)-(-20)С до размера частиц 20-30 мкм и при давлении не выше 0,1 мм рт.ст. липофильную фракцию экстрагируют с помощью хладоновых растворителей под давлением 6-8 атм и температуре 30-35С, а гидрофильную фракцию получают экстрагированием с помощью изотонического водного раствора хлорида натрия при температуре 25-30С в течение 3-4 часов. Технический результат: способ обеспечивает разделение фракций плаценты свиной с сохранением их нативной структуры и уменьшением посторонних примесей, а также максимальный выход биологически активных веществ и усиление их специфической биологической активности. 5 табл.

Изобретение относится к области ветеринарии, медицины, косметологии.

Прототипом изобретения является способ переработки плаценты, включающий измельчение, экстракцию с помощью органических реагентов и разделение экстракта на фракции с применением раствора хлорида натрия, отличающийся тем, что экстракцию проводят 10-18-кратным объемом хлороформа и этанола в соотношении 1:2, а разделение экстракта на фракции проводят путем введения 0,1-0,2-кратного объема 0,1-0,15 раствора хлорида натрия, после чего из хлороформной фракции упариванием получают липидный комплекс, а из водно-этанольной фракции после упаривания и сушки получают концентрат аминокислот и пептидов. /Патент UA 15241, МПК 6 А 61 К 35/50, дата публикации формулы изобретения 15.09.2000. Бюл. №4, 2000 г./.

Недостатками данного способа являются:

– невозможность полного разделения липофильной и гидрофильной фракций;

– экстракция органическими растворителями ведет к химическому взаимодействию с биологически активными компонентами плаценты вызывая их деструктивные изменения и снижая биологическую активность;

– невозможность полного удаления органических растворителей ведет к побочным токсическим воздействиям на организм.

Технический результат изобретения – разделение фракций плаценты свиной, с сохранением их нативной структуры и уменьшением посторонних примесей.

Технический результат достигается использованием современной технологии переработки тканей плаценты свиной по следующей методике.

1. Криоконсервирование тканей плаценты свиной.

Свиную плаценту промывают проточной водой, фрагментируют и подвергают быстрому замораживанию в парах жидкого азота до температуры (-80)-(-120)С со скоростью 30 градусов в минуту.

2. Криоизмельчение и криосублимирование тканей плаценты свиной.

Криоизмельчение плаценты свиной ведут на криомельнице при охлаждении парами жидкого азота до температур (-80)-(-120)С. Степень измельчения ткани составляет 20-30 мкм. Полученный порошок из тканей плаценты подвергают лиофилизации при температурах в диапазоне (-10)-(-20)С и давлении в камере не выше 0,1 мм рт. ст. в течение 16-20 часов. В результате получают порошок с влажностью 3-5%.

3. Извлечение липофильной фракции из модифицированного порошка плаценты свиной.

Экстрагирование лиофилизированного порошка плаценты свиной производят на установке низкотемпературной экстракции с помощью хладона, который абсолютно инертен к извлекаемой фракции. (Использование хладонов в качестве экстрагентов обусловлено выдерживанием приемлемых технологических параметров – температур, давлений. Выполнение тех же технологических операций с иными экстрагентами, например углекислотой, связаны с рядом технических трудностей. Так, использование углекислоты в качестве экстрагента позволяет проводить процесс экстракции в зоне температур от -40С до +31С и давлении 70-75 атм, что технически крайне сложно. Кроме того, при взаимодействии с водой двуокись углерода образует угольную кислоту, которая повышает кислотное число липофильной фракции /Молчанов Г.И. Интенсивная обработка лекарственного сырья. – М.: Медицина, 1981. – 208 с./ Хладоны инертны к большинству химических реагентов так как представляют собой фтор, хлор, предельные углеводороды и устойчивы к большинству факторов внешней среды и изменениям температуры (Полинг А. Общая химия. – М.: Мир, 1974. – С.209). Жидкий хладон подается из напорных емкостей под давлением 6-8 атм и температуре 30-35С в экстратор №1, где находится предварительно высушенный порошок. Растворитель проходит через слой сублимированного порошка плаценты свиной и извлекает из нее жирорастворимые вещества, затем через фильтр тонкой очистки сливается в испаритель. В испарителе за счет уменьшения давления до атмосферного, учитывая низкую температуру кипения хладонов (-20)–(-40)С и их летучесть, удается полностью удалить растворитель (он направляется на регенерацию и повторное использование). В результате данной стадии удается получить чистый липофильный комплекс, сохраняя стабильность извлекаемых веществ и их нативный комплекс. Выход липофильной фракции составляет 2-3% от загружаемого лиофилизированного порошка. Липофильная фракция представляет собой коричнево-бурую массу, размягчающуюся при комнатной температуре. Хранят ее в морозильной камере при температуре -18С.

4. Извлечение гидрофильной фракции.

