Патент на изобретение №2228194

(54) СРЕДСТВО, ПРЕДОТВРАЩАЮЩЕЕ РАЗВИТИЕ ГЕМОРРАГИЧЕСКОГО, КРОВЕСВЕРТЫВАЮЩЕГО И ОТЧЕТНО-НЕКРОТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ЯДА ЗМЕИ ПРИ ОТРАВЛЕНИИ ИМ ОРГАНИЗМА

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, конкретнее к неотложной помощи. Предложено применение октреотида – синтетического октапептида, для предотвращения развития геморрагического, кровесвертывающего и отечно-некротического действия яда змей семейства гадюковых и семейства гремучих змей. Действие достигается однократным введением средства. Изобретение обеспечивает универсальность применения, а также исключение опасности развития анафилактического шока. 3 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к неотложной медицине.

Известно применение при отравлении ядами змей геморрагического и гемотоксического действия изотонического раствора хлорида натрия, 5%-ного раствора глюкозы или 10%-ного раствора альбумина. В инфузируемые растворы может быть добавлен преднизолон или гидрокортизон (“Справочник по оказанию скорой и неотложной помощи” /Чазов Е.И., Елисеев О.М. – М., 1988. – С.499-502; “Оказание неотложной помощи” /Под ред. Храмова Ю.А. – Новосибирск. 1991. – С.38-39).

Все эти вещества смягчают проявления интоксикации. Преднизолон и гидрокортизон, кроме того, предупреждают возможную анафилактическую реакцию, если больному будет далее введена специфическая противоядная сыворотка (СПС). Однако, ни одно из указанных средств (кроме СПС) не предотвращает развития геморрагического синдрома, обусловленного действием яда.

Известно применение для лечения отравления ядом змей СПС (Чазов Е.И., Елисеев О.М. Там же). Применение СПС показано при отравлении ядами наиболее опасных змей – кобры, гюрзы, эфы, гадюки. Наиболее эффективны моновалентные сыворотки, содержащие антитела против того или иного яда (например, “анти-кобра”, “анти-гюрза”, “анти-эфа”, “анти-гадюка”).

Специфичность сывороток, являясь их достоинством, представляет и некоторое неудобство для их использования из-за отсутствия универсальности – в тех местностях, где распространены змеи разных видов и родов. На практике моновалентные сыворотки используют для лечения отравления ядами различных змей в пределах одного рода. Например, сыворотку “анти-гюрза” применяют при отравлениях ядом не только гюрзы, но и других гадюк фауны России, хотя и с меньшей эффективностью.

Применение сывороток против ядов змей геморрагического, гемотоксического действия, кроме ряда достоинств, имеет и недостатки. Известно, что у 1-2% больных введение сыворотки может вызвать анафилактический шок, который более опасен, чем отравление змеиным ядом. Поэтому СПС применяют, преимущественно, при оказании помощи укушенным детям в возрасте до 3-4 лет и в редких случаях при тяжелом отравлении у взрослых (Чазов Е.И., Елисеев О.М. Там же). Срок годности сыворотки составляет 2 года.

Сущность изобретения

По механизму действия яды всех змей подразделяют на две основные группы:

1. Яды, преимущественно влияющие на нервную систему – нейротоксические (курареподобные) яды, вызывающие паралич двигательной и дыхательной мускулатуры, угнетение дыхательного и сосудодвигательного центров головного мозга (яд кобры и других змей семейства аспидов, а также яды морских ядовитых змей).

2. Яды, преимущественно вызывающие геморрагическое, кровесвертывающее, отечно-некротическое действие. Они преимущественно влияют на стенки кровеносных сосудов и кровь, вызывают обширные местные и общие кровоизлияния, отек и некроз тканей, внутрисосудистое свертывание крови и другие нарушения, в связи с чем их относят к группе “геморрагических и гемотоксических ядов” (яды гадюковых – гюрзы, эфы, гадюки обыкновенной и др. и яды гремучих змей).

