Патент на изобретение №2236413

(54) ПРОИЗВОДНЫЕ АРТЕМИЗИНИНА, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ

(57) Реферат:

Данное изобретение относится к новым производным артемизинина общей формулы I

где Y имеет значения, указанные в описании, а также к способу их получения, фармацевтическим композициям, содержащим эти C-10-замещенные производные, и способу лечения заболеваний, вызываемых инфекцией паразитом. Технический результат – получение новых соединений, которые могут быть использованы для лечения малярии, неоспороза и кокцидиодоза. 8 н. и 11 з.п. ф-лы, 10 табл.

Данное изобретение относится к использованию определенных C-10-замещенных производных артемизинина в лечении и/или профилактике заболеваний, вызываемых паразитической инфекцией, к определенным новым С-10-замещенным производным артемизинина, способам их получения и фармацевтической композиции, содержащей эти С-10-замещенные производные.

В настоящее время малярия является наиболее важным в мире паразитическим заболеванием человека. Приблизительно 270 миллионов человек по всему миру инфицированы малярией, причем каждый год умирает около 2 миллионов. Благодаря способности формировать сложный механизм выживания путем экспрессии различных антигенов на поверхности инфицированных эритроцитов паразиты получают возможность избегнуть разрушительного действия иммунного ответа хозяина на эти антигены. Кроме того, увеличение уровня заболеваемости малярией объясняется распространением устойчивых к хлору штаммов Plasmodium falciparum и других штаммов, устойчивых к ряду лекарств.

В области здоровья животных паразитические заболевания являются основной проблемой, особенно заболевания, функционально связанные с малярией. Например, неоспороз – это термин, используемый для описания заболеваний, вызываемых у животных паразитами вида Neospora, особенно Neospora caninum. Инфекции, вызываемые Neospora, встречаются у собак, крупного рогатого скота, овец, коз и лошадей.

Конечный хозяин для видов Neospora, включая Neospora caninum, неизвестен, и, кроме того, полный цикл развития паразита не ясен. Однако были выявлены бесполые фазы репродукции, известные как шизогония, и наличие стадии одноклеточных тахизоитов/брадизоитов. Тахизоиты – это инфекционные одноклеточные паразитические фазы размером около 3-71-5 мм, образуемые после внутриклеточной репродуктивно обусловленной эндодиогении. Репродукция через стадию тахизоитов происходит преимущественно в таких органеллах, как нервные и мышечные клетки. Патологические симптомы, развивающиеся после инфекции, ассоциированы в основном в этих тканях. Примерно через пять или шесть недель после инфицирования собаки естественным путем симптомы заболевания включают гиперчувствительность, вызываемую воспалением нервных клеток, и повышающуюся тенденцию к чрезмерному вытягиванию задних ног. Наблюдаются очевидные гистопатологические поражения нервной системы, особенно в мозге и спинном мозге. Обширные негнойные воспаления, глиозные наросты и периваскулярные инфильтрации преобладают в моноядерных клетках (макрофагах, лимфоцитах, клетках плазмы), но также частично наблюдаются и в эозинофилах и нейтрофилах. В мускульной системе наблюдаются макроскопически различимые некрозы и дегенеративные изменения. Не считая более или менее развитой атрофии, наблюдаются длинные бледные продольные полосы.

В Калифорнии и Австралии инфекции, вызываемые Neospora caninum, являются основной причиной выкидышей у крупного рогатого скота. Симптомы заболеваний у скота сходны с симптомами у собак. Наблюдаются атаксия, ослабление рефлексов в суставах, также могут наблюдаться парезы задних ног или частичные парезы всех четырех ног. Гистологическая картина сходна с картиной, наблюдаемой у собак; в основном наблюдаются негнойные менингиты и миелиты.

Данные по активности in vivo веществ, подходящих для борьбы с неоспорозом, встречаются редко, так как еще предстоит разработать адекватные in vivo тест-системы. Сульфадиазин (назначаемый с питьевой водой) эффективен при лечении экспериментально зараженных мышей только при условии профилактического лечения, то есть если лечение было начато до заражения. В случае собак лечение сульфадиазином и клиндамицином успешно только если оно начато рано, то есть при появлении первых клинических симптомов как результата воспаления нервных клеток.

Кокцидиоидоз, инфекция тонкой кишки, относительно редко диагностируется у человека, у которого она вызывается Isospora belli. Однако человек является конечным хозяином для, по крайней мере, двух образующих кисты кокцидиоидальных видов (Sarcocystis suihominis и S. Bovihominis). Употребление сырой или неправильно приготовленной свинины или говядины, содержащей такие кисты, может привести к сильной диарее, причина которой редко диагностируется правильно. Coccidia (тип Apicomplexa, подотряд Eimeriina) являются одной из наиболее успешных групп паразитических простейших, захвативших фактически каждый класс высших организмов. Практическое значение для человека имеют 60-100 видов, которые паразитируют на домашних животных и в некоторых случаях могут вызывать значительные потери, особенно это относится к домашней птице, хотя касается также ягнят, телят, поросят, кроликов и других животных (смотри таблицу А).

Большинство патогенных видов строго специфичны по отношению к хозяину. Они характеризуются сложным жизненным циклом с двумя бесполыми фазами репродукции (шизогония, или мерогония, и спорогония) и фазой полового развития (гаметогония). Ввиду большой важности кокцидиоидозов существует ряд обзоров, например, Davies et al. (1963), Hammond and Long (1973); Long (1982, 1990) и Pellerdy (1974). Экономически значимые виды иногда значительно различаются по их чувствительности к активным ингредиентам. Чувствительность различных стадий развития к медицинским агентам также очень сильно варьирует.

Что касается применения лекарств, профилактика является основным подходом по отношению к домашней птице, у которой симптомы не проявляются до стадии повышенной заболеваемости, а терапия является основным способом по отношению к млекопитающим (McDougald, 1982). В настоящее время для такого лечения и профилактики среди прочих лекарств используют полиэфирные антибиотики и сульфамиды. Однако появились устойчивые к действию лекарств штаммы Eimeria, и устойчивость к лекарствам представляет теперь серьезную проблему. Таким образом, срочно требуются новые лекарства. В связи с многочисленностью патогенных организмов и хозяев не существует “идеальной модели” для идентификации и тестирования антикокцидиальных агентов. Например, большинство из веществ, применявшихся для предотвращения кокцидиоидоза у домашней птицы, недостаточно эффективны или совсем неэффективны против кокцдиоидозов у млекопитающих (Habercorn and Mundt, 1989; Habercorn, 1996). Опубликовано множество работ и сборников инструкций по тестированию на животных активных веществ для борьбы с кокцидиоидозом, для иммунизации и т.д. Одним из особенно важных и содержательных является обзор современных способов, опубликованный Eckert et al. (1995).

Соединение артемизинин, также известное как хингаосу (1), представляет собой тетрациклический 1,2,4-триоксан, встречающийся в Artemisia annua. Для лечения малярии использовали артемизинин и его производные дигидроартемизинин (2), артемэфир (3) и артесунат натрия (4).

Различными группами было предложено несколько способов, объясняющих действие артемизинина и его производных в лечении малярии (Posner et al., J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 3527; Posner et al., J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 5885; Posner et al., J. Med. Chem. 1995, 38, 2273). Однако независимо от способа действия всем текущим производным присущи низкая биодоступность при пероральном применении и низкая стабильность (Meshnick et al., Parasitology Today 1996, 12, 79), особенно это касается эфиров “первого поколения” и сложных эфиров, артемэфира и артесуната натрия, получаемых из дигидроартемизинина. Обширные химические исследования артемизинина и производных выявили, что причиной нестабильности является легкое размыкание кольца триоксановой части в самом артемизинине или в метаболите, общем для всех используемых в настоящее время производных, артемэфире, артеэфире и артесунате, а именно в дигидроартемизинине. Размыкание кольца приводит к образованию свободного гидропероксида, который подвергается восстановлению. Удаление этой группы обусловливает нарушение активности препарата, а продукты восстановления превращаются в дезоксометаболиты. Для того чтобы размыкание кольца было менее легким, атом кислорода в положении С-10 можно либо удалить с образованием 10-дезоксидигидроартемизинина, либо заменить на другие группы, и этот способ обеспечил базу для так называемых соединений “второго поколения”, которые в общем являются производными 10-дезоксиартемизинина. Кроме того, были получены производные артемизинина с различными заместителями в положении С-9.

Также известны производные артемизинина, в которых атом кислорода в положении С-10 замещен на аминогруппу. Например, Yang et al. (Biorg. Med. Chem. Lett., 1995, 5, 1791-1794) синтезировали десять новых производных артемизинина, в которых атом кислорода в положении С-10 замещен на группу -NHAr, где Аr представляет фенил, 3-хлорфенил-, 4-хлорфенил-, 3-бромфенил-, 4-бромфенил-, 4-йодфенил-, 4-метилфенил-, 4-метоксифенил-, 3-карбоксифенил- или 4-карбоксифенилгруппу. Эти вещества тестировали на in vivo активность против штамма К173 Plasmodium berghei, и было обнаружено, что они активны.

Хотя текущие производные артемизинина удачны, существуют проблемы, связанные со стабильностью, биодоступностью и потенциальной нейротоксичностью. Также существует потребность в производных артемизинина, которые будут обладать широким спектром действия против различных паразитов.

К настоящему времени обнаружено, что определенные С-10-замещенные производные артемизинина эффективны в лечении заболеваний, вызываемых инфицированием паразитом. Такие соединения особенно эффективны при лечении заболеваний, вызываемых инфицированием паразитом рода Plasmodium, Neospora или Eimeria, особенно Plasmodium falciparum, Neospora caninum и Eimeria tenella, которые вызывают малярию, неоспороз и кокцидиоидоз соответственно. Данное изобретение предоставляет соединения общей формулы I

или их соли,

где Y означает атом галогена, необязательно замещенную циклоалкил-, арил-, С-связанную гетероарил- или гетероциклоалкилгруппу или группу -NR¹R²; где R¹ означает атом водорода или необязательно замещенную алкил-, алкенил- или алкинилгруппу; R² означает необязательно замещенную алкил-, алкенил-, алкинил-, циклоалкил-, арил- или аралкилгруппу; или

R¹ и R² вместе с находящимся между ними атомом азота образуют необязательно замещенную гетероциклическую группу или аминогруппу, получившуюся из необязательно замещенного эфира аминокислоты;

для использования в лечении и/или профилактике заболеваний, вызываемых инфицированием паразитом, но не организмом рода Plasmodium.

Подходящие соли включают соли присоединения кислот, которые могут быть получены реакцией соответствующего соединения формулы I с подходящей кислотой, такой как органическая или минеральная кислота. Предпочтительными являются соли, получаемые в реакции с минеральной кислотой, особенно соли, образующиеся в реакции с хлористо-водородной или бромисто-водородной кислотой. Соединения формулы I, где Y – группа -NR¹R², где R¹ и R² соответствуют определению выше, особенно подходят для образования таких солей.

Любая алкильная, алкенильная или алкинильная группа, если не определено иначе, может быть линейной или разветвленной и может содержать до 12, предпочтительно до 6, а особенно предпочтительно – до 4 атомов углерода. Предпочтительными алкильными группами являются метил, этил, пропил и бутил. Предпочтительно, чтобы любая алкенильная или алкинильная группа не была алк-1-енил- или алк-1-инильной группой. Другими словами, предпочтительно, чтобы была по крайней мере одна метиленовая -СН₂-группа или сходный sp³-гибридизованный центр между атомом углерода, образующим часть двойной или тройной С-С связи и атомом азота, с которым связана группа.

Предпочтительные алкенильные и алкинильные группы включают пропенил, бутенил, пропинил и бутинил. Если алкильная часть образует часть другой группы, например, алкильную часть аралкильной группы, предпочтительно, чтобы она содержала до 6, особенно предпочтительно – до 4 атомов углерода. Предпочтительными алкильными фрагментами являются метил и этил.

