Патент на изобретение №2231066
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПЕРГЛИКЕМИИ
(57) Реферат: Изобретение относится к области медицины. Способ определения гипергликемии основан на качественной оценке содержания глюкозы в сыворотке крови по тест-функции биотестера вольфии бескорневой. При изменении формы листеца вольфии и обеднении его хлорофиллом диагностируют гипергликемию. Способ обеспечивает простоту и быстроту определения, дешев. 8 ил. Изобретение относится к медицине, биологии, биофизике и может быть использовано для диагностики гипергликемии различного генеза. Глюкоза – один из важнейших компонентов крови, количество ее отражает состояние углеводного обмена. При целом ряде состояний содержание глюкозы (гипергликемия) в крови повышается. Наиболее часто гипергликемия развивается у больных сахарным диабетом. Нормальная величина концентрации глюкозы в крови взрослого человека составляет 3,9-6,1 ммоль/л (Г.И. Назаренко, А.А. Кишкун. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. М., 2000). Гипергликемия наблюдается при следующих состояниях и заболеваниях: сахарном диабете, дисфункции вегетативной нервной системы, повышении гормональной активности коры и мозгового слоя надпочечников, щитовидной железы, гипофиза, эпидемического энцефалита, сифилиса ЦНС, травмы и опухоли мозга, эпилепсии, отравлении окисью углерода, сильных эмоциональных и психических возбуждениях. Существуют различные способы системы контроля за уровнем глюкозы в крови, использующие наборы реагентов и сложные автоматические анализаторы, например: Технический способ * Биохимический анализотор хитачи – 902 (Япония, “Cobas Mira” Инструкция к прибору, М., 2002). В основе способа лежит энзиматический ультрафиолетовый (УФ) метод для сыворотки крови. Принцип способа: – Глюкоза + АТФ  глюкоза – 6-фосфат + АДФ (катализатор -гексокиназа)
– Глюкоза – 6 – фосфат + НАДФ – глюконат – 6-фосфат + НАДФ + Н
Способ включает: приготовление и стабильность регентов:
R1 – реагент
R2 – реагент
– Приготовление материала: сыворотка, гепаринизированная
– Проведение калибровки. Контроль сыворотки PRECINORMV, PRECIPATHV.
Недостатки способа
1. Использование дорогостоящего автоматического анализотора.
2. Приготовление реагентов.
3. Приборная регистрация и линейность способа.
Известен также способ контроля уровня глюкозы в крови аппаратом Уан Тач Бэйсик Плюс, 113191 Москва А/я 10, отдел “Лайф СКЭН”, Компания “Джонсон и Джонсон” (095.755.8353).
В основе способа лежит определение уровня глюкозы по изменению цвета теста-полосок при нанесении на них капли крови.
Принцип способа:
– подготовка аппарата к работе,
– взятие капли крови из пальца,
– нанесение капли крови на тест-полоску,
– автоматическое определение в капле крови концентрации глюкозы.
Недостатки способа:
1. Дороговизна аппарата.
2. Постоянная очистка аппарата.
3. Применение тест-полосок.
4. Высокая чувствительность аппарата к изменению температуры и влажности.
5. Ошибки в определении концентрации глюкозы.
В качестве прототипа использован глюкозооксидазный способ определения глюкозы в сыворотки крови (Н.И. Журавлева, В.Н. Титов. Инструкция по применению набора реагентов для определения глюкозы глюкозооксидазным методом. М., 2001. Лаборатория ИКК РКНПК МЗ РФ). В основе способа лежит биохимическая реакция: при окислении  -Д0глюкозы кислородом воздуха при каталитическом действии глюкозооксидазы *ГО) образуется эквимолярное количество перекиси водорода. Под действием пероксидазы (ПО) перекись водорода окисляет 4-аминоактипирин (4-ААП) в присутствии фенольных соединений в окрашенное соединение, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации глюкозы в анализируемом образце и измеряется фотографически при длине волны 500 нм.
Недостаток способа:
1. Нарушение нативности сыворотки крови.
2. Использование спектрофотометра.
3. Дороговизна осуществления способа.
Техническим решением задачи является:
– Повышение достоверности контроля за содержанием глюкозы в организме человека.
– Экспрессности и чувствительности.
– Упрощение и дешевизна способа.
Поставленная задача достигается тем, что способ диагностики гипергликемии включает определение глюкозы в сыворотке крови посредством нанесения на предметное стекло с лункой сыворотки крови, заселение биотестера – вольфии бескорневой, выдерживание 40-50 мин, затем микроскопируют в проходящем свете и при наличии изменения формы листеца вольфии и обеднении его хлорофиллом определяют количество глюкозы в сыворотке крови, по которой диагностируют гипергликемию.