Картина поражения ядами второй группы выглядит следующим образом (наблюдения над людьми, укушенными змеями). Наблюдается глубокое поражение стенок кровеносных сосудов и других тканей в зоне укуса и вдали от него. В коже появляется множество точечных кровоизлияний. Кровоизлияния сливаются, образуя обширные синяки и кровоподтеки, распространяющиеся на большую часть или на всю пораженную конечность (при укусе человека в конечность), а при тяжелых отравлениях – и на туловище. Начиная с 10-15 мин после укуса, отчетливо определяется отек пораженной части тела. Он достигает иногда огромных размеров и захватывает не только всю пораженную конечность, но и значительную часть туловища. Объем тканей в зоне отека увеличивается в 1,5-3 раза. В ткани из сосудов выходит не только плазма крови, но и форменные элементы крови: эритроциты и другие клетки. Происходит большая внутренняя кровопотеря, которая и определяет, в значительной мере, тяжесть состояния больного и исход заболевания. Повреждаются кровеносные сосуды не только в зоне укуса, но и во всех внутренних органах, где также обнаруживается отек тканей и множество мелких кровоизлияний. Создается крайне неблагоприятная для организма пострадавшего ситуация: с одной стороны, резко повреждаются стенки кровеносных сосудов, из-за чего из них легко вытекает кровь, а, с другой стороны, кровь теряет способность свертываться и закупоривать разрушения в стенках кровеносных сосудов. Т.е. геморрагический синдром связан как с геморрагическим действием ядов, так и со свертывающим – развитием синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови, с кратковременной начальной гиперкоагуляцией и последующей длительной и глубокой гипокоагуляцией. В зоне укуса змеи возникают пузыри, наполненные кровянистой жидкостью, омертвение тканей с образованием долго не заживающих язв.

Сущность изобретения состоит в том, что для лечения отравления ядом змеи, вызывающим геморрагическое, кровесвертывающее, отечно-некротическое действие (ядом змеи семейства гадюковых: гюрзы, эфы, гадюки обыкновенной и др.; ядом змеи семейства гремучих змей) предлагается использовать октреотид. Предотвращение развития геморрагического, гемотоксического эффектов достигается однократным введением средства.

По сравнению с раствором хлорида натрия, глюкозы, альбумина предлагаемое средство предотвращает развитие геморрагического синдрома. По сравнению с СПС – при той же эффективности, что и при введении СПС, исключается опасность развития анафилактического шока при однократном введении октреотида, т.к. октреотид, в отличие от сыворотки, представляет собой не белок, а октапептид. Кроме того, предлагаемому средству присуща универсальность – возможность использования при укусе ядами змей различных видов, яд которых вызывает геморрагический синдром. Октреотид имеет более длительный срок годности по сравнению с СПС (5 лет).

Октреотид (“Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств: ежегод. сборник. – ООО “РЛС-2002”. – 2002, вып.9. стр.633-634) – синтетический октапептид, являющийся производным естественного гормона соматостатина, но обладающий более мощным и продолжительным (до 8-12 ч) действием. Выпускается в ампулах и флаконах для подкожного и внутривенного введения. Препарат подавляет патологически повышенную секрецию гормона роста, а также пептидов и серотонина, продуцируемых в гастро-энтеро-панкреатической эндокринной системе. Известны следующие назначения октреотида: акромегалия; облегчение симптомов эндокринных опухолей желудочно-кишечного тракта и поджелудочной железы (карпиноидные опухоли; опухоли, характеризующиеся гиперпродукцией вазоактивного интестинального пептида (ВИПомы); глюкагономы, гастриномы/синдром Золлингера-Эллисона; инсулиномы; опухоли, гиперпродуцирующие рилизинг-фактор гормона роста; рефракторная диарея у больных СПИДом; профилактика осложнений после операций на поджелудочной железе; для остановки кровотечения из варикозно расширенных вен пищевода и желудка у больных циррозом печени.

Неизвестно применение октреотида для предотвращения развития геморрагического синдрома и лечения отравления ядом змеи, вызывающим геморрагическое, кровесвертывающее и отечно-некротическое действие.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения с реализацией назначения

Динамическое наблюдение за эффективностью применения октреотида при отравлении ядом геморрагического действия

Клинико-морфологические исследования были проведены на крысах линии “Вистар” весом 150-200 г. Животные были разбиты на 4 группы по 11 животных в каждой группе. Первая группа была контрольной, остальные -опытными. Животным контрольной группы вводили только яд геморрагического, гемотоксического действия в летальной дозе (яд гадюки обыкновенной), моделируя укус змеи. Животным опытных групп также вводили яд в летальной дозе и, кроме того, вводили октреотид. Октреотид вводили один раз. Животных первой опытной группы забивали через сутки, второй опытной – через трое, третьей опытной группы – через 14 суток. Процедуры введения яда и октреотида, а также характер и динамика наблюдавшихся изменений в контрольной и опытных группах описаны ниже.

Контрольная группа (моделирование отравления змеиным ядом геморрагического, гемотоксического действия). Животным под общим эфирным наркозом производили