Арильная группа может быть любой ароматической углеводородной группой и может содержать от 6 до 24, предпочтительно от 6 до 18, наиболее предпочтительно от 6 до 14 атомов углерода. Предпочтительные арильные группы включают фенил-, нафтинил-, антрил-, фенантрил- и пирилгруппы, предпочтительно фенил- или нафтил-, наиболее предпочтительно – фенилгруппу. Если арильная группа образует часть другой группы, например арильную часть аралкильной группы, предпочтительно, чтобы это была фенил-, нафтил-, антрил-, фенантрил- или пирил-, более предпочтительно фенил- или нафтил-, наиболее предпочтительно – фенильная группа.

Аралкильная группа может быть любой алкильной группой, замещенной арильной группой. Предпочтительная аралкильная группа содержит от 7 до 30, более предпочтительно от 7 до 24, наиболее предпочтительно – от 7 до 18 атомов углерода, предпочтительно, чтобы это были бензил-, нафтилметил-, антрилметил-, фенантрилметил- и пирилметильные группы. Наиболее предпочтительной является бензильная группа.

Циклоалкильная группа может быть любой насыщенной циклической углеводородной группой, она может содержать от 3 до 12, предпочтительно от 3 до 8, наиболее предпочтительно – от 3 до б атомов углерода. Предпочтительными являются циклопропил-, циклопентил- и циклогексильные группы.

Гетероарильная группа может быть любой ароматической моноциклической или полициклической кольцевой системой, содержащей, по крайней мере, один гетероатом. Предпочтительно гетероарильная группа является 5-18-членной, более предпочтительно 5-14-членной и наиболее предпочтительно – 5-10-членной ароматической кольцевой системой, содержащей, по крайней мере, один гетероатом, выбранный из ряда, включающего атомы кислорода, серы и азота. Предпочтительные гетероарильные группы включают пиридил-, пирилий-, тиопирилий-, пирролил-, фурил-, тиенил-, индолинил-, изоиндолинил-, индолизинил-, имидазолил-, пиридонил-, пиримидинил-, пиразинил-, оксазолил-, тиазолил-, пуринил-, хинолинил-, изохинолинил-, хиноксалинил-, пиридазинил-, бензофуранил-, бензоксазолил- и акридинильные группы. Таким образом, С-связанная гетероарильная группа – это гетероарильная группа, соответствующая вышеприведенному описанию, которая связана с тетрациклическим 1, 2, 4-триоксановым фрагментом соединения общей формулы I через атом углерода в гетероароматической кольцевой системе.

Гетероциклическая группа может быть любой моноциклической или полициклической кольцевой системой, содержащей, по крайней мере, один гетероатом, она может быть ненасыщенной или частично или полностью насыщенной. Термин “гетероциклическая”, таким образом, включает как гетероарильные группы, описанные выше, так и неароматические гетероциклические группы. Предпочтительно, чтобы гетероциклическая группа была 3-18-членной, более предпочтительно 3-14-членной, наиболее предпочтительно – 5-10-членной, кольцевая система должна содержать, по крайней мере, один гетероатом, выбранный из ряда, включающего кислород, сера и азот. Предпочтительные гетероциклические группы включают специфические гетероарильные группы, указанные выше, а также пиранил-, пиперидинил-, пирролидинил-, диоксанил-, пиперазинил-, морфолинил-, тиоморфолинил-, морфолинизосульфонил-, тетрагидроизохинолинил- и тетрагидрофуранильные группы.

Гетероциклилалкильная группа может быть любой алкильной группой, замещенной гетероциклической группой. Предпочтительно, чтобы гетероциклическая часть была 3-18-членной, более предпочтительно 3-14-членной, наиболее предпочтительно – 5-10-членной, гетероциклическая группа соответствовала вышеприведенному описанию, а алкильная часть представляла C_1-6алкильную, предпочтительно С_1-4алкильную, наиболее предпочтительно – метильную группу.

Аминокислота может быть любой -аминокислотой, такой как глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, серин, треонин, цистеин, цистин, метионин, аспаргиновая кислота, глутаминовая кислота, аспарагин, глутамин, лизин, гидроксилизин, аргинин, гистидин, фенилаланин, тирозин, триптофан, пролин, гидроксипролин или фенилглицин, представленная в L- или D-конфигурации. Эфир аминокислоты может быть любым эфиром такой кислоты, причем предпочтительны алкиловые эфиры, особенно С_1-4алкиловые эфиры.

В случае необязательного замещения группа-заместитель может быть любой из групп, используемых обычно в разработке и/или модификации фармацевтических соединений с целью изменения их структуры/активности, стабильности, биодоступности или других свойств. Специфические примеры таких заместителей включают, например, галогеновые атомы, нитро-, циано-, гидроксил-, циклоалкил-, алкил-, алкенил-, галоалкил-, алкокси-, галоалкокси-, амино-, алкиламино-, диалкиламино-, формил-, алкоксикарбонил-, карбоксил-, алканоил-, алкилтио-, алкилсульфинил-, алкилсульфонил-, алкилсульфонато-, арилсульфинил-, арилсульфонил-, арилсульфонато-, карбамоил-, алкиламидо-, арил-, аралкил-, необязательно замещенный арил-, гетероциклические и алкил- или арилзамещенные гетероциклические группы. В случае, если заместитель представляет собой или содержит алкильную или алкенильную замещающую группу, она может быть линейной или разветвленной и может содержать до 12, предпочтительно до 6, наиболее предпочтительно – до 4 атомов углерода. Циклоалкильная группа может содержать от 3 до 8, предпочтительно от 3 до 6 атомов углерода. Арильная группа или фрагмент может содержать от 6 до 10 атомов углерода, причем предпочтительны фенильные группы. Гетероциклическая группа или фрагмент может быть 5-10-членной кольцевой системой, описанной выше. Атом галогена может быть атомом фтора, хлора, брома или йода, и любая группа, содержащая галофрагмент, такая как галоалкильная группа, может, таким образом, содержать любой один или более этих галогеновых атомов.

В другом аспекте, предпочтительно, когда Y представляет собой атом галогена, в частности атом фтора или брома, и в особенности атом фтора.

В другом предпочтительном аспекте Y может представлять собой С_3-8циклоалкильную группу, С_6-18арильную группу, 5-10-членную С-связанную гетероарильную группу или 5-10-членную гетероциклил-С_1-6алкильную группу, причем каждая группа может быть необязательно замещена одним или более заместителями из группы, содержащей галогеновые атомы, гидроксил-, С_1-4алкил-, С_2-4алкенил-, С_1-4галоалкил, С_1-4алкокси-, амино-, С_1-4алкиламино-, ди(С_1-4алкил)амино-, карбоксил-, С_6-10арил, 5-10-членную гетероциклическую и С_1-4алкил- или фенилзамещенные 5-10-членные гетероциклические группы. Предпочтительно, чтобы Y представлял собой С_6-18арильную группу, необязательно замещенную одним или более заместителями из группы, содержащей галогеновые атомы, гидроксил-, С_1-4алкил-, С_2-4алкенил-, С_1-4галоалкил-, С_1-4алкокси-, С_1-4галоалкокси-, амино-, С_1-4алкиламино-, ди(С_1-4алкил)амино- и карбоксильные группы. В частности, Y может представлять собой фенил-, нафтил-, антрил- или фенантрилгруппу, причем каждая группа необязательно замещена одним или более заместителями из группы, содержащей галогеновые атомы и гидроксил-, метил-, винил-, _1-4алкокси- и карбоксильные группы.

В наиболее предпочтительной подгруппе соединений Y представляет собой фенил-, фторфенил-, хлорфенил-, бромфенил-, триметилфенил-, винилфенил-, метоксифенил-, диметоксифенил-, триметоксифенил-, карбоксилфенил-, нафтил-, гидроксинафтил-, метоксинафтил-, антрил- или фенантрильную группу. Особенно предпочтительны соединения, в которых Y – фенил или триметоксифенил.

В следующем предпочтительном аспекте Y может представлять собой группу -NR¹R², где R¹ – атом водорода или C_1-6алкильная группа, a R² – C_1-6алкил-, С_3-8циклоалкил-, С_6-10арил- или C_7-16аралкилгруппа, либо R¹ и R² вместе с находящимся между ними атомом азота представляют 5-10-членную гетероциклическую группу или аминогруппу, образовавшуюся из C_1-6алкилового эфира аминокислоты, причем каждая группа необязательно замещена одним или более заместителями из группы, содержащей галогеновые атомы, С_1-4алкил-, С_1-4галоалкил-, C_1-6алкоксикарбонил-, фенил-, галофенил-, С_1-4алкилфенил-, С_1-4галоалкилфенил-, С_1-4алкоксифенил-, бензил-, пиридил- и пиримидинильную группы. В частности, Y может представлять собой группу -NR¹R², где R¹ – атом водорода или С_1-4алкильная группа, а R² – С_1-4алкил-, С_3-6циклоалкил-, фенил- или бензилгруппа, либо R¹ и R² вместе с лежащим между ними атомом азота представляют 6-10-членную гетероциклическую группу или аминогруппу, образовавшуюся из С_1-4алкилового эфира аминокислоты, причем каждая группа необязательно замещена одним или более заместителями из группы, содержащей галогеновые атомы, С_1-4галоалкил-, С_1-4алкоксикарбонил-, фенил-, галофенил-, С_1-4алкилфенил-, С_1-4галоалкилфенил-, С_1-4алкоксифенил-, бензил-, пиридил- и пиримидинильную группы.

В наиболее предпочтительной подгруппе этих соединений Y представляет собой пропиламино-, циклопентиламино-, циклогексиламино-, фениламино-, фторфениламино-, хлорфениламино-, бромфениламино-, йодфениламино-, метоксикарбонилфениламино-, бифениламино-, бензиламино-, фторбензиламино-, бис(трифторметил)бензиламино-, фенилэтиламино-, фенилметоксикарбонилметиламино-, диэтиламино-, морфолинил-, тиоморфолинил-, морфолиносульфонил-, индолинил-, тетрагидроизохинолинил-, фенилпиперазинил-, фторфенилпиперазинил-, хлорфенилпиперазинил-, метилфенилпиперазинил-, трифторметилфенилпиперазинил-, метоксифенилпиперазинил-, бензилпиперазинил-, пиридилпиперазинил- и пиримидинилпиперазинильную группу. Наиболее предпочтительны соединения, в которых Y – пропиламино-, фениламино-, бромфениламино-, йодфениламино-, бифениламино-, бензиламино-, бис(трифторметил)бензиламино-, фенилэтиламино-, фенилметоксикарбонилметиламино- или морфолинильная группа.

Предпочтительно паразит представляет собой организм рода Neospora или рода Eimeria.

Настоящее изобретение описывает также использование соединения общей формулы I, соответствующего вышеприведенным определениям, для производства лекарства для лечения и/или профилактики заболеваний, вызываемых инфицированием паразитом, кроме организма рода Plasmodium. Предпочтительно паразит представляет собой организм рода Neospora или рода Eimeria.

Определенные соединения общей формулы I являются новыми, и изобретение далее описывает соединение общей формулы I, соответствующее вышеприведенным определениям, при условии, что если Y представляет собой группу -NR¹R² и R² представляют собой фенил-, 3-хлорфенил-, 4-хлорфенил-, 3-бромфенил-, 4-бромфенил-, 4-йодфенил-, 4-метилфенил-, 4-метоксифенил-, 3-карбоксифенил- или 4-карбоксифенильную группу, то R¹ – необязательно замещенная алкильная группа.

Также следует учитывать то, что соединения общей формулы I могут существовать в виде различных геометрических и оптических изомеров. Таким образом, настоящее изобретение включает как индивидуальные изомеры, так и смеси изомеров.

Настоящее изобретение описывает также способ получения нового соединения общей формулы I, описанного на абзац выше, который включает реакцию соединения общей формулы II

где Q – атом водорода или триметилсилильная группа, с подходящим галогенирующим агентом с образованием соединения общей формулы I, в котором Y – атом галогена; и при необходимости реакцию полученного таким образом соединения общей формулы I с реактивом Гриньяра общей формулы YMgX, где Y – необязательно замещенная циклоалкил-, арил-, С-связанная гетероарил или гетероциклоалкильная группа, а Х – атом галогена, с образованием соединения общей формулы I, в котором Y – необязательно замещенная циклоалкил-, арил-, С-связанная гетероарил или гетероциклоалкильная группа; или с амином общей формулы HNR¹R², где R¹ и R² соответствуют вышеприведенным определениям, с образованием соединения общей формулы I, в котором Y – NR¹R²-группа, где R¹ и R² соответствуют вышеприведенным определениям.