Новизна заявляемого предложения обусловлена тем, что биотестеры для тестирования различных патологий и нарушений обменных процессов в организме удобны из-за своей дешевизны, информативности и простоты в использовании. Виды семейства рясковых интенсивно используются как биотестеры различных токсикантов, а вольфия бескорневая – для очистки крови от токсинов [Цаценко Л.В., Малюга Н.Г. Рясковые – биоиндикаторы агроценоза. Краснодар, 2000].
Сущность изобретения поясняется чертежом, где на фиг.1 представлен контроль. Общий вид биотестера – вольфии бескорневой при нормальном уровне глюкозы 4,8 0,9 ммоль/л. Сферическая форма вольфии, интенсивно зеленой окраски с хлорофиллом по всему листецу; на фиг.2 – уровень глюкозы 6,3 ммоль/л. Присутствуют сморщенные формы с хлорофиллом в центре листеца вольфии; фиг.3 – уровень глюкозы 7,0 ммоль/л. Присутствуют единичные сморщенные листецы, лишенные хлорофилла, и обилие листецов шаровидно-овальной формы с хлорофиллом в центре; фиг.4 – уровень глюкозы 7,6 ммоль/л. Присутствует обилие сморщенных листецов, лишенных хлорофилла, и единичные листецы с хлорофиллом в центре; фиг.5 – уровень глюкозы 8,1 ммоль/л. Присутствует обилие сморщенных форм, обедненных хлорофиллом, и единичные формы с хлорофиллом по периферии; фиг.6 – уровень глюкозы 9,1 ммоль/л. Присутствуют сморщенные формы, разорванной формы, лишенные хлорофилла и единичные овально-сморщенные с хлорофиллом в центре; фиг.7 – уровень глюкозы 10,0 ммоль/л. Обилие листецов сморщенной формы с мелкими вкраплениями хлорофилла и листецов без хлорофилла; фиг.8 – уровень глюкозы 11,0 ммоль/л. Преобладают единичные листецы невыдержанной формы с хлорофиллом в центре.
Способ осуществляется следующим образом.
1. У исследуемого пациента берут 1,0 мл крови из вены, центрифигуруют и сыворотку крови наносят на предметное стекло с выемкой.
2. В сыворотку крови расселяют шпателем вольфию бескорневую, которую выдерживают 40-50 мин.
3. Приготовленный препарат микроскопируют в проходящем свете.
4. Наличие гипергликемии осуществляют по двум тест-функциям:
– форме листеца вольфии и присутствию хлорофилла в листеце.
Форма листеца вольфии может представлена следующими показателями: – сморщенная;
– разорванная;
– невыдержанная.
Наличие хлорофилла: – его присутствие в центре листеца;
– его присутствие по периферии,
– его отсутствие в листеце.
Апробация способа подтверждена на 365 больных.
ПРИМЕРЫ КОНКРЕТНОГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ СПОСОБА
Пример 1, фиг.2. Больная У., история болезни (ИБ) №218. Диагноз (Д-з): Ожирение II степени, подозрение на гипергликемию. На фиг.2. представлены сморщенные формы вольфии с хлорофиллом в центре листеца. Технология: из вены больной взято 1,0 мл крови, которая отцентрифугирована и нанесена на предметное стекло с лункой. Шпателем произведено расселение биотестера и через 40 мин препарат микроскопирован в проходящем свете. Видно, что преобладают сморщенные формы вольфии с хлорофиллом в центре листеца, одновременно в сыворотке крови (СК) определен уровень глюкозы, который показал ее превышение и составил 6,3 ммоль/л (норма 4,80,9 ммоль/л). Гипергликемия подтвердилась.
Пример 2, фиг.3. Больная С., ИБ №35. Д-з: Синдром вегетососудистой дистании с преобладанием тонуса симпатической нервной системы. Подозрение на гипергликемию. На фиг.3. присутствуют единичные сморщенные листецы вольфии, лишенные хлорофилла, и обилие листецов шаровидно-овальной формы с хлорофиллом в центре.
Технология: из вены больной взято 1,0 мл крови, которая отцентрифугирована и нанесена на предметное стекло с лункой. Шпателем произведено расселение биотестера и через 45 мин препарат микроскопирован в проходящем свете. Видно, что преобладают сморщенные формы вольфии с хлорофиллом в центре листеца, одновременно в сыворотке крови (СК) определен уровень глюкозы, который показал ее превышение и составил 7,0 ммоль/л (норма 4,80,9 ммоль/л). Гипергликемия подтвердилась.
Пример 3, фиг.4. Больной З., ИБ №501. Д-з: Подозрение на сахарный диабет 2 типа (гипергликемия). На фиг.4. отмечено обилие сморщенных листецов вольфии, лишенных хлорофилла, и единичных листецов с хлорофиллом в центре.
