Патент на изобретение №2236257
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СИНТЕТИЧЕСКИЙ ИММУНОГЕН ДЛЯ ТЕРАПИИ И ПРОФИЛАКТИКИ ЗЛОУПОТРЕБЛЕНИЙ НАРКОТИЧЕСКИМИ И ПСИХОАКТИВНЫМИ ВЕЩЕСТВАМИ
(57) Реферат:
Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может применяться для лечения наркоманий, отравлений различными ядами в промышленности и быту, при техногенных катастрофах и т.п. Сущность изобретения заключается в том, что синтетический иммуноген представляет собой конъюгат в виде носителя – природного или искусственного белка (яичный альбумин, или человеческий гамма-глобулин, или микробные токсины) и гаптена – наркотического или психотропного соединения из следующих групп низкомолекулярных соединений: ароматические пропанамины, или изохинолины, или дифенилметаны, или индоламины, или производные барбитуровой кислоты, или производные замещенных пиперидинов. Конъюгат модифицирован иммунокомпетентным полиэлектролитом – полиоксидонием при соотношении, вес.%: конъюгат:полиоксидоний = 1:1,5-5,0. Преимущество изобретения заключается в высокой иммунологической активности, сокращении доз и сроков лечения. 2 табл. Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано при лечении наркомании, отравлении различными ядами в промышленности и быту, при техногенных катастрофах и т.п. В настоящее время широко используются в отечественной медицинской практике синтетические иммуногены, состоящие из носителя – полиоксидония (N-оксидированного производного полиэтиленпиперазина с высоким молекулярным весом) и гаптена – высокомолекулярного соединения, например фермента гиалуронидазы, или смеси гемагглютина и нейрамидазы, или холерного токсина, или тритонового экстракта (гликопептида) клеточных стенок микробактерий БЦЖ, или др. [см., например, з. №97103034, МПК А 61 К 38/43, заявл. 28.02.1997, опубл. 10.09.1998; п. №1580617, МПК А 61 К 39/145, заявл. 13.05.1988, опубл. 10.02.1997; п. №2021816, МПК А 61 К 39/106, з. 05.06.1991, опубл. 30.10.1994; п. №2153354, МПК А 61 К 39/04, завл. 31.03.1999, опубл. 27.07.2000; ж. “Иммунология” №6, 2002, с.324-333; ж.“Лечащий врач” №4, 1998]. Несмотря на то, что входящий в состав известных иммуногенов полиоксидоний обладает уникальными свойствами (воспроизводимостью химической структуры, отсутствием балластных примесей, ярко выраженной иммуностимулирующей активностью, выраженными детоксицирующими, антиоксидантными и мембраностабилизирующими свойствами), описанные выше препараты могут быть применены только для лечения острых и хронических бактериальных или вирусных инфекций из-за наличия в них специфических гаптенов. Известен наиболее близкий по технической сущности и достигаемому результату к заявляемому изобретению синтетический иммуноген для терапии и профилактики злоупотреблений наркотическими веществами (в частности, опиатной зависимости), представляющий собой конъюгат в виде носителя – природного или искусственного белка и гаптена – наркотического или психотропного соединения. Причем в качестве носителя он содержит бычий сывороточный альбумин или синтетические полипептиды и гликопротеины, а в качестве гаптена – морфин, или кодеин, или героин, или метадон, или т.п. [см. Ковалев И.Е., Полевая О.Ю. “Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным химическим соединениям”, М.: Наука, 1985]. Недостатки прототипа следующие: – наличие балластных примесей; – низкая терапевтическая (иммуностимулирующая) активность; – необходимость применения больших доз (до 20 мг/кг) и продолжительность иммунизации (до 6 месяцев); – невозможность достижения стабильного и/или пролонгированного иммунитета. Задачей настоящего изобретения является создание легковоспроизводимого, доступного и безвредного синтетического иммуногена, способного защитить человека от действия широкого спектра токсических веществ, формирующего в его организме стойкий, пролонгированный иммунный ответ. Поставленная задача решается тем, что в известном синтетическом иммуногене для терапии и профилактики злоупотреблений наркотическими и психоактивными веществами, представляющем собой конъюгат в виде носителя – природного или искусственного белка и гаптена – наркотического или психотропного соединения, согласно изобретению, конъюгат модифицирован иммунокомпетентным полиэлектролитом-полиоксидонием при соотношении, вес.