Галогенирующие агенты для получения соединений общей формулы I, в которых Y – атом галогена, включают трифторид диэтиламиносеры, хлортриметилсилан, бромтриметилсилан и йодтриметилсилан. В частности, соединения общей формулы I, в которых Y – атом хлора, брома или йода, могут быть получены реакцией соединения общей формулы II, где Q – триметилсилильная группа, с соответствующим хлорирующим, бромирующим или йодирующим агентом соответственно, например хлортриметилсиланом, бромтриметилсиланом или йодтриметилсиланом соответственно. Эту реакцию удобно проводить в присутствии растворителя. Подходящие растворители включают галогенированные углеводороды, особенно хлорированные углеводороды, такие как дихлорметан. Реакцию предпочтительно проводить при температуре от -30С до +10С, более предпочтительно от -5С до +5С, причем наиболее предпочтительно при 0С.

Соединения общей формулы I, где Y – атом фтора, удобно получать реакцией соединения общей формулы II, где Q – атом водорода, с подходящим фторирующим агентом, таким как диэтиламиносульфуртрифторид. Эту реакцию удобно проводить в присутствии растворителя, причем подходящие растворители включают галогенированные углеводороды, особенно хлорированные углеводороды, такие как дихлорметан. Реакцию предпочтительно вести при температуре от -5С до комнатной, то есть от -5С до 30С. Реакцию также можно проводить в атмосфере инертного газа, например азота.

Реактивы Гриньяра, подходящие для получения соединений общей формулы I, в которых Y – необязательно замещенная циклоалкил-, арил-, С-связанная гетероарил- или гетероциклоалкильная группа, включают соединения общей формулы YMgX, где Х – атом хлора, брома или йода. Однако наиболее предпочтительно, чтобы Х представлял атом брома. Реакцию соединения общей формулы I, где Y – атом галогена, предпочтительно брома, с реактивом Гриньяра удобно проводить в присутствии растворителя. Подходящие растворители включают эфиры, такие как диэтиловый эфир. Реакцию предпочтительно проводить в атмосфере инертного газа, например азота, при температуре от -5С до +5С, причем наиболее предпочтительно при 0С. При применении этого способа получается один чистый изомер конечного продукта.

Реакцию амина с соединением общей формулы I, где Y – атом галогена, предпочтительно брома, для образования соединения общей формулы I, где Y – группа -NR¹R², где R¹ и R² соответствуют вышеприведенным определениям, удобно проводить в присутствии растворителя. Подходящие растворители включают галогенированные углеводороды, предпочтительно хлорированные углеводороды, такие как дихлорметан, и эфиры, такие как тетрагидрофуран. Реакцию предпочтительно проводить при температуре от -5С до +5С, причем наиболее предпочтительно при 0С.

В случае, когда соединение общей формулы I, где Y – атом брома, будет далее введено в реакцию с реактивом Гриньяра или амином для получения соединения общей формулы I, где Y – необязательно замещенная циклоалкил-, арил-, С-связанная гетероарил- или гетероциклоалкильная группа или группа -NR¹R², где R¹ и R² соответствуют вышеприведенным определениям, предпочтительно, чтобы соединение общей формулы I, где Y – атом брома, получалось in situ реакцией соединения общей формулы II, где Q – триметилсилильная группа, с бромтриметилсиланом.

Соединение общей формулы II, где Q – триметилсилильная группа, можно получить реакцией дигидроартемизинина, то есть соединения общей формулы II, где Q – атом водорода, с хлортриметилсиланом в присутствии основания, такого как пиридин или триэтиламин. Реакцию предпочтительно проводить при комнатной температуре, то есть от 15С до 35С, наиболее предпочтительно от 20С до 30С.

Дигидроартемизинин, то есть соединение общей формулы II, где Q – атом водорода, является известным соединением и может быть получено известными способами.

Соединения общей формулы I, где Y – необязательно замещенная циклоалкил-, арил-, С-связанная гетероарил- или гетероциклоалкильная группа, можно также получить реакцией 9,10-ангидроартемизинина с соединением общей формулы Y-H, где Y соответствует вышеприведенному определению, в присутствии подходящей кислоты Льюиса. При применении этого способа в конечном продукте получается смесь изомеров.

Подходящие кислоты Льюиса включают трифтордиэферат бора и трифторметансульфоновую кислоту. Реакцию удобно проводить в присутствии растворителя. Подходящие растворители включают галогенированные углеводороды, предпочтительно хлорированные углеводороды, например дихлорметан. Реакцию предпочтительно проводить в атмосфере инертного газа, например азота, при комнатной температуре, то есть от 15С до 35С, наиболее предпочтительно от 20С до 30С.

9,10-ангидроартемизинин удобно получать реакцией дигидроартемизинина с трифторуксусным ангидридом. Реакцию удобно проводить в присутствии растворителя, предпочтительно галогенированного углеводорода, наиболее предпочтительно хлорированного углеводорода, такого как дихлорметан. Также предпочтительно, чтобы реакция проводилась в присутствии основания, например пиридина, или его производного, например диметиламинопиридина. Реакцию предпочтительно проводить в атмосфере инертного газа, например азота, при температуре от -5С до +5С, наиболее предпочтительно при 0С, затем реакционную смесь следует оставить для нагревания до комнатной температуры, то есть 15-35С, предпочтительно 20-30С.

Соединения общей формулы I, в которых Y – необязательно замещенная арил- или С-связанная гетероарильная группа, можно также получить реакцией 10-трихлорацетимидоил-10-дезоксоартемизинина с соединением общей формулы Y-H, где Y соответствует вышеприведенному определению, в присутствии подходящей кислоты Льюиса, такой как трифтордиэтилэферат бора. Предпочтительно, чтобы 10-трихлорацетимидоил-10-дезоксоартемизинин получался in situ реакцией соединения общей формулы II, где Q – атом водорода, с трихлорацетонитрилом в присутствии подходящего основания, такого как 1, 8-диазабицикло[5. 4. 0]ундекан. Предпочтительно, чтобы реакция получения 10-трихлорацетимидоил-10-дезоксоартемизинина проводилась при комнатной температуре, то есть от 15С до 35С, предпочтительно от 20С до 30С. Реакцию удобно проводить в присутствии растворителя. Подходящие растворители включают галогенированные углеводороды, предпочтительно хлорированные углеводороды, например дихлорметан. Следующую часть реакции предпочтительно проводить в атмосфере инертного газа, например азота. Эту часть реакции предпочтительно проводить при температуре от -60С до 20С, более предпочтительно от -55С до -30С, наиболее предпочтительно от -40С до -50С.

Соединения общей формулы I, где Y – необязательно замещенная арил- или С-связанная гетероарильная группа, можно также получить реакцией 10-ациклоартемизинина, соединения, в котором ациклоксигруппа имеет вид А(С=O)-O-, где А – необязательно замещенная алкил-, циклоалкил-, арил-, аралкил-, гетероциклическая или полициклическая группа, с соединением общей формулы Y-H, где Y соответствует вышеприведенным определениям, в присутствии подходящей кислоты Льюиса. Подходящие кислоты Льюиса включают трифтордиэтилэферат бора, хлорид олова (IV), трифторметансульфонат меди (II) и трифторметансульфоновую кислоту. Предпочтительной кислотой Льюиса является трифтордиэтилэферат бора.

В случае, если А – необязательно замещенная алкильная группа, то, если не определено иначе, она может быть линейной или разветвленной и может содержать до 12, предпочтительно до 6, наиболее предпочтительно до 4 атомов углерода. Предпочтительными являются метил-, этил-, пропил- и бутильная группы.

В случае, если А – необязательно замещенная арильная группа, она может быть любой ароматической углеводородной группой и может содержать от 6 до 24, предпочтительно от 6 до 18, наиболее предпочтительно от 6 до 16 и особенно от 6 до 14 атомов углерода. Предпочтительные арильные группы включают фенил-, нафтил-, антрил, фенантрил и пирилгруппы, особенно фенил-, нафтил- и антрилгруппы. Если арильный фрагмент образует часть другой группы, например арильный фрагмент аралкильной группы, предпочтительно, чтобы он представлял собой фенил-, нафтил-, антрил-, фенантрил- или пирил-, наиболее предпочтительно фенил- или нафтил-, а особенно фенильный фрагмент.

В случае, если А – необязательно замещенная аралкильная группа, она может быть любой алкильной группой, замещенной арильной группой. Предпочтительная аралкильная группа содержит от 7 до 30, предпочтительно от 7 до 24, более предпочтительно от 7 до 18, а особенно от 7 до 10 атомов углерода, причем предпочтительными аралкильными группами являются бензил-, нафтилметил-, антрилметил-, фенантрилметил- и пирилметильная группы, наиболее предпочтительна бензильная группа.

В случае, если А – необязательно замещенная циклоалкильная группа, она может быть любой насыщенной или частично ненасыщенной циклической углеводородной группой и может содержать от 3 до 12, предпочтительно от 3 до 8 и особенно от 3 до 6 атомов углерода. Предпочтительными циклоалкильными группами являются циклопропил-, циклопентил- и циклогексильная группы.

В случае, если А – необязательно замещенная полициклическая группа, она может быть любой насыщенной или частично ненасыщенной углеводородной группой, содержащей более одной кольцевой системы. Такие кольцевые системы могут быть “слитыми”, то есть прилежащие кольца имеют два общих прилежащих атома углерода, или “мостиковыми”, то есть кольца характеризуются, по крайней мере, двумя общими атомами углерода (“концами мостика”) и, по крайней мере, тремя ациклическими цепями (“мостиками”), соединяющими общие углеродные атомы, или “спиро” соединениями, то есть прилежащие кольца связаны одним общим атомом углерода. Учитывается также вариант, когда полициклическая группа может содержать более одного типа этих кольцевых систем. Полициклические группы предпочтительно содержат от 4 до 30, более предпочтительно от 4 до 26 и особенно от 6 до 18 атомов углерода. Наиболее предпочтительны бициклические, трициклические и тетрациклические группы. Предпочтительные бициклические группы содержат от 4 до 14, наиболее предпочтительно от 6 до 10 углеродных атомов. Предпочтительные трициклические группы содержат от 5 до 20, особенно от 6 до 14 атомов углерода, причем наиболее предпочтительны антрахиноновые группы. Предпочтительные тетрациклические группы содержат от 6 до 26, наиболее предпочтительно от 6 до 18 атомов углерода.

Необязательные заместители группы А могут быть любыми из описанных выше, подходящих к данному случаю.

Реакцию удобно проводить в присутствии растворителя. Подходящие растворители включают галогенированные углеводороды, особенно хлорированные углеводороды, такие как дихлорметан. Реакцию предпочтительно проводить в атмосфере инертного газа, например азота. Предпочтительная температура реакции лежит в пределах от -60С до -20С, более предпочтительно от -55С до -30С, наиболее предпочтительно от -40С до -50С.

Соединения общей формулы I, в которых Y – замещенная арильная группа, где, по крайней мере, один из заместителей – гидроксильная группа, можно получить также перегруппировкой соответствующего С-10-эфирсвязанного производного артемизинина таким образом, что атом кислорода эфирной связи становится атомом кислорода гидроксильной группы в замещенной арильной группе требуемого продукта. Такая перегруппировка может достигаться реакцией соответствующего С-10-эфирсвязанного производного артемизинина с кислотой Льюиса, такой как трифтордиэферат бора. Реакцию удобно проводить в присутствии растворителя, такого как дихлорметан, при температуре от -5С до +5С, предпочтительно при 0С.

Определенные соединения общей формулы I можно получить также превращением другого соединения общей формулы I. Например, 10-(4-винилфенил)-дигидроартемизинин можно перевести в 10-(4-карбоксифенил)дигидроартемизинин реакцией с окисляющим агентом, таким как перманганат калия. Также соединения общей формулы I, содержащие гетероциклический фрагмент, содержащий, по крайней мере, один атом серы в кольцевой системе, могут быть окислены до соединений общей формулы I, в которых единственный или каждый атом серы превращен в сульфинил- или сульфонилгруппу, реакцией с подходящим окисляющим агентом. Подходящие окисляющие агенты включают N-оксид 4-метилморфолина (NMO), перрутенат тетрапропиламмония (ТРАР) и их смеси. Реакцию удобно проводить в присутствии растворителя, причем подходящие растворители включают галогенированные углеводороды, особенно хлорированные углеводороды, такие как дихлорметан.