Технология: из вены больного взято 1,0 мл крови, которая отцентрифугирована и нанесена на предметное стекло с лункой. Шпателем произведено расселение биотестера и через 50 мин препарат микроскопирован в проходящем свете. Видно, что преобладает обилие сморщенных листецов вольфии, лишенных хлорофилла, и единичных листецов с хлорофиллом в центре, одновременно в СК определен уровень глюкозы, который показал ее превышение и составил 7,6 ммоль/л (норма 4,80,9 ммоль/л). Гипергликемия подтвердилась.
Пример 4, фиг.5. Больной А., ИБ №345. Д-з: Симпатоадреналовые кризы. Подозрение на гипергликемию. На фиг.5. отмечено обилие сморщенных листецов, обедненных хлорофиллом, и единичных листецов с хлорофиллом по периферии.
Технология: из вены больного взято 1,0 мл крови, которая отцентрифугирована и нанесена на предметное стекло с лункой. Шпателем произведено расселение биотестера и через 40 мин препарат микроскопирован в проходящем свете. Видно, что преобладает обилие сморщенных листецов, обедненных хлорофиллом, и единичных листецов с хлорофиллом по периферии, одновременно в СК определен уровень глюкозы, который показал ее превышение и составил 8,1 ммоль/л (норма 4,80,9 ммоль/л). Гипергликемия подтвердилась.
Пример 5. фиг.6. Больной Б., ИБ №589. Д-з: Болезнь Иценко-Кушинга. Подозрение на гипергликемию. На фиг.6 присутствуют сморщенные листецы разорванной формы, лишенные хлорофилла, и единичные овально-сморщенные с хлорофиллом в центре.
Технология: из вены больного взято 1,0 мл крови, которая отцентрифугирована и нанесена на предметное стекло с лункой. Шпателем произведено расселение биотестера и через 40 мин препарат микроскопирован в проходящем свете. Видно, что присутствуют сморщенные листецы разорванной формы, лишенные хлорофилла, и единичные овально-сморщенные с хлорофиллом в центре, одновременно в СК определен уровень глюкозы, который показал ее превышение и составил 9,1 ммоль/л (норма 4,80,9 ммоль/л). Гипергликемия подтвердилась.
Пример 6, фиг.7. Больной М., ИБ №802. Д-з: Акромегалия. Подозрение на гипергликемию. На фиг.7 присутствует обилие листецов сморщенной формы с мелкими вкраплениями хлорофилла и листецов без хлорофилла.
Технология: из вены больного взято 1,0 мл крови, которая отцентрифугирована и нанесена на предметное стекло с лункой. Шпателем произведено расселение биотестера и через 50 мин препарат микроскопирован в проходящем свете. Видно, что присутствует обилие листецов сморщенной формы с мелкими вкраплениями хлорофилла и листецов без хлорофилла, одновременно в СК определен уровень глюкозы, который показал ее превышение и составил 10,0 ммоль/л (норма 4,80,9 ммоль/л). Гипергликемия подтвердилась.
Пример 7, фиг.8. Больной Т., ИБ №787. Д-з:. Подозрение на сахарный диабет. Mody – диабет. На фиг.8 преобладают единичные листецы невыдержанной формы с хлорофиллом в центре.
Технология: из вены больного взято 1,0 мл крови, которая отцентрифугирована и нанесена на предметное стекло с лункой. Шпателем произведено расселение биотестера и через 45 мин препарат микроскопирован в проходящем свете. Видно, что преобладают единичные листецы невыдержанной формы с хлорофиллом в центре, одновременно в СК определен уровень глюкозы, который показал ее превышение и составил 11,0 ммоль/л (норма 4,80,9 ммоль/л). Гипергликемия подтвердилась.
Преимуществами предлагаемого способа являются:
– Упрощение операции подготовки биологического материала для исследования.
– Интегральная характеристика плазмы крови по нескольким тест-функциям биотестера.
– Отсутствие применения сложных химических реактивов и технических устройств.
– Простота в выполнении и возможность экспресс-диагностики.
– Широкая тиражируемость.
– Воспроизводимость результатов.
Формула изобретения Способ диагностики гипергликемии путем исследования сыворотки крови, отличающийся тем, что сыворотку крови наносят на предметное стекло с лункой, заселяют вольфией бескорневой, выдерживают 40-50 мин, затем микроскопируют в проходящем свете и при наличии изменения формы листеца вольфии и обеднении его хлорофиллом диагностируют гипергликемию. РИСУНКИ
MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 28.08.2004
Извещение опубликовано: 27.05.2006 БИ: 15/2006
|
||||||||||||||||||||||||||