%: конъюгат:полиоксидоний = 1:1,5-5,0, причем он содержит в качестве носителя – яичный альбумин, или человеческий гамма-глобулин, или микробные токсины, а в качестве гаптена – низкомолекулярные соединения из следующих групп: ароматические пропанамины, или изохинолины, или дифенилметаны, или индоламины, или производные барбитуровой кислоты, или производные замещенных пиперидинов. Модификация предлагаемого конъюгата полиоксидонием обеспечивает отсутствие в синтетическом иммуногене балластных примесей, при этом заявляемое соотношение конъюгат: полиоксидоний необходимо и достаточно для достижения высокой иммуностимулирующей активности стабильного пролонгированного действия. Использование в предлагаемом синтетическом иммуногене конкретных носителей и гаптенов защищает организм человека от действия широкого спектра токсических веществ (в том числе наркотиков, промышленных ядов, различных канцерогенов). Заявляемый синтетический иммуноген стимулирует процессы в рамках иммунной системы: миграцию и взаимодействие Т- и В-лимфоцитов, продукцию антител в ответ на чужеродные антигены, функционирование NK-клеток и макрофагов. Под его влиянием усиливается синтез антител, количество которых возрастает в геометрической прогрессии уже в течение первых двух недель, а к концу второго месяца от начала введения в организме накапливаются антитела, способные связывать дозы наркотических или других токсических веществ, в 5-10 раз превышающие летальные. В частности, наряду с продукцией антигероиновых антител, индуцируется образование мононуклеарных клеток селезенки, связывающих героин. Таким образом, иммунизация пациента предлагаемым препаратом приводит к развитию продолжительной толерантности к конкретным веществам при отсутствии любых отрицательных явлений. Анализ известных технических решений позволяет сделать вывод о том, что предлагаемое изобретение не известно из уровня исследуемой техники, что свидетельствует о его соответствии критерию “новизна”. Сущность настоящего изобретения для специалистов не следует явным образом из уровня техники, что позволяет сделать вывод о его соответствии критерию “изобретательский уровень”. Возможность приготовления синтетического иммуногена из доступных промышленно выпускаемых компонентов на традиционном оборудовании с помощью известных методик свидетельствует о соответствии изобретения критерию “промышленная применимость”. Для приготовления заявляемого синтетического иммуногена использовали промышленно выпускаемые или самостоятельно синтезированные компоненты, приведенные в табл. 1. Приготовление синтетического иммуногена осуществляли по известным традиционным методикам (см. в конце описания). Методика 1. К смеси 1,2 г бензидина, 2 мл муравьиной кислоты и 70 мл воды при минус 10 К 200 мг приготовленного пара-аминодифенилазофентанила (-карфентанила, – метадона, – кокакина, – никотина, -героина и т.п.) и 10 мл концентрированной соляной кислоты при минус 10 Структурная формула полученного синтетического иммуногена представлена в конце описания. Методика 2. Брали стехиометрические количества налтрексона (морфина, кодеина, и т.п.) 0,01 моль (3,8 г) в пиридине 0,01 моль (0,8 г) и сукцинилдихлорида 0,01 моль (1,6 г). Пиридин использовали в реакции как элиминатор хлороводорода, выделяющегося в процессе присоединения налтрексона к одной из хлоркарбоксигрупп сукцинилдихлорида. Вторая же подобная группа оставалась свободной для последующего присоединения к белку – человеческому гамма-глобулину или синтетическому полипептиду. Очистку конъюгата и его модификацию полиоксидонием осуществляли так же, как описано в методике 1. Структурная формула полученного синтетического иммуногена представлена в конце описания. Заявляемый синтетический иммуноген синтезировали в условиях кафедры фармакологии Уральской медицинской академии, имеющей разрешение Минздрава России на научные работы с наркотическими и психотропными веществами в соответствии со следующими документами: Приказом МЗ СССР №1311 от 30.12.1982 г. и Федеральным законом “О наркотических средствах и психотропных веществах” №3 – ФЗ от 8.01.98. Синтезированные иммуногены многократно испытывали на мышах, а также на группах добровольцев в соответствии со ст.124 УК РФ, ст.43 