Реакцию предпочтительно проводить при комнатной температуре, то есть от 15С до 35С, более предпочтительно от 20С до 30С. Реакцию можно проводить также в атмосфере инертного газа, например азота.

Изобретение описывает также фармацевтическую композицию, включающую носитель и новое соединение общей формулы I, соответствующее вышеприведенным определениям, в качестве действующего начала.

Фармацевтически приемлемый носитель может быть любым материалом, способствующим введению действующего начала. Носитель может быть твердым или жидким, включая материалы, газообразные при нормальных условиях, но сжатые до образования жидкости, может применяться любой носитель, обычно используемый для создания фармацевтических композиций. Согласно данному изобретению предпочтительно, чтобы фармацевтические композиции содержали действующее вещество в количестве от 0.5 до 95% по весу.

Соединения общей формулы I могут входить в состав таблеток, капсул, суппозиториев или растворов. Эти составы можно получить известными способами при использовании подходящих твердых носителей, например лактозы, крахмала или талька, или жидких носителей, например воды, жировых смазок или жидких парафинов. Другие возможные носители включают материалы, получаемые из животных или растительных белков, например желатины, декстрины и сою, белки зерен пшеницы и Psyllium; смолы, такие как акация, гуар, агар и ксантан; полисахариды; альгинаты; карбоксиметилцеллюлозы; каррагинаны; декстраны; пектины; синтетические полимеры, такие как поливинилпирролидон; полипептидные/белковые или полисахаридные комплексы, такие как комплексы желатин – акация; сахара, такие как маннитол, декстроза, галактоза и трегалоза; циклические сахара, такие как циклодекстрин; неорганические соли, такие как фосфат натрия, хлорид натрия и силикаты алюминия; и аминокислоты, содержащие от 2 до 12 атомов углерода, такие как глицин, L-аланин, L-аспарагиновая кислота, L-глутаминовая кислота, L-гидроксипролин, L-изолейцин, L-лейцин и L-фенилаланин.

В композицию могут быть также включены вспомогательные компоненты, такие как разрыхлители таблеток, солюбилизаторы, консерванты, антиоксиданты, поверхностно-активные вещества, вещества, повышающие вязкость, красители, отдушки, рН-модификаторы, подсластители или вкусовые добавки. Подходящие красители включают красный, черный и желтый оксиды железа и FD & С красители, такие как FD & С синий №2 и FD & С красный №40, имеющиеся в наличии у Ellis & Everard. Подходящие отдушки включают мятную, малиновую, лакричную, апельсиновую, лимонную, грейпфрутовую, карамельную, ванильную, вишневую и виноградную отдушки и их комбинации. Подходящие рН-модификаторы включают лимонную кислоту, тартаровую кислоту, фосфорную кислоту, соляную кислоту и малеиновую кислоту. Подходящие подсластители включают аспартам, ацесульфам К и тауматин. Подходящие вкусовые добавки включают гидрокарбонат натрия, ионобменные смолы, соединения, включающие циклодекстрин, адсорбаты или микроинкапсулированные активные добавки.

Для лечения или профилактики кокцидиоидозов и заболеваний, связанных с паразитами, например, в птицеводстве, особенно у цыплят, уток, гусей и индеек, следует смешать от 0.1 до 100 чнм (частей на миллион), предпочтительно от 0.5 до 100 чнм активного вещества с подходящим съедобным материалом, например с комбикормом. При желании можно увеличить количество действующего вещества, особенно если оно хорошо переносится реципиентом. Действующее вещество можно давать также с питьевой водой.

При лечении одного животного, например при лечении кокцидиоидоза или токсоплазмоза у млекопитающих, для получения лучшего результата назначают ежедневно от 0.5 до 100 мг действующего вещества / кг веса. Однако иногда требуется отступить от упомянутых дозировок в зависимости от веса экспериментального животного, способа введения, вида животного и его индивидуальной реакции на вещество, или состав, или время и интервал введения лекарства. В некоторых случаях может быть достаточно использовать количество, меньшее указанного минимума, тогда как в других случаях можно превысить максимальную дозу. В случае применения большей дозы следует разделить ее на несколько меньших.

Изобретение включает также новое соединение общей формулы I, определенное выше, применительно к лечению и/или профилактике заболевания, вызываемого инфицированием паразитом рода Plasmodium и использование нового соединения общей формулы I, определенного выше, в производстве лекарства для лечения и/или профилактики заболевания, вызываемого инфицированием паразитом рода Plasmodium. В этом аспекте предпочтительные соединения включают соединения общей формулы I, в которых Y – атом фтора, Y – фенил-, диметоксифенил- или триметоксифенильная группа или Y – пропиламино-, фторфениламино-, бифениламино-, бензиламино-, фенилэтиламино-, фенилметоксикарбонилметиламино- или диэтиламиновая группа.

Изобретение также описывает способ лечения заболевания, вызываемого инфицированием паразитом, кроме организма рода Plasmodium, который включает назначение нуждающемуся в лечении терапевтически эффективного количества соединения общей формулы I, соответствующего первому вышеприведенному определению. Предпочтительными паразитами являются организмы рода Neospora или рода Eimeria. Также описывается способ лечения заболевания, вызываемого инфицированием паразитом рода Plasmodium, включающий назначение нуждающемуся в лечении терапевтически эффективного количества нового соединения общей формулы I, определенного выше.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1

Получение 10-фтор-10-дезоксо-10-дигидро-артемизинина (10-фтор-10-дезоксодигидроартемизинина) (Формула I: Y=F)

Раствор дигидроартемизинина (1.136 г, 4 ммоль) в дихлорметане (24 мл) охлаждали до 0С в атмосфере азота и добавляли к нему трифторид диэтиламиносеры (DAST) (0.6 мл, 4.8 ммоль). Реакционную смесь оставляли для нагревания до комнатной температуры и затем перемешивали в атмосфере азота в течение 24 часов. Желтый раствор снова охлаждали до 0С, добавляли к нему раствор Na₂CO₃ (5%, 20 мл), и перемешивали реакционную смесь в течение 2 часов при комнатной температуре. Затем разделяли две фазы, и органический слой промывали 1 М НСl, 5% МаНСО₃ и водой и сушили над MgSO₄. Сразу после выпаривания растворителя остаток дважды очищали флэш-хроматографией на колонке (10% этилацетат/гексан), с последующей перекристаллизацией из гексана (289 мг, 50.5%); ¹Н ЯМР (300 МГц, СDСl₃): м.д. 0.97 (d, J_6-Mе,6=6.1 Гц, 3 Н, 6-СН₃), 1.00 (d, J_{9-Mе, 9}=7.4 Гц, 3 Н, 9 -СН₃), 1.13-1.47 (m, 3 Н), 1.44 (s, 3 Н, 3 -СН₃), 1.47-1.72 (m, 4 Н), 1.82-1.96 (m, 2 Н), 2.05 (ddd, J=14.6 Гц, J=4.9 Гц, J=3.0 Гц, 1 Н), 2.39 (td, J=13.5 Гц, J=4.0 Гц, 1 Н), 2.64 (dm, J_9,F=36.1 Гц, 1 Н, Н-9), 5.60 (dd. J_10-F = 54.4 Гц, J_{10, 9} = 2.4 Гц, 1 Н, Н-10), 5.56 (d, J=1.83 Гц, 1 Н, Н=12); ¹⁹F ЯМР (282 МГц, CDCl₃): (м.д.)=-136.43 (dd, J_F,10=54.1 Гц, Jp, 9=36.0 Гц); MC (CI, NH₃): m/z (%)=304 [М⁺+NH⁺₄] (18), 286 [М⁺], 284 [304-HF] (100), 267 (64), 256 (28), 239 (16), 221 (12), 163 (8), 52 (28).

Пример 2

Получение 10-фенил-10-дезоксо-10-дигидро-артемизинина (10-(фенил)- дигидроартемизинина) (Формула I: Y = фенил)

(а) Получение 10-(триметилсилокси)дигидроартемизинина (Формула II: Q=-Si(CH₃)₃)

Способ 1

К раствору дигидроартемизинина (1.51 г, 5.32 ммоль) в пиридине (20 мл) при 0С в атмосфере азота добавляли по каплям хлортриметилсилан (5.20 мл, ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре еще 1 час и вливали в смесь воды и льда. Раствор экстрагировали диэтиловым эфиром (315 мл), сушили (MgSO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали флэш-хроматографией (SiO₂; 5% этилацетат/гексаны) с выходом 10-(триметилсилокси)дигидроартемизинина в виде твердого белого вещества (1.47 г, 78%). _н 5.49 (1Н, s, Н-12), 5.19 (1Н, d. J = 3.05 Гц, Н-10), 2.52 – 2.62 (1Н, m, H-9), 2.39 (1Н. ddd, J=17.5, 13.4, 4.01 Гц), 2.04 (1Н, ddd, J =14.5, 4.84, 3.05 Гц), 1.20-1.97 (9Н, m), 1.45 (3Н, s, H-14), 0.97 (3Н, d, J=6.24 Гц, Н-16), 0.87 (3Н, d, J=7.29 Гц, Н-15), 0.17 (9Н, s, (CH₃)₃Si).

Способ 2

Получение 10-(триметилсилокси)дигидроартемизинина) (Формула II: Q=-Si(CH₃)₃)

К раствору дигидроартемизинина (1.51 г, 5.32 ммоль) в дихлорметане (40 мл) при 0С в атмосфере азота добавляли по каплям триэтиламин (0.94 мл, 6.65 ммоль) и хлортриметилсилан (0.84 мл, 6.65 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение еще 1 часа и затем вливали в смесь воды и льда. Водный слой экстрагировали дихлорметаном (220 мл). Органические слои объединяли, сушили (MgSO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали флэш-хроматографией (SiO₂; 5% этилацетат/гексаны) с выходом 10-(триметилсилокси)дигидроартемизинина в виде белого твердого вещества (1.48 г, 78%). _н 5.32 (1Н, s, Н-12), 4.76 (1Н, d, J=9.00 Гц, Н-10), 2.25-2.45 (2Н, m, H-8, H-9), 2.01 (1H, m, H-4), 1.89 (1Н, m, Н-5), 1.18-1.79 (8Н, m, H-2a, H-2b, Н-3а, H-3b, H-6a, H-6b, Н-7а, H-7b), 1.31 (3Н, s, 1-СН₃), 0.95 (3Н, d, J = 5.83 Гц, 9-СН₃), 0.86 (3Н, d, J = 7.14 Гц, 5-СН₃), 0.20 (9Н, s, Me₃Si) м.д.

(b) Получение 10-бром-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (10-бромартемизинина) (Формула I: Y=Вr)

К раствору 10-(триметилсилокси)дигидроартемизинина (372 мг, 1.04 ммоль), полученного как описано выше в (а) Способе 2, в дихлорметане (5 мл) при 0С добавили по каплям бромтриметилсилан (140 мкл, 1.06 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0С еще в течение 30 минут с получением 10-бромартемизинина in situ.

(c) Получение 10-фенил-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (10– (фенил)дигидроартемизинина) (Формула I: Y=фенил)

Раствор, полученный в (b), концентрировали в вакууме. Остаток растворили в диэтиловом эфиле (5 мл). К этому раствору добавляли фенилмагнийбромид (1.40 мл, 2.38 ммоль, 1.7 М) при 0С в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при 0С и затем оставляли на ночь для достижения комнатной температуры. Раствор затем обрабатывали насыщенным раствором хлорида аммония, сушили (MgSO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали флэш-хроматографией (SiO₂; 8% этилацетат/гексаны) с получением 10-фенил-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (10-(фенил)дигидроартемизинина) (159 мг, 45%) в виде белого твердого вещества. После перекристаллизации из смеси эфир/гексан получали бесцветный кристалл прямоугольной формы. Т. пл. 122С; []²⁰_D – 36.0 (с 0.47/СНСl₃); _max (пленка) 2938, 2874, 1494, 1452, 1376, 1208, 1112, 1076, 1058, 1038, 1010, 954, 944, 904, 882, 852, 820, 740, 700; _н 7.19-7.34 (5Н, m, Аr-Н), 5.75 (1Н, d, J=6.70 Гц, Н-10), 5.60 (1H, s, H-12), 2.71-2.84 (1H, m, H-9), 2.31 – 2.42 (1H, m), 1.65-2.12 (5Н, m), 1.28-1.60 (5Н, m), 1.41 (3Н, s, H-14), 1.01 (1H, d, J=5.77 Гц, Н-16), 0.54 (1H, d. J=7.68 Гц, Н-15); _с 141.03, 127.67, 126.24, 126.09, 102.22, 90.82, 81.10, 72.99, 51.46, 43.45, 37.46, 36.64, 34.16, 32.08, 25.68, 24.88, 24.71, 19.85, 13.62; m/z (CI, СH₄) 345 (M⁺l, 14%), 327 (14), 299 (100). Данные анализа, вычисл. для C₂₁H₂₈O₄: С, 73.26; Н, 8.14; найденные С, 73.58; Н, 8.32.

