Патент на изобретение №2235770

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТОНА “КАСПИЙ”

(57) Реферат:

Изобретение относится к биотехнологии и к клинической микробиологии и может быть использовано для культивирования широкого спектра микроорганизмов. Белковое сырье – рыбу или рыбную муку смешивают с водой, нагревают до температуры 70-80С, выдерживают в течение 30-40 мин, разбавляют водой, подкисляют соляной кислотой до рН 1,6-2,0 и ферментируют с помощью пепсина в течение 18-20 ч при 48-50С. Затем ферментолизат подщелачивают до рН 3,8-4,2, кипятят 10-15 мин и фильтруют, фильтрат подщелачивают до рН 7,8-8,2, кипятят 10-15 мин и фильтруют. Фильтрат концентрируют до содержания сухих веществ 18-55%. Изобретение расширяет сырьевую базу для получения пептонов, способствует более полной очистке пептонов от балластных веществ и создает лучшие условия для роста микроорганизмов, чем известный. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано для культивирования широкого спектра микроорганизмов.

Пептоны – продукты неполного расщепления белка широко используют при получении простых и сложных питательных сред как источников азота и углерода (1, 2, 3, 4).

Известен способ получения пептона по Мартену путем самопереваривания свежих свиных желудков (5).

Недостатками указанного способа являются необходимость предварительной тщательной очистки свиных желудков от жира и желчи, что является довольно трудоемким процессом, нестандартность свиных желудков – источников пепсина и длительность процесса получения пептона.

Известен также способ получения пептона путем ферментативного гидролиза белкового сырья сначала пепсином, а затем трипсином (7).

Недостатком данного способа являются высокие затраты за счет использования двух ферментных препаратов и большое количество технологических операций, что удорожает процесс получения пептона.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ получения пептона по Рамону путем ферментативного гидролиза вареного мяса с помощью пепсина свиных желудков в присутствии соляной кислоты в течение 24 ч при 56С с последующей стерилизацией и очисткой путем отстаивания в течение не менее 5 суток и деконтацией (6).

Недостатками указанного способа являются использование в качестве сырья только мяса, что ограничивает сырьевую базу для получения пептонов, нестандартность источника пепсина – свиных желудков, длительность процесса и низкая степень очистки пептонов от негидролизированного белка, приводящая к помутнению и образованию осадка после стерилизации, что практически исключает возможность использования данного пептона в составе питательных сред без дополнительной очистки.

Предлагаемым изобретением решаются задачи расширения сырьевой базы для получения пептона, сокращения длительности процесса и повышения степени очистки целевого продукта.

Для достижения названного технического результата в предлагаемом способе белковое сырье – рыбу (например, кильку, минтай, анчоус) или рыбную муку смешивают с водой, нагревают до температуры 70-80С, выдерживают при данной температуре в течение 30-40 мин, затем разбавляют водой, смесь подкисляют соляной кислотой до рН 1,6-2,0 и ферментируют с помощью пепсина в течение 18-20 ч при 48-50С, после чего ферментолизат подщелачивают до рН 3,8-4,2, кипятят 10-15 мин и фильтруют, фильтрат подщелачивают до 7,8-8,2, кипятят в течение 10-15 мин и фильтруют. Фильтрат концентрируют и высушивают.

Отличительные признаки предлагаемого способа от указанного выше известного, наиболее близкого к нему, заключаются в использовании в качестве сырья рыбы или рыбной муки, что расширяет сырьевую базу для получения пептонов и частично удешевляет процесс, а также в том, что очистку полученного пептона осуществляют при различных значениях рН – сначала при рН 3,8-4,2, а затем при рН 7,8-8,2. Такая обработка способствует полному удалению остаточных белков, обеспечивая высокую прозрачность и отсутствие осадка после стерилизации пептона, что является одним из важных показателей, характеризующих качество пептона. Обработка пептонов при различных значениях рН позволяет не только повысить степень очистки пептона, но и значительно сокращает время очистки – с 5 суток по известному до 8-12 ч по предлагаемому способу.

Способ осуществляется следующим образом.