Основ законодательства об охране здоровья граждан и ст.21, ч. 2 Конституции РФ. Синтетический иммуноген вводили пациентам в виде раствора подкожно в качестве 0,5 мл. Через две недели процедуру повторяли и затем продолжали введение иммуногена 1 раз в неделю еще в течение шести недель. Время активной иммунной реакции определяли стандартными методами: РПГА, РТПГА, ИФА, РИА. Пациенты находились под регулярным наблюдением за изменением состояния их здоровья в течение 5 лет. Пример 1. Синтетический иммуноген для терапии и профилактики злоупотреблений наркотическими и психоактивными веществами. Синтетический иммуноген представляет собой конъюгат в виде носителя – природного белка – человеческого гамма-глобулина и гаптена – низкомолекулярного соединения из группы изохинолина-налтрексона. Конъюгат модифицирован иммунокомпетентным полиэлектролитом-полиоксидонием при соотношении, вес.%: конъюгат:полиоксидоний = 1:1,5, 10,0 мг и 15,0 мг соответственно. В примерах 2-8 представлен синтетический иммуноген с варьированием носителей, гаптенов и соотношения (конъюгат:полиоксидоний) в заявляемых пределах. Составы предлагаемого синтетического иммуногена и известного, взятого за прототип [см. Ковалев И.Е., Полевая Ю.И. “Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным химическим соединениям”, М.: Наука, 1985], а также их фармакологические действия приведены в табл. 2. Как видно из примеров и данных таблицы, использование заявляемого синтетического иммуногена по сравнению с известным, взятым за прототип [см. Ковалев И.Е., Полевая О.Ю. “Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным химическим соединениям”, М.: Наука, 1985], обеспечивает следующие технические и общественно-полезные преимущества: – легкую воспроизводимость без балластных примесей; – доступность и безвредность; – высокую иммунологическую активность; – сокращение доз и сроков лечения; – стабильный пролонгированный иммунитет; – защиту от действия широкого спектра токсических веществ (наркотических и психоактивных). Доклинические исследования В специальной серии опытов методом биологической пробы была выяснена возможность нейтрализации токсического действия героина на животных. Группе контрольных животных – четыре неиммунизированных кролика и опытной группе – четыре иммунизированных кролика внутривенно вводили абсолютно летальную дозу героина 100 мг/кг (LD100). Было установлено, что все четыре кролика контрольной группы погибли от указанных доз. Среди иммунизированных кроликов гибели не зарегистрировано ни в одном из четырех случаев, т.е. наблюдалась четкая иммунологическая защита. Также проводили исследования сыворотки крови иммунизированных животных. Восемь кроликов весом каждый по 2 кг иммунизировали препаратом 3-гемисукцинилналтрексон – человеческий гамма-глобулин – полиоксидоний, содержащий 45 молей 3-гемисукцинилналтрексона и 3 моля полиоксидония на молекулу белка, который вводили внутримышечно по 30 мг/кг два раза в неделю в течение 8 недель. В сыворотке крови животных до иммунизации и после нее определяли наличие антител к препаратам и изучали их специфичность в реакции торможения пассивной Иммунизация кроликов препаратом по приведенной схеме приводила к появлению в сыворотке крови высоких титров антител к иммунокомплексу 3-гемисукцинилналтрексон – человеческий гамма-глобулин – полиоксидоний (1:2560). В реакции торможения пассивной гемагглютинации было установлено, что образующиеся антитела связывают героин и 3-гемисукцинилналтрексон: титр антител к иммунокомплексу уменьшался до 1:320 при использовании концентрации героина и 3-гемисукцинилналтрексона 0,001 моль, что свидетельствует о наличии антител к этим соединениям. Таким образом, синтезированный иммунокомплекс специфически связывает героин не только in vitro, но и в целом организме. Полученные из сыворотки крови кроликов антитела изучены на специфичность связывания опиатов фенантренового ряда. Исследование специфичности антител, т.