Исследование различий ядерного эффекта Оверхаузера: энергия дублетного сигнала Н-10 при 5.75 дает 10% увеличение мультиплетного сигнала H-9 при 2.75; это указывает на то, что стереохимически Н-10 и H-9 находятся в син-положении по отношению друг к другу.

Пример 3

Получение 10-(4’-фторбензиламино)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (10– (4’-фторбензиламино)дигидроартемизинина) (Формула I: Y=-NR¹R²; R¹=Н, R²=4-F-бензил)

(a) Получение 10-(триметилсилокси)дигидроартемизинина (Формула II: Q=-Si(СН₃)₃)

К раствору дигидроартемизинина (1.51 г, 5.32 ммоль) в дихлорметане (40 мл) при 0С в атмосфере азота добавляли по каплям триэтиламин (0.94 мл, 6.65 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре еще 1 час, и вливали в смесь воды и льда. Водный раствор экстрагировали дихлорметаном (220 мл), сушили (MgSO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали флхэш-хроматографией (SiO₂; 5% этилацетат/гексаны) с выходом 10-(триметилсилокси)дигидроартемизинина в виде твердого белого вещества (1.48 г, 78%). _н 5.32 (1H, s, H-12), 4.76 (1H, d, J=9.00 Гц, Н-10), 2.25-2.45 (2Н, m, H-8, H-9), 2.01 (1H, m, H-4), 1.89 (1H, m, H-5), 1.18-1.79 (8Н, m, H-2a, H-2b, Н-3а, Н-3b, Н-6а, Н-6b, Н-7а, Н-7b), 1.31 (3Н, s, 1-СН₃), 0.95 (3Н, d, J=5.88 Гц, 9-СН₃), 0.86 (3Н, d, J=7.14 Гц, 5-СН₃), 0.20 (9Н, s, Ме₃Si) м.д.

(b) Получение 10-(4’-фторбензиламино)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (10-(4’-фторбензиламино)дигидроартемизинина) (Формула I: Y=-NR¹R²; R¹=Н, R²=4-F-бензил)

К раствору 10-(триметилсилокси)дигидроартемизинина (214 мг, 0.600 ммоль), полученного как описано выше в (а), в дихлорметане (5 мл) при 0С добавили по каплям бромтриметилсилан (80 мкл, 0.600 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0С еще в течение 30 минут, и затем через канюлю внесли в раствор 4-фторбензиламина (140 мкл, 1.20 ммоль) в тетрагидрофуране (5 мл) при 0С. Реакционную смесь перемешивали при 0С и затем оставляли на ночь для достижения комнатной температуры. Суспензию промывали насыщенным раствором NaHCO₃, сушили (MgSO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали флэш-хроматографией (SiO₂; 15% этилацетат/гексаны) с выходом 10-(4’-фторбензиламино)дигидроартемизинина (76.9 мг, 33%) и 9,10-ангидро-10-дезоксоартемизинина (9,10-ангидродегидроартемизинина) (84.7 мг, 53%) в виде твердых белых веществ. Т. пл. 45.2-46.3С; []²⁰_D – 18.2 (с 0.055 СНСl₃); _н 7.32-7.37 (2Н, m, Аr-Н), 6.95-7.02 (2Н, m, Аr-Н), 5.29 (1Н, s, H-12), 4.10 (1Н, d, J=13.8 Гц, Н-1′), 4.08 (1H, d, J=9.76 Гц, Н-10), 3.91 (1H, d, J = 13.8 Гц, Н-1′), 2.33-2.42 (2Н, m), 1.85-2.07 (3Н, m), 1.65-1.77 (2Н, m), 1.03-1.75 (5H, m), 1.46 (3Н, s, Н-14), 0.96 (3Н, d, J = 6.02 Гц, Н-16), 0.93 (3Н, d, J = 7.19 Гц, Н-15); _с 136.42 (d, J= 3.10 Гц), 129.30 (d, J=7.97 Гц), 114.75 (d, J = 21.1 Гц), 103.90, 91.35, 85.47, 80.60, 51.66, 47.50, 45.82, 37.23, 36.26, 34.03, 32.72, 26.03, 24.61, 21.70, 20.15, 14.06; _F – 118; m/z (CI, CH₄) 392 (М⁺+1, 90%), 374 (54), 346 (100), 328 (20), 267 (16), 209 (16), 165 (26), 109 (18). Данные анализа, вычисл. для C₂₂H₃₀NO₄F: С, 67.50; Н, 7.72; N, 3.58; найденные: С, 67.51; Н. 7.77; N, 3.49.

Пример 4

Получение 10-(2’,4’-диметоксифенил)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (10-(2’,4’-диметоксифенил)дигидроартемизинина) (Формула I: Y=2,4-диметоксифенил)

(а) Получение 9,10-ангидро-10-дезоксоартемизинина (9,10-ангидроартемизинина)

К раствору дигидроартемизинина (500 мг, 1.86 ммоль) в дихлорметане (28 мл) при 0С в атмосфере азота добавили 4-(N,N-диметиламино)пиридин (37 мг) и трифторуксусный ангидрид (0.79 мл, 5.58 ммоль). Реакционную смесь оставили для достижения комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Затем раствор концентрировали в вакууме. Остаток очищали флэш-хроматографией (SiO₂; эфир:гексан от 0.5:9.5 до 1.5:8.5) с выходом 9,10-ангидро-10-дезоксоартемизинина (9,10-ангидроартемизинина) (180 мг, 25%) в виде твердого белого вещества. Т. пл. 100С; []^20.5_D + 155.74 (с 0.0101 в СНСl₃); _max (пленка): 2948, 2922, 2862, 2850, 1684, 1432, 1372, 1334, 1198, 1178, 1158, 1142, 1114, 1078, 1028, 1016, 992, 954, 944, 904, 880, 828, 812; _н: 6.18 (1H, s, H-10), 5.54 (1H, s, H-12), 2.40 (1H, ddd, J=17.1, 13.2, 4.14 Гц, Н-9), 2.00-2.09 (2Н, m), 1.88-1.95 (1H, m), 1.07-1.73 (8Н, m), 1.58 (3Н, d. J=1.37 Гц, Н-16), 1.42 (3Н, s, H-14), 0.98 (3Н, d, J=5.98 Гц, Н-15); m/z (El): 380 (М⁴). Данные анализа, вычисл. для С₁₅Н₂₂О₄: С, 67.67; Н, 8.27; найденные: С, 67.63; Н.8.51.

(b) Получение 10-(2’,4’-диметоксифенил)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (10-(2’,4’-диметоксифенил)дигидроартемизинина) (Формула I: Y=2,4-диметоксифенил)

К раствору 9,10-ангидро-10-дезоксоартемизинина (9,10-ангидроартемизинина) (191 мг, 0.71 ммоль), полученного как описано выше в (а), и 1,3-диметоксибензола (130 мкл, 1.00 ммоль) в дихлорметане (10 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавили трифтордиэтилэферат бора (2 капли). Раствор перемешивали еще в течение 1 часа и затем обработали 20% раствором соляной кислоты (5 мл). Смесь экстрагировали диэтиловым эфиром (320 мл), эфирные экстракты сушили (MgSO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали флэш-хроматографией (SiO₂; 15% этилацетат/гексаны) с выходом 10-(2’,4’-диметоксифенил)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (10-(2’,4’-диметоксифенил) дигидроартемизинина) (89.5, 44%) в виде твердого белого вещества. _н 7.56 (1Н, шир., J=8.4 Гц, Аr-Н), 6.40-6.58 (2Н, m, Аr-Н), 5.43 (1H, s, H-12), 5.42 (1H, s, H-12’), 5.16 (1H, d, J = 10.8 Гц, Н-10), 4.96 (1H, d, J=10.3 Гц, H-10’), 3.82, 3.78 (ОМе), 2.37-2.48 (2Н, m), 1.05-2.07 (10Н, m), 1.63 (3Н, s, H-14), 1.34 (3Н, s, H-14’), 1.00 (3H, d, J=6.22 Гц, Н-16’), 0.90-0.93 (3Н, m, Н-15 и Н-16), 0.59 (3Н, d, J = 7.22 Гц, Н-15’); m/z (CI, NH₃) 422 (M+NН⁺₄, 26%), 406 (84), 405 (М⁺+1, 54), 389 (80), 359 (100), 330 (30), 317 (40), 300 (14). Данные анализа, вычисл. для С₂₃Н₃₂O₆: С, 68.29; Н, 7.97%; найденные: С, 68.34; Н, 8.09.

Пример 5

Получение 10-(2’-гидрокси-1’-нафтил’)дигидроартемизинина (Формула I: Y=2-ОН нафтил)

(а) Получение 10-(2’-нафтокси)-дигидроартемизинина

К раствору дигидроартемизинина (568 мг, 2.00 ммоль) и 2-нафтола (288 мг, 2.00 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) добавили трифенилфосфин (524 мг, 4.00 ммоль) и диэтилазодикарбоксилат (330 мкл, 2.00 ммоль) при 0С в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем желтый раствор концентрировали в вакууме и остаток очищали флэш-хроматографией (SiO₂; 5% этилацетат/гексаны) с выходом 10-(2’-нафтилокси)дигидроартемизинина (185 мг, 23%) в виде твердого белого вещества.

(b) Получение 10-(2’-гидрокси-1’-нафтил)дигидроартемизинина

К раствору 10-(2’-нафтокси)дигидроартемизинина (232 мг, 0.564 ммоль), полученного как описано выше в (а), в дихлорметане (10 мл) добавили трифтордиэферат бора (220 мкл) при 0С. Реакционную смесь оставили для достижения комнатной температуры и перемешивали в течение еще 30 минут. Раствор промывали 10% раствором гидрокарбоната натрия (25 мл), сушили (MgSO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали флэш-хроматографией (SiO₂; 10% этилацетат/гексаны) с выходом 10-(2’-гидрокси-1’-нафтил) дигидроартемизинина в виде твердого белого вещества (72.7 мг). _н 8.91 (1Н, s, ОН), 7.28-7.91 (6Н, m, Аr-Н), 5.57 (1Н, s, H-12), 3.11-3.19 (1H, m), 1.28-2.55 (11H, m), 1.51 (3H, s, H-14), 1.04 (3Н, d, J=5.96 Гц, H-16), 0.63 (3Н, d, J=7.23 Гц, Н-16).