Пример 1. К 1 кг фарша рыбы добавляют 1 л воды, смесь перемешивают, нагревают до 70-80С для денатурации белков, выдерживают при данной температуре в течение 30-40 мин, затем добавляют 1 л воды, после чего суспензию подкисляют соляной кислотой до рН 1,6-2,0, вносят 10 г пепсина активностью 100000 ед и ведут гидролиз при 48-50С в течение 18-20 ч. После окончания гидролиза суспензию подщелачивают 30% раствором едкого натрия до рН 3,8-4,2, кипятят 15 мин и фильтруют, фильтрат еще раз подщелачивают до рН 7,8-8,2, кипятят 15 мин, фильтруют, фильтрат концентрируют до 18-55% сухих веществ и высушивают известными способами, например распылением, пеносушкой или в псевдокипящем слое.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что к 1 кг рыбной муки ГОСТ 2116-82 добавляют 3 л воды, нагревают до 70-80С, выдерживают при данной температуре 30-40 минут, затем добавляют 3 л воды, далее согласно примеру 1.

Пептон характеризуется высоким содержанием истинного пептона не менее 75%, азот аминокислот составляет 2,0-2,5%, отсутствует свободный белок, индол и тяжелые металлы. После стерилизации раствор пептона остается прозрачным, осадок отсутствует.

Для биологической проверки качества сухой пептон в количестве 15-20 г растворяют в 1 л дистиллированной воды, добавляют 5 г хлористого натрия и 1 г агара. Для культивирования штамма Str.Dick 1 добавляют 5 г глюкозы. Смесь нагревают до полного расплавления агара, кипятят 1-2 мин, охлаждают до 45-50С, разливают в стерильные чашки Петри, подсушивают в термостате при 371С в течение 45 мин. Контроль качества пептона осуществляют путем посева тест-штаммов E.coli, Sh.flexneri, S.typhi H 901, S.Paratyphi А и В, Kl.pneumoniae, St.aureus, Str.faecalis, Str.Dick 1, Ps. aeruginosa, Str. epidermidis, E.aerogenes, из разведений 10^-6, что соответствует 100 микробным клеткам.

Учет результатов производят через 18-20 ч инкубации посевов при 37С. В таблице представлена сравнительная характеристика роста тест-штаммов микроорганизмов на пептонах, полученных предлагаемым и известным способами.

Из таблицы видно, что пептон, полученный по предлагаемому способу, по размеру и количеству выросших колоний превосходит известный пептон, что указывает на его более высокие ростовые свойства по сравнению с пептоном, полученным известным способом.

Кроме того, предлагаемый способ позволяет значительно сократить время процесса получения пептона и решает вопрос о замене мяса животных более дешевым сырьем – рыбой, рыбной мукой.

Пептон, полученный предлагаемым способом, может быть использован для выращивания микроорганизмов различных таксономических групп и изучения их культурально-морфологических свойств, а также в качестве питательной основы при получении агаровых и безагаровых сред различного назначения (сахарного и желчного бульона, сывороточного и кровяного агара и т.д).

Способ прост в выполнении, не требует дополнительных затрат и может быть легко воспроизводим на предприятиях, выпускающих питательные среды.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ

1. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под. ред. М.О.Биргера. М.: “Медицина”. 1982, с.46-47.

2. The Oxoid Manual, FIFTH Edition, 1982. S. 237-244.

3. Микробиологический словарь – справочник А.П.Красильников. Минск, “Беларусь”, 1986, с.228.

4. Microbiology Manual Merck, 1990, р.258-261.

5. Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. Под. ред. Н.Н.Жукова-Вережникова. М.: Медгиз, 1962, том 1, с.353.

6. Там же, с.354 (прототип).

7. Физико-химические методы контроля ингредиентов, питательных сред и биопрепаратов. Москва, 1970, с.63-64.

Формула изобретения

Способ получения пептона, предусматривающий смешивание рыбного сырья с водой в заданном соотношении, ферментативный гидролиз с последующей очисткой кипячением и фильтрацией, концентрированием и высушиванием, отличающийся тем, что в качестве рыбного сырья дополнительно используют рыбную муку, смешанное с водой рыбное сырье выдерживают при температуре 70-80С в течение 30-40 мин, полученную суспензию разбавляют водой, ферментативный гидролиз проводят пепсином при рН 1,6-2,0 в течение 18-20 ч, очистку пептона ведут сначала доведением рН до 3,8-4,2, затем до 7,8-8,2, а кипячение проводят при каждом из указанных значений рН в течение 10-15 мин и концентрируют до содержания сухих веществ 18-55%.

PD4A – Изменение наименования обладателя патента Российской Федерации на изобретение

(73) Новое наименование патентообладателя:

Федеральное государственное унитарное предприятие “Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам “Микроген” Министерства здравоохранения Российской Федерации

Извещение опубликовано: 27.03.2005 БИ: 09/2005