е. способности связываться с морфином, героином и другими лигандами опиатных рецептов, проводили ингибиторным иммуноферментным анализом. В качестве ингибиторов использовали морфин, героин, кодеин, N-аллилморфин и метадон. Полученные результаты свидетельствуют о том, что при активной иммунизации животных иммунокомплексом 4-гемисукцинилналтрексон – человеческий гамма-глобулин – полиоксидоний индуцируются антитела, специфически связывающие морфин, героин, кодеин, N-аллилморфин и практически не реагирующие с метадоном. Специфичность антител против героина в кроличьей иммунной сыворотке. Из полученных данных видно, что связывание опиатов зависит от наличия в их молекулах определенных функциональных групп и радикалов. Так, в частности, высокая специфичность антител к героину обусловлена наличием в иммунокомплексе сложной эфирной связи налтрексона с янтарной кислотой, а к N-аллилморфину – с присоединенным к атому азота циклопропилиетильным радикалом в химической структуре налтрексона. Таким образом, образующиеся антитела обладают высокой специфичностью только к опиатам фенантренового ряда (героину и его структурным аналогам). Учитывая результаты экспериментов, авторы пришли к выводу о том, что 3-гемисукцинилналтрексон пригоден для синтеза иммуногена. Его химическая структура содержит разветвленные радикалы для формирования иммунного ответа и синтеза высокоаффинных антител к опиатам фенантренового ряда. Клинические исследования. Аналогичные исследования специфичности были проведены с антителами, выделенными из сыворотки крови добровольцев – больных наркоманией, иммунизированных синтезированным иммуногеном. Иммуноген вводили 22 добровольцам, страдающим опийной наркоманией, возраст: 21-36 лет. Продолжительность приема наркотиков: 2-13 лет. Иммуноген вводили подкожно в верхнюю треть плеча правой и левой руки попеременно, один раз в неделю, 8-10 инъекций на курс. Из исходных 22 сывороток наркоманов антиопиатные антитела выделены во всех образцах. По данным ИФА в сыворотках содержатся антитела IgG- и IgM-класса против морфина, героина и кодеина, реагирующие в одинаковой степени с каждым из метаболитов. Специфичность антител против героина в человеческой иммунной сыворотке Как и в случае иммунных кроличьих антиопиатных антител, антитела, выделенные из сыворотки крови наркоманов, практически не взаимодействовали с наркотическими веществами нефенантренового ряда. Антитела, выделенные из сыворотки крови больных наркоманией, по сравнению с антителами из кроличьих иммунных сывороток обладают более широким спектром специфичности. Для подтверждения данных, приведенных в таблице “Составы синтетических иммуногенов и их фармакологическое действие”, приведены дополнительные сведения. Конкретные примеры применения синтетических иммуногенов, представленных в табл. 2. Пример 9 (соответствует составу 1 таблицы) Пациент – 25 лет, 7 лет опийная наркомания. Исходные лабораторные данные: 1 мл плазмы крови – 2570 пмоль героиносвязывающих антител, определяемых радиоиммунным анализом (РИА). Пациента иммунизировали синтетическим иммуногеном – человеческий гамма-глобулин-налтрексон (гаптен из группы изохинолинов) – полиоксидоний. Лабораторные данные (через 9 недель от начала лечения иммуногеном): РИА 1 мл – 77550 пмоль – синтез героиносвязывающих антител. Через 8 недель созревают Т-лимфоциты и стимулируется образование антител, вызывающих созревание В-лимфоцитов, возникает пожизненный клеточный иммунитет; отсутствуют аллергические реакции. Контрольные лабораторные данные (через 12 месяцев от начала лечения иммуногеном): РИА 1 мл – 50120 пмоль. Пример 10. (2) Пациент – 32 года, 9 лет опийная наркомания. Исходные лабораторные данные: 1 мл – 1520 пмоль; сорбционная способность эритроцитов (ССЭ) – детоксикационная функция организма 64,1±5,7% (определение экспресс-методом поглощения эритроцитами витальных красителей – метиленовой сини, см. ж.“Лабораторное дело”, 1988 г., №9, ст. А.А.Тогайбаева, А.В.Кургузкина и др. “Способ диагностики эндогенной интоксикации”). Пациента иммунизировали синтетическим иммуногеном – человеческий гамма-глобулин-налтрексон – полиоксидоний. Лабораторные данные: РИА 1 мл – 78610 пмоль, ССЭ – 44,1±5,8% – усиление детоксикационной функции организма. Другие характеристики аналогичны приведенным в примере 1. Контрольные лабораторные данные: РИА 1 мл – 51100 пмоль. Пример 11.(3) Пациент 21 год, 4 года опийная наркомания. Исходные лабораторные данные: РИА 1 мл – 1680 пмоль; ССЭ – 63,8±5,6%; определение опиатов (иммунохроматографические тесты мочи) – положительно. Пациента иммунизировали синтетическим иммуногеном – человеческий гамма-глобулин-налтрексон – полиоксидоний. Лабораторные данные: РИА 1 мл-78900 пмоль, ССЭ – 42,4±5,8%; определение опиатов – отрицательно, т.е. усиливается сорбция метаболитов и ксенобиотиков. Другие характеристики аналогичны приведенным в примерах 1 и 2. Контрольные лабораторные данные: РИА 1 мл – 52600 пмоль. Примечание к примерам 1-3: приведенные данные зафиксированы документально в историях болезни пациентов. Пример 12.(4) Шесть половозрелых беспородных крыс обоего пола иммунизировали синтетическим иммуногеном – яичный – альбумин-амфетамин (гаптен из группы ароматических пропанаминов) – полиоксидоний из расчета 50 мг/кг. Вводили летальную дозу психоактивного вещества первитина. Лабораторные данные: РИА 1 мл – 76500 пмоль. Другие характеристики аналогичны приведенным в примерах 1-3. Контрольные лабораторные данные: РИА 1 мл – 51200 пмоль. Пример 13. (5) Шесть половозрелых беспородных крыс обоего пола иммунизировали синтетическим иммуногеном – яичный альбумин-метадон (гаптен из группы дифенилметана) – полиоксидоний из расчета 50 мг/кг. Вводили летальную дозу наркотического вещества – героина. Лабораторные данные: РИА 1 мл – 75300 пмоль. Другие характеристики аналогичны приведенным в примерах 1-3. Контрольные лабораторные данные: РИА 1 мл – 52600 пмоль. Пример 14 (6) Шесть половозрелых беспородных крыс обоего пола иммунизировали синтетическим иммуногеном – дифтерийный токсин-гармин (гаптен из группы индоламинов) – полиоксидоний из расчета 50 мг/кг. Вводили летальную дозу психоактивного вещества – первитина. Лабораторные данные: РИА 1 мл – 77900 пмоль. Другие характеристики аналогичны приведенным в примерах 1-3. Контрольные лабораторные данные: РИА 1 мл – 54700 пмоль. Пример 15 (7) Шесть половозрелых беспородных крыс обоего пола иммунизировали синтетическим иммуногеном – человеческий гамма-глобулин – фенобарбитал (гаптен из группы производных барбитуровой кислоты) – полиоксидоний из расчета 50 мг/кг. Вводили летальную дозу снотворного – барбитурата. Лабораторные данные: РИА 1 мл – 72300 пмоль. Другие характеристики аналогичны приведенным в примерах 1-3. Контрольные лабораторные данные: РИА 1 мл – 51100 пмоль. Пример 16 (8) Шесть половозрелых беспородных крыс обоего пола иммунизировали синтетическим иммуногеном – дифтерийный человеческий гаммма-глобулин-карфентанил (гаптен из группы производных замещенных пиперидинов) – полиоксидоний из расчета 50 мг/кг. Вводили летальную дозу наркотического вещества – морфина. Лабораторные данные: РИА 1 мл – 75400 пмоль. Другие характеристики аналогичны приведенным в примерах 1-3. Контрольные лабораторные данные: РИА 1 мл – 57200 пмоль. Прототип. Шесть половозрелых беспородных крыс обоего пола иммунизировали иммуногеном дифтерийный бычий сывороточный альбумин-героин из расчета 50 мг/кг. Вводили только внутривенно летальную дозу наркотического вещества – морфина. Лабораторные данные: РИА 1 мл – 70100 пмоль. Высокая аллергенность, обусловленная образованием иммуноглобулинов реагинного типа класса IgE. Гибель животных через 3 месяца в результате анафилактического шока во время повторной иммунизации. Формула изобретения
Синтетический иммуноген для терапии и профилактики злоупотреблений наркотическими и психоактивными веществами, представляющий собой конъюгат, состоящий из носителя – природного или искусственного белка и гаптена – наркотического или психотропного соединения, отличающийся тем, что конъюгат модифицирован иммунокомпетентным полиэлектролитом – полиоксидонием при соотношении, вес.%: конъюгат:полиоксидоний = 1:1,5-5,0, причем, он содержит в качестве носителя яичный альбумин, или человеческий гамма-глобулин, или микробные токсины, а в качестве гаптена – низкомолекулярные соединения из следующих групп: ароматические пропанамины, или изохинолины, или дифенилметаны, или индоламины, или производные барбитуровой кислоты, или производные замещенных пиперидинов. РИСУНКИ
MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 16.09.2005
Извещение опубликовано: 10.12.2006 БИ: 34/2006
|
||||||||||||||||||||||||||
С добавляли 1 г нитрата натрия в 2 мл воды. Реакционную смесь выдерживали при охлаждении и перемешивании в течение одного часа. Затем полученный раствор добавляли при 0