Пример 6

Получение 10-(4’-тиоморфолино-1’-ил)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (10-(тиоморфолино)дигидроартемизинина) (Формула I: Y=тиоморфолино)

В результате реакции бромида, полученного из 10-(триметилсилокси) дигидроартемизинина (356 мг, 1.00 ммоль), как описано выше в Примере 3 (b), с тиоморфолином (300 мкл, 3.00 ммоль), после флэш-хроматографии (8% этилацетат/гексаны) получили 10-(тиоморфолино)-дигидроартемизинин (243 мг, 66%) в виде твердого белого вещества. Т. пл. 147.0-147.6С; []²⁰_D +17 (с 0.021/СНСl₃); _max (пленка) 2924, 2872, 1454, 1418, 1376, 1326, 1278, 1226, 1198, 1184, 1154, 1130, 1100, 1056, 1038, 1018, 988, 940, 926, 880, 850, 828, 756; _н 5.23 (1Н, s, H-12), 3.93 (1Н, d, J=10.21 Гц, Н-10), 3.20-3.28 (2Н, m), 2.85-2.93 (2Н, m), 2.53-2.68 (5Н, m), 2.25-2.36 (1Н, m), 1.93-2.01 (1Н, m), 1.78-1.86 (1Н, m), 1.63-1.70 (2Н, m), 1.14-1.52 (5Н, m), 1.36 (3H, s, H-14), 0.90-1.04 (1Н, m), 0.91 (3H, d, J=6.14 Гц, Н-16), 0.76 (3Н, d, J=7.18 Гц, Н-15); _с: 103.70, 92.28, 91.42, 80.11, 51.54, 50.39, 45.66, 37.19, 36.14, 34.12, 28.15, 25.84, 24.59, 21.44, 20.15, 13.41; m/z (CI, NH₃) 370 (M⁺+1, 100), 324 (70), 310 (10). Данные анализа, вычисл. для C₁₉H₃₁NO₄S: С, 61.76; Н, 8.46; N, 3.79%; найденные: С, 62.04; Н, 8.39; N, 3.65.

Пример 7

Получение 10-(4’-(S,S-диоксотиоморфолин-1’-ил)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (10-(4’-морфолиносульфонил) дигидроартемизинина) (Формула I: Y=4’-(S,S-диоксотиоморфолин-1’-ил) (4-морфолиносульфонил)

К раствору 10-(4’-тиоморфолино)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (10-(тиоморфолино)-дигидроартемизинина) (386 мг, 1.05 ммоль), полученного как описано выше в Примере 6, в дихлорметане (10 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавили NMO (369 мг, 3.15 ммоль), молекулярное сито в виде порошка (525 мг, 4 ) и ТРАР (18.5 мг, кат.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, после чего фильтровали через слой SiO₂ и остаток промывали этилацетатом (315 мл). Фильтрат концентрировали в вакууме. Затем остаток очищали флэш-хроматографией (SiO₂; 35% этилацетат/гексаны) с выходом 10-(4’-(S,S-диоксотиоморфолин-1’-ил)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (10-(4’-морфолиносульфонил) дигидроартемизинина) в виде твердого белого вещества (421 мг, 100%). Т. пл. 152.3-152.7С; []²⁰_D + 13° (с 0.035/СНСl₃); _max (пленка) 2928, 2872, 1454, 1378, 1308, 1270, 1228, 1198, 1124, 1040, 1018, 976, 940, 878, 846, 826, 752, 704, 666; _н: 5.27 (1Н, s, H-12), 4.21 (1Н, d, J=10.30 Гц, Н-10), 3.18-3.46 (8Н, m), 2.54-2.62 (1Н, m), 2.28 – 2.36 (1Н, m), 1.20-2.02 (9Н, m), 1.35 (3Н, s, H-14), 0.92-1.06 (1Н, m), 0.93 (3Н, d, J = 5.99 Гц, Н-15), 0.78 (3Н, J=7.13 Гц, Н-16); _c: 174.20, 104.09, 91.92, 90.84, 90.04, 51.74, 51.27, 46.88, 45.46, 37.29, 36.02, 34.04, 28.91, 25.76, 24.66, 21.45, 20.10, 13.31; m/z (CI, NH₃) 402 (М⁺+1, 100), 373 (30), 356 (64), 342 (16), 356 (20). Данные анализа, вычисл. для C₁₉H₃₁NO₅S: С, 56.84; Н, 7.78; N, 3.49; найденные: С, 56.83; Н, 7.82; N, 3.37.

Пример 8

Получение 10-(4’-бензилпиперазин-1’-ил)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (10-(4’-морфолиносульфонил) дигидроартемизинина) (Формула I: Y=4’-бензил-1’-пиперазинил)

В результате реакции бромида, полученного из 10b-(триметилсилокси)-дигидроартемизинина (356 мг, 1.00 ммоль), как описано выше в Примере 3 (b), с 1-бензилпиперазином (212.1 мкл, 1.22 ммоль), после флэш-хроматографии (40% этилацетат/гексан) получили 10-(4’-бензилпиперазин-1’-ил)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинин (144.3 мг, 40%) в виде твердого белого вещества. Т. пл. 105-106С; []²⁰ _D+10.3 (с 0.909 СНС1₃); _max (пленка) 2954, 2920, 2860, 2802, 1494, 1454, 1376, 1344, 1294, 1270, 1204, 1132, 1114, 1062, 1042, 1016, 986, 942, 924, 880, 852, 824, 738, 694 см^-1; ¹H ЯМР (300 МГц, СDСl₃) _н 7.43-7.30 (5Н, m, Ar-H), 5.35 (1H, s, H-12), 4.10 (1H, d, J=10.2 Гц, Н-10), 3.62 (1H, d, J=13.1 Гц, Н бензила), 3.55 (1H, d, J=13.1 Гц, Н бензила), 3.11-3.06 (2Н, m), 2.80-2.70 (2Н, m), 2.70-2.30 (7Н, m), 2.15-2.02 (1H, m), 2.02-1.85 (1H, m), 1.85-1.70 (2Н, m), 1.70-1.20 (9Н. m), 1.20-1.00 (4Н, m), 0.88 (3Н. d, J=7.2 Гц, 6-метил) м.д.; ¹³С ЯМР (76 МГц, CDCl₃) _c 138.3, 129.13, 128.1, 126.9, 103.8, 91.6, 90.4, 80.3, 63.1, 53.5, 51.7, 45.9, 37.4, 36.3, 34.3, 28.5, 26.0, 24.8, 21.6, 20.3, 13.4 м.д.; МС (CI, CH₄) m/e 443 (M⁺+l, 10). Данные анализа, вычисл. для С₂₆Н₃₈N₂O₄: С, 70.56, Н, 8.65, N, 6.33; найденные: С, 70.24, Н, 8.67, N, 6.28.

Пример 9

Получение 10-(2’-фурил)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (Формула I: Y=2’-фурил)

Способ 1:

К раствору дигидроартемизинина (284 мг, 1.0 ммоль) в дихлорметане (10 мл) при 20С добавили трихлорацетонитрил (2.0 мл, 20.0 ммоль) и одну каплю 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундекана. Реакционную смесь перемешивали при 20С в течение 2 часов, после чего концентрировали в вакууме при 20С. Затем остаток поднимали в дихлорметане (10 мл) при 0С и охлаждали до -40С. Раствор последовательно обрабатывали фураном (1.09 мл, 15.0 ммоль) и трифтордиэтилэфератом бора (123 мкл, 1.0 ммоль), и полученную смесь перемешивали при -40°С в течение еще 30 минут.

Реакционную смесь обрабатывали насыщенным раствором NаНСО₃ и экстрагировали дихлорметаном (210 мл). Экстракты сушили (MgSO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали флэш-хроматографией (SiO₂; 15% этилацетат/гексаны) с выходом заглавного соединения (11.0 мг, 3.3%) в виде бесцветного масла. Аналитический образец получали перекристаллизацией из гексанов.

Способ 2:

(a) Получение 10-бензоилокси-10-дигидроартемизинина (10-дигидроартемизинил бензоата)

К раствору дигидроартемизинина (568 мг, 2.00 ммоль) и бензойной кислоты (244 мг, 2.00 ммоль) в тетрагидрофуране при 0С в атмосфере азота добавили трифенилфосфин (524 мг, 2.00 ммоль) и диэтилазодикарбоксилат (мл). Реакционную смесь оставили нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Раствор концентрировали в вакууме. После флэш-хроматографии (SiO₂; 10% этилацетат/гексаны) получили 10-дигидроартемизинилбензоат в виде твердого белого вещества (419 мг, 53%). Т. пл. 151.4-153.0С; []²⁰_D +119 (с 0.19/СНСl₃); _max (пленка) 2942, 2872, 1724, 1452, 1378, 1268, 1176, 1114, 1064, 1024, 976, 902, 858, 832, 754, 712; _н 7.43 – 8.03 (5Н, m, Ar-H), 6.52 (1Н, d, J = 3.43 Гц, Н-10), 5.58 (1H, s, H-12), 2.91-3.01 (1H, m, H-9), 2.42 (1H, ddd, J = 17.4, 13.3, 3.91 Гц), 1.33-2.10 (10Н, m), 1.45 (3Н, s, H-14), 1.02 (3Н, d, J=6.11 Гц, Н-15), 0.98 (3Н, d, J=7.35 Гц, Н-14); _с: 165.31, 133.03, 129.96, 129.48, 128.39, 104.30, 95.29, 88.66, 88.63, 80.42, 52.27, 43.84, 37.44, 36.10, 34.43, 29.98, 25.78, 24.50, 24.25, 20.14, 12.50; m/z (EI): 388 (М⁺).

(b) Получение 10-(2’-фурил)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (Формула I: Y= 2-фурил)

Раствор 10-бензоилокси-10-дигидроартемизинина (193 мг, 0.50 ммоль) в дихлорметане (5 мл) при -45С последовательно обработали фураном (542 мкл, 7.5 ммоль) и трифтордиэтилэфератом бора (123 мкл, 1.0 ммоль). Полученную смесь перемешивали при -45С в течение 1 часа. Смесь обрабатывали насыщенным раствором NaHCO₃ и экстрагировали дихлорметаном (310 мл). Экстракты высушивали (MgSO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали флэш-хроматографией (SiO₂; 15% этилацетат/гексаны) с выходом заглавного соединения (53.7 мг, 32%) в виде бесцветного масла. Т. пл. 96-97С; ¹Н ЯМР (300 МГц, СDСl₃) _н 7.38 (1H, m, Н-5’), 6.34-6.30 (2Н, m, Н-3’ и Н-4’), 5.38 (1H, s, H-12), 4.46 (1Н, d, J=10.9 Гц, Н-10), 2.84 (1Н, m), 2.60-2.20 (2Н, m), 2.20 – 1.20 (9Н, m), 1.20-0.80 (6Н, m), 0.62 (3Н, d, J=7.2 Гц, 6-метил) м.д.; ¹³С ЯМР (76 МГц, CDCl₃) _с 153.2, 142.0, 110.0, 108.3, 104.2, 92.2, 80.4, 76.6, 71.1, 52.0, 45.7, 37.4, 36.3, 34.1, 31.5, 26.1, 24.7, 21.3, 20.3, 13.7 м.д.; МС (CI, CH₄) m/e 335 (M⁺+l, 43).

Пример 10

Получение 10-(пиррол-2’-ил)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (Формула I: Y=2-пирролил)

Раствор 10-бензоилокси-10-дезоксоартемизинина (700.8 мг, 1.80 ммоль), полученного как описано в Примере 9, Способе 2(а), в дихлорметане (30 мл) при -50С последовательно обработали пирролом (624 мкл, 9.00 ммоль) и трифтордиэтилэфератом бора (332 мкл, 2.70 ммоль) и затем перемешивали при -50С в течение 1 часа. Реакционную смесь обрабатывали насыщенным раствором NаНСО₃ и экстрагировали дихлорметаном (310 мл). Экстракты сушили (MgSO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали флэш-хроматографией (SiO₂; 30% диэтиловый эфир/гексаны) с выходом заглавного соединения (486.6 мг, 81%) в виде бесцветного масла. [а]²⁰_D+198.7 (с 0.105 СНСl₃); _max (пленка) 2924, 2854, 1460, 1376, 1066, 1024, 722 см^-1; ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) _н 8.80 (1H, шир. s, NH), 6.71 (1H, m, H-5’), 6.04 (2H, m, H-3’ и H-4’), 5.39 (1H, s, H-12), 4.47 (1H, d, J=10.8 Гц), 2.58 (1H, m), 2.50-2.10 (2H, m), 2.10-1.95 (1H, m), 1.93 (1H, m), 1.80-1.68 (2H, m), 1.68-1.15 (7Н, m), 1.15-0.80 (4Н, m), 0.93 (3Н, d, J = 7.1 Гц, 6-метил) м.д.; ¹³С ЯМР (76 МГц, CDCl₃) _c 129.9. 117.6, 107.2, 106.7, 104.1, 91.9, 80.5, 71.9, 60.2, 51.8, 45.7, 37.2, 36.2, 34.0, 32.9, 25.9, 24.6, 21.2, 20.1, 14.0, 13.9 м.д.; МС (CI. бутан) m/e 334 (M’+l, 100). Данные анализа, вычисл. для C₁₉H₂₇NO₄: С, 68.44, Н, 8.16, N, 4.20; найденные: С, 68.77, Н, 8.56, N, 3.85.