Выделение гидрофильного комплекса плаценты свиной осуществляют экстрагированием обезжиренного порошка остатка после липофильной экстракции в изотоническом растворе натрия хлорида при температуре 25-30С в течение 3-4-х часов при постоянном перемешивании. Экстрагирование повторяют дважды. Полученный экстракт фильтруют и получают гидрофильную фракцию плаценты свиной. Раствор хранят в морозильной камере при температуре -18С. Обращает на себя внимание эффективность и быстрота процесса получения гидрофильной фракции методом водно-солевой экстракции. В отличие от аналогов, где применяются способы экстрагирования водно-солевым раствором, выделение гидрофильного комплекса осуществляется после получения однородного диспергирования, лиофилизации и полного удаления жирорастворимых веществ, а также ведется при низких температурах, позволяющих сохранить все действующие вещества. Полученная фракция плаценты свиной содержит в своем составе ряд природных аминокислот и микроэлементов, адаптированных к организму животных, что выгодно отличает ее от препарата-аналога.

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1.

С целью определения оптимального режима экстракции липофильной фракции проводились опыты по изменению параметров. Установка для экстракции и сам процесс являются низкотемпературными, так как в качестве экстрагента используются хладоны, в частности хладон-12, представляющий собой дифтордихлорметан, температура кипения которого равна -29,8C. Низкая температура кипения хладонов и высокая их летучесть позволяет проводить экстракцию в интервале низких температур, как например у хладона-12 +30-35С. В связи с этим процесс носит название низкотемпературного.

Результаты опыта представлены в таблице 1.

Из данных, представленных в таблице 1, видно, что оптимальным временем экстракции липофильной фракции плаценты свиной является 4 часа (опыт 4). Дальнейшее увеличение времени ведения экстрагирования не приводит к повышению процента выхода по отношению к загружаемому сублимированному сырью.

Пример 2.

Оставшийся после выделения липофильной фракции порошок переносится в экстрактор №2. После этого добавляют 30 л 0,85% изотонического раствора натрия хлорида, приготовленного на воде дистиллированной, перемешивают в течение 3-4 часов при температуре 25-30С (таблица 2, опыты 1-10). Параллельно проводят опыт по извлечению гидрофильной фракции из тканей плаценты свиной, после криоизмельчения не подвергавшейся липофильной экстракции (таблица 2, опыт 11).

В качестве критерия проведения полноты экстрагирования гидрофильных веществ, содержащихся в плаценте, взято содержание ионов Fe³⁺. Все опыты проводились в одном температурном режиме 25-30С

На основании данных, представленных в таблице 2, выбран оптимальный режим водно-солевого экстрагирования с целью получения гидрофильной фракции и показано в опыте №11, что проведение экстрагирования гидрофильной фракции без первоначального выделения жирорастворимых компонентов в 5,9 раз снижает эффективность водно-солевой экстракции.

Пример 3.

С целью определения состава липофильной фракции был проведен биохимический анализ фракции, который показал:

Содержание общих липидов, г/л 462

Содержание триглицеридов, ммоль/л 31

Холестерин, ммоль/л 11,5

Цинк, мкМ/л 24,95

Медь, мкМ/л 19,2

Марганец, мкМ/л 0,36

Пример 4.

С целью определения содержания аминокислот и микроэлементов в гидрофильной фракции, был проведен анализ, результаты которого представлены в таблице 3.

Данные, представленные в таблице 3, позволяют сделать следующие выводы. Наличие в составе фракций плаценты свиной полипептидов, аминокислот, микро- и макроэлементов, оксикислот и др. биологически активных веществ вызывает нормализацию метаболических процессов в организме, оказывает иммуномоделирующее и адаптогенное влияние.

Пример 5.

При испытаниях фракций, полученных по заявляемому способу, в производственных условиях был установлен их широкий спектр действия и высокая эффективность для профилактики и лечения различных заболеваний у коров, свиней и молодняка сельскохозяйственных животных.

В результате проведенных испытаний в хозяйствах Воронежской области и отдельных хозяйствах Харьковской области получен высокий эффект лечебного и профилактического действия, превышающий по эффективности прототип. Данные представлены в таблицах 4, 5.

Заявляемый способ позволяет реализовать последовательное качественное разделение липофильной и гидрофильной фракций плаценты свиной с максимальным выходом биологически активных веществ. Это усиливает их специфическую биологическую активность. Полученные фракции являются ценной основой для создания лекарственных форм.

Формула изобретения

Способ получения биологически активных липофильной и гидрофильной фракций плаценты свиной, включающий измельчение, поэтапную экстракцию фракций органическим растворителем и водным раствором хлорида натрия, фильтрование и сушку, отличающийся тем, что плаценту отмывают, фрагментируют, подвергают замораживанию парами жидкого азота до температуры (-80) – (-120)С, измельчение проводят в крио-мельнице при охлаждении парами жидкого азота до температуры (-80) – (-120)С до размера частиц 20-30 мкм, полученный порошок лиофилизируют при температуре (-10) – (-20)С до размера частиц 20-30 мкм и при давлении не выше 0,1 мм рт.ст., липофильную фракцию экстрагируют с помощью хладоновых растворителей под давлением 6-8 атм и температуре 30-35С, а гидрофильную фракцию получают экстрагированием с помощью изотонического водного раствора хлорида натрия при температуре 25-30С в течение 3-4 ч.