Пример 11

Получение 10-(4’-бензил-4’-метилпиперазин-1’-ил)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинин иодида (Формула I: Y=4’-бензил-4’-метилпиперазин-1’-ил)

К раствору 10-(4’-бензилпиперазин-1’-ил)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинина (272 мг, 0.62 ммоль), полученного как описано выше в Примере 8, в смеси дихлорметана (1.8 мл) и диэтилового эфира (5.4 мл) в атмосфере азота при 0С добавили по каплям иодметан (36.7 мкл, 0.59 ммоль). Смесь встряхнули и оставили нагреваться до 20С в течение ночи. Собирали осадок, промывали его диэтиловым эфиром (25 мл) и сушили в высоком вакууме. Далее его очищали перекристаллизацией из смеси метанол/диэтиловый эфир с образованием плоских прямоугольных кристаллов (87 мг, 24%). Т. пл. 159-161С; []²⁰_D +18.4 (с 0.436 СНСl₃); _max (пленка): 3448, 2928, 2196, 1457, 1378, 1210, 1133, 1099, 1041, 982, 918, 880, 852, 828, 766, 732, 642 см^-1; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) _н 8.00-7.60 (2Н, d, J=6.2 Гц, Н-2’ и Н-6’), 7.60-7.35 (3Н, m, Ar-H), 5.32 (1Н, s, H-12), 5.25-5.05 (2Н, m, бензил-Н), 4.13 (1Н, d, J=10.2 Гц, Н-10), 3.95-3.55 (4Н, m), 3.55-2.90 (9Н, m), 2.65-2.20 (2Н, m), 2.20-1.15 (14Н, m), 1.15-0.87 (4Н, m), 0.80 (3Н, d, J=6.9 Гц, 6-метил) м.д.; ¹³С ЯМР (76 МГц, СDСl₃) с 133.4, 130.6, 129.1, 126.5, 104.0, 91.5, 90.1, 80.1, 67.4, 59.5, 59.3, 51.5, 45.5, 37.2, 36.1, 34.0, 28.4, 25.9, 24.5, 21.5, 20.1, 13.3 м.д.

Примеры с 12 по 61

При помощи процессов, аналогичных описанным в Примерах с 1 по 11, были получены дальнейшие соединения согласно изобретению, как подробно указано ниже в табл. I. В этой таблице соединения идентифицируются со ссылкой на формулу I.

Пример 62

Антипаразитическая активность соединений, заявленных в изобретении, исследовалась посредством следующих тестов.

Сокращения, используемые в примерах:

СO₂ = диоксид углерода

DMCO (ДМСО) = диметилсульфоксид

ED = линия дермальных клеток лошади

EDTA (ЭДТУ) = этилендиаминтетрауксусная кислота

FCS = эмбриональная телячья сыворотка

RPMI = среда для роста клеточных культур

rpm (об/мин) = обороты в минуту

VERO = линия клеток почки африканской зеленой мартышки

(а) Отбор соединений против клеточных культур Neospora Caninum in vitro

Скрининг проводили в 96-луночных планшетах (Falcon 3872). Монослой клеток хозяина (VERO или ED) помещали на планшет для клеточных культур. Неинфицированные монослои культивировали в двух флаконах для культур клеток (площадь поверхности культуры 50 см³). Клеточный слой отделяли при помощи трипсин-EDTA (5 мл, Gibco 45300-019) при 37°С в культуральном СO₂-инкубаторе. По истечении 10 минут большинство клеток отслаивалось. Клетки при помощи 5-миллилитровой пипетки переносили в 50-миллилитровую пробирку для центрифугирования, содержавшую около 1 мл подогретой эмбриональной телячьей сыворотки. После центрифугирования в течение 5 минут при 1500 об/мин (Varifuge 3.0, Heraeus) удаляли жидкость, а осадок клеток ресуспендировали в среде RPMI (100 мл, 95% RPMI 1640, 2% FCS, 1% L-глутамина, 1% гидрокарбоната натрия, 1% пенициллина/стрептомицина). Суспензию клеток пипетировали в шесть 96-луночных планшетов по 150 мкл в лунку. Планшеты помещали в инкубатор при 37°С и 5% СO₂ на 24 часа. Затем клетки инфицировали тахизоитами Neospora Caninum в концентрации 48,000 тахизоитов на лунку. Затем инкубировали при 37°С и 5% СO₂ в течение 24 часов.

Исследуемые соединения (0.5-1.5 мг) навешивали в 1.5-миллилитровые пробирки Эппендорф и растворяли в 1 мл диметилсульфоксида, что соответствовало разведению примерно 10^-3 гмл^-1 Среда, которую использовали для дальнейшего разведения, состояла из 87% RPMI 1640, 10% FCS, 1% L-глутамина, 1% гидрокарбоната натрия, 1% пенициллина/стрептомицина. В первом скрининге использовали концентрации 10^-5, 10^-6 и 10^-7 гмл^-1. Разведенные препараты переносили в планшеты с культурами клеток в объеме 150 мкл на лунку после 24-часового инкубирования с Neospora Caninum. Для первого ряда использовали необработанную среду; этот ряд содержал инфицированные и неинфицированные клетки в качестве контролей. Планшет инкубировали при 37°С и 5% СО₂ в течение 5 дней. Оценку при помощи микроскопа проводили через 4 дня после обработки и через 5 дней после инфекции при увеличении 2510 в инвертированном микроскопе согласно следующей схеме оценки.

Результаты приведены в табл. II.

(b) Отбор соединений против клеточных культур Eimeria Tenella in vitro

Клетки из почек 19-дневных цыплят культивировали как монослои в 96-луночных планшетах (Falcon 3872) в среде гидролизата лактальбумина Hanks, 5% эмбриональной телячьей сыворотки, 1% глутамина и 1% заменимых аминокислот. После двух дней инкубирования при 42°С и 5% СО₂ культуры инфицировали спорозоитами, выделенными из Eimeria tenella, в количестве около 30.00 на лунку. Тестируемые соединения растворяли в ДМСО и разводили культуральной средой до максимальной конечной концентрации 10 мкгмл^-1 с шагом разведения 1:10. На 5 день после инфекции культуры оценивали под микроскопом при 100-кратном увеличении и определяли состояние клеток хозяина и количество неповрежденных шизонтов и свободных мерозоитов. Эффективность оценивали следующим образом:

Результаты приведены в табл. III.

(с) Отбор соединений против Plasmodium Falciparum in vitro

Использовали два штамма паразитов – W2, устойчивый к хлорохину, и D6, чувствительный к хлорохину, но устойчивый к мефлохину. В приведенной ниже табл. IV лучшие соединения не должны обладать перекрестной устойчивостью между двумя штаммами.

Исследование основывается на включении паразитами радиоактивно меченного гипоксантина, и ингибирование включения определяется активностью известных или тестируемых антималярийных препаратов. В каждом исследовании в качестве контролей использовали препараты с доказанной антималярийной активностью, такие как хлорохин, мефлохин, хинин, артемизинин и пириметамин. Время инкубации составляло 66 часов, а начальная паразитемия была 0.2% при гематокрите 1%. Использовали среду RPMI-1640 без фолиевой или п-аминобензойной кислоты. Вместо 10% инактивированной нагреванием плазмы человека использовали Albumax, так как при использовании Albumax наблюдается меньшее связывание белков, а соединения при этой модели демонстрируют несколько более высокую активность. Если исследовали соединения с предварительно неизвестной активностью, их растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) и разводили в 400 раз полной культуральной средой. Неизвестные соединения начинали исследовать при максимальной концентрации 50000 нгмл^-1 и 11 раз последовательно разводили вдвое до конечного разведения в 1048 раз. Эти разведения проводили в 96-луночных планшетах при помощи системы Biomek 1000 Liquid Handling System. Разведенные препараты переносили в планшеты для исследования, добавляли по 200 мкл зараженных паразитами эритроцитов и инкубировали при 37С в среде, содержащей 5% СО₂, 5% О₂ и 90% N₂. Через 42 часа добавляли 25 мкл ³Н-гипоксантина и планшеты инкубировали еще 24 часа. По истечении 66 часов планшеты замораживали при -70С для лизиса эритроцитов, затем размораживали и собирали на фильтрующие пластины из стекловолокна в 96-луночном приборе. Фильтрующие пластины затем учитывали в сцинтилляционном счетчике. Для каждого препарата определяли профиль ответа на концентрации и при помощи программы нелинейного логистического анализа ответа на дозы определяли концентрации 50%, 90% и 10% ингибирования (КИ₅₀, КИ₉₀ и КИ₁₀).

Можно применять предварительный скрининг, при котором проводится исследование 3 разведений для определения активности при высокой, средней или низкой концентрациях. Были выбраны концентрации 50000, 500 и 50 нгмл^-1. Исследование проводили в дублированном варианте в 96-луночных планшетах, по 14 тестируемых и одному известному соединению (стандарту) на каждый планшет. Систему автоматизировали при помощи прибора Biomek для смешивания, разведения препаратов и добавления препаратов и паразитов в планшет. Если в предварительном скрининге в значении “Области анализа” (ОА) стоит “<“, то соединение было “очень активно”, и значения КИ, вероятнее всего, лежат в области ниже последнего разведения (в нанограммах/мл), которое приведено за ОА. В большинстве случаев эти соединения исследовали снова при более низких начальных концентрациях для определения истинного значения КИ. Если в значении ОА стоит “>”, то значение КИ больше разведения, используемого в предварительном скрининге; таким образом, “ОА>250” означает, что КИ больше, чем 250 нгмл^-1, и дальнейший скрининг не проводился. В таких случаях в значениях КИ стоит 0.00.

Результаты приведены в табл. IV.

Дополнительные сравнительные биологические данные, в которых использовали следующие соединения формулы:

а) соединения согласно изобретению

где R означает группу

б) известные соединения:

d) Опыт по выявлению активности соединений в отношении Plasmodium falciparum in vitro

Нижеприведенные данные, сведенные в табл. V, получают аналогичным отбором против Plasmodium falciparum in vitro, описываемым в Примере 62(с), с той лишь разницей, что используют штамм 3D7 (чувствительный к клороквину) и штамм К1 (устойчивый к клороквину), а также меченный тритием гипоксантин.

Из приведенных в табл. V данных вытекает, что соединения согласно примерам №7, 8 и 54 обладают гораздо более высокой активностью по сравнению с известньми соединениями.

е) Опыт по выявлению активности соединений в отношении Plasmodium berghei N in vivo

Мыши заражают микроорганизмом Р. berghei N и через день после заражения в течение трех дней мышам подкожно (по) или орально (ор) вводят указанные в табл. VI соединения. На четвертый день у мышей отбирают кровь на определение в ней количества паразитов. По полученным результатам определяют дозу в мг/кг исследуемого соединения, необходимую для снижения количества паразитов на соответственно 50 и 90% (ЭД₅₀ и ЭД₉₀). Кроме того, определяют показатель R₉₀, представляющий собой соотношение между ЭД₉₀ (по) и ЭД₉₀ (ор). К тому же определяют показатель артесуната И₉₀, представляющий собой соотношение между ЭД₉₀ (артесуната) и ЭД₉₀ (исследуемого соединения). Результаты опыта сведены в табл. VI.

По показанным в табл. VI данным видно, что соединения согласно примерам №7, 8, 25, 53 и 54 обладают значительно повышенной активностью по сравнению с известными соединениями.

f) Опыт по выявлению активности соединений в отношении Plasmodium berghei PYR, Plasmodium yoelli ssp. NS, Plasmodium yoelli ssp. ART и Plasmodium yoelli ssp. MEF in vivo

Повторяют опыт е) с той лишь разницей, что используют следующие штаммы микроорганизмов:

Plasmodium berghei PYR (устойчивый к пириметамину)

Plasmodium yoelli ssp. NS (устойчивый к клороквину)

Plasmodium yoelli ssp. ART (устойчивый к артемизинину)

Plasmodium yoelli ssp. MEF (устойчивый к мефлоквину).

Результаты опыта сведены в табл. VII.

Из приведенных в табл. VII данных вытекает, что соединения согласно примерам №7, 8, 25, 53 и 54 обладают неожиданной значительно повышенной активностью по сравнению с известными соединениями.

g) Опыт по выявлению активности соединений в отношении Plasmodium falciparum Kl MDR с применением сыворотки ex vivo

Обезьянам Saimiri sciureus весом тела 530-900 г вводят исследуемые соединения перорально в виде пропиленгликолевого раствора при дозе 10 мкг/кг. Затем отбирают кровь для получения сыворотки. Полученную сыворотку заражают in vitro микроорганизмом Plasmodium falciparum Kl MDR. Определяют максимальное разбавление, которое позволяет ингибирование 90% роста паразитов от кольец до шизонтов (МИР 90%) в течение 1, 2, 3, 4 и 6 часов после инокуляции. Полученные результаты сведены в табл. VIII.

Из приведенных в табл. VIII данных вытекает, что соединение согласно примеру №7 обладает активностью, которая в 10-30 раз больше активности известного артесуната.

h) Опыт по выявлению активности соединений в отношении Plasmodium falciparum FVO CQ (устойчивый к пириметамину) in vivo

Обезьяны Actus trivirgatus весом тела 835-1125 г заражают микроорганизмом Plasmodium falciparum FVO CQ. Через 9 дней после инокуляции исследуемые соединения вводят перорально в виде водной суспензии при дозе 10 мкг/кг/день в течение 3 дней. Затем отбирают кровь на определение наличия в ней паразитов через плотность. Полученные результаты сведены в табл. IX.

Из приведенных в табл. VIII данных вытекает, что соединение согласно примеру №7 обладает гораздо более повышенной активностью по сравнению с известным артесунатом.

Что касается токсичности предлагаемых соединений общей формулы (I), то заявитель сообщает, что данные соединения относятся к категориям от малотоксичных до сильнотоксичных веществ.

Формула изобретения

1. Соединение общей формулы I

в которой Y означает С_3-8-циклоалкил, С_6-18-арил, 5-10-членный С-связанный гетероарил или 5-10-членный гетероциклило-C_1-6-алкил, незамещенные или замещенные одним или более заместителями из ряда, включающего атомы галогенов, гидроксил, C_1-4-алкил, С_2-4-алкенил, C_1-4-галоалкил, C_1-4-алкокси, амино, С_1-4-алкиламино, ди(С_1-4-алкил)амино, карбоксил, С_6-10-арил, 5-10-членный гетероцикл, незамещенный или замещенный _1-4-алкилом или фенилом, или Y означает группу -NR¹R², где R¹ означает атом водорода или незамещенные или замещенные С₁-C₆-алкил, алкенил и алкинил, R² означает незамещенные или замещенные С₁-С₆-алкил, алкенил, алкинил, С₃-С₈-циклоалкил, С₆-С₁₀-арил и С₇-С₁₆-аралкил или R¹ и R² вместе с лежащим между ними атомом азота образуют незамещенную или замещенную 5-10-членную гетероциклическую группу или аминогруппу, образовавшуюся из незамещенного или замещенного сложного С₁-C₆-алкилового эфира аминокислот, при этом каждая из указанных групп может быть замещена одним или более заместителями из ряда, включающего атомы галогенов, C_1-4-алкил, C_1-4-галоалкил, C_1-6-алкоксикарбонил, фенил, галофенил, C_1-4-алкилфенил, C_1-4-галоалкилфенил, C_1-4-алкоксифенил, бензил, пиридил и пиримидинил, при условии, что если Y означает группу -NR¹R² и R² означает фенил, 3-хлорфенил, 4-хлорфенил, 3-бромфенил, 4-бромфенил, 4-йодфенил, 4-метилфенил, 4-метоксифенил, 3-карбоксифенил или 4-каробоксифенил, то R¹ означает незамещенный или замещенный С₁-С₆-алкил, алкенил или алкинил.

2. Соединение по п.1, в котором Y означает C_6-18-арил, незамещенный или замещенный одним или более заместителями из ряда, включающего атомы галогенов, гидроксил, С_1-4-алкил, С_2-4-алкенил, С_1-4-галоалкил, С_1-4-алкокси, C_1-4-галоалкокси, амино, С_1-4-алкиламино, ди(С_1-4-алкил)амино и карбоксил.

3. Соединение по п.1 или 2, в котором Y означает фенил, нафтил, антрил и фенантрил, незамещенные или замещенные одним или более заместителями из ряда, включающего атомы галогенов, гидроксил, метил, винил, С_1-4-алкокси и карбоксил.

4. Соединение по любому из пп.1-3, в котором Y означает фенил, фторфенил, хлорфенил, бромфенил, триметилфенил, винилфенил, метоксифенил, диметоксифенил, триметоксифенил, карбоксифенил, нафтил, гидроксинафтил, метоксинафтил, антрил или фенантрил.

5. Соединение по любому из пп.1-4, в котором Y означает фенил или триметоксифенил.

6. Соединение по п.1, в котором Y означает группу -NR¹R², где R¹ означает атом водорода или C_1-4-алкил, а R² означает C_1-4-алкил, С_3-6-циклоалкил, фенил или бензил, или R¹ и R² вместе с лежащим между ними атомом азота образуют 6-10-членный гетероцикл или аминогруппу, образовавшуюся из сложного С_1-4-алкилового эфира аминокислоты, при этом каждая из указанных групп может быть замещена одним или более заместителями из ряда, включающего атомы галогенов, C_1-4-галоалкил, C_1-4-алкоксикарбонил, фенил, галофенил, С_1-4-алкилфенил, C_1-4-галоалкилфенил, C_1-4-алкоксифенил, бензил, пиридил и пиримидинил.

7. Соединение по п.1 или 6, в котором Y означает пропиламино, циклопентиламино, циклогексиламино, фениламино, фторфениламино, хлорфениламино, бромфениламино, иодфениламино, метоксикарбонилфениламино, бифениламино, бензиламино, фторбензиламино, бис(трифторметил)бензил-амино, фенилэтиламино, фенил-метоксикарбонилметиламино, диэтиламино, морфолинил, тиоморфолинил, морфолинсульфонил, индолинил, тетрагидроизохинолинил, фенилпиперазинил, фторфенилпиперазинил, хлорфенилпиперазинил, метилфенилпиперазинил, трифторметилфенилпиперазинил, ме-токсифенилпиперазинил, бензилпиперазинил, пиридилпиперазинил и пири-мидинилпиперазинил.

8. Соединение по любому из пп.1-7, в котором Y означает пропиламино, фениламино, бромфениламино, иодфениламино, бифениламино, бензиламино, бис(трифторметил)бензиламино, фенилэтиламино, фенилметоксикарбонил-метиламино или морфолинил.

9. Соединение по п.1, представляющее собой 10-(4’-(S,S-диоксотио)морфолин-1’-ил)-10-дезоксо-10-дигидроартемизинин.

10. Способ получения соединения общей формулы I

где Y означает группу -NR¹R², где R¹ означает атом водорода или незамещенные или замещенные C₁-C₆-алкил, алкенил и алкинил, R² означает незамещенные или замещенные C₁-C₆-алкил, алкенил, алкинил, С₃-С₈-циклоалкил, С₆-С₁₀-арил и С₇-С₁₆-аралкил, или R¹ и R² вместе с лежащим между ними атомом азота образуют незамещенную или замещенную 5-10-членную гетероциклическую группу или аминогруппу, образовавшуюся из незамещенного или замещенного сложного C₁-С₆-алкилового эфира аминокислот, при этом каждая из указанных групп может быть замещена одним или более заместителями из ряда, включающего атомы галогенов, C_1-4-алкил, C_1-4-галоалкил, C_1-4-алкоксикарбонил, фенил, галофенил, C_1-4-алкилфенил, C_1-4-галоалкилфенил, C_1-4-алкоксифенил, бензил, пиридил и пиримидинил, при условии, что если Y означает группу -NR¹R² и R² означает фенил, 3-хлорфенил, 4-хлорфенил, 3-бромфенил, 4-бромфенил, 4-йодфенил, 4-метилфенил, 4-метоксифенил, 3-карбоксифенил или 4-карбоксифенил, то R¹ означает незамещенный или замещенный C₁-C₆-алкил, алкенил или алкинил,

отличающийся тем, что соединение общей формулы II

где Q означает атом водорода или триметилсилильную группу,

подвергают взаимодействию с соответствующим галогенирующим агентом с последующим взаимодействием полученного таким образом соединения с амином общей формулы HNR¹R², где R¹ и R² имеют вышеуказанное значение.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что используют соединение общей формулы II, где Q означает триметилсилильную группу, которую подвергают взаимодействию с бромтриметилсиланом.

12. Способ получения соединения общей формулы I

где Y означает С_3-8-циклоалкил, C_6-18-арил, 5-10-членный С-связанный гетероарил или 5-10-членный гетероциклил-C_1-6-алкил, незамещенные или замещенные одним или более заместителями из ряда, включающего атомы галогенов, гидроксил, C_1-4-алкил, С_2-4-алкенил, С_1-4-галоалкил, С_1-4-алкокси, амино, C_1-4-алкиламино, ди(С_1-4 алкил)амино, карбоксил, С_6-10-арил, 5-10-членный гетероцикл, незамещенный или замещенный _1-4-алкилом или фенилом, отличающийся тем, что 9,10-ангидроартемизинин подвергают взаимодействию с соединением общей формулы Y-H, где Y имеет вышеуказанное значение, в присутствии кислоты Льюиса.

13. Способ получения соединения общей формулы I

где Y означает незамещенные или замещеннные C₆-C₁₈-арил или 5-10-членный С-связанный гетероарил,

отличающийся тем, что 10-трихлорацетимидоил-10-дезоксоартемизинин подвергают взаимодействию с соединением общей формулы Y-H, где Y имеет вышеприведенное значение, в присутствии кислоты Льюиса.

14. Способ по п.13, отличающийся тем, что 10-трихлорацетимидоил-10-дезоксоартемизинин получают in situ взаимодействием соединения формулы II

где Q означает атом водорода,

с трихлорацетонитрилом в присутствии основания.

15. Способ получения соединения общей формулы I

где Y означает незамещенные или замещенные С₆-С₁₈-арил или 5-10-членный С-связанный гетероарил,

отличающийся тем, что 10-ацилоксиартемизинин, в котором ацилоксигруппа имеет формулу А-(С=O)-O-, где А означает незамещенные или замещенные алкил, циклоалкил, арил, аралкил, гетероциклическую или полициклическую группу, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы Y-H, где Y имеет вышеприведенное значение, в присутствии кислоты Льюиса.

16. Способ получения соединения общей формулы I

где Y означает незамещенные или замещенные С₃-С₈-циклоалкил, С₆-С₁₈-арил, 5-10-членный С-связанный гетероарил или 5-10-членный гетероцикло-C₁-С₆-алкил,

отличающийся тем, что соединение общей формулы II

где Q означает атом водорода или триметилсилильную группу,

подвергают взаимодействию с соответствующим галогенирующим агентом с последующим взаимодействием полученного таким образом соединения с реагентом Гриняра общей формулы

YМgХ,

где Y имеет вышеуказанное значение;

Х означает атом галогена.

17. Фармацевтическая композиция, обладающая антипаразитическим действием, включающая носитель и в качестве активного ингредиента соединение общей формулы I по любому из пп.1-9.

18. Способ лечения заболеваний, вызываемых инфекцией паразитом, включающий введение нуждающемуся в лечении терапевтически эффективного количества соединения общей формулы I по любому из пп.1-9.

19. Способ по п.18, в котором паразитом является организм рода Plasmodium, Neospora или Eimeria.

PC4A – Регистрация договора об уступке патента Российской Федерации на изобретение

(73) Патентообладатель(и):

БАЙЕР АКЦИЕНГЕЗЕЛЬШАФТ (DE)

(73) Патентообладатель:

ДЗЕ ХОНГ КОНГ ЮНИВЕРСИТИ ОФ САЙЕНС ЭНД ТЕКНОЛОДЖИ (CN)

Дата и номер государственной регистрации перехода исключительного права: 10.06.2009 № РД0051078

Извещение опубликовано: 20.07.2009 БИ: 20/2009

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 15.07.2009

Извещение опубликовано: 20.07.2010 БИ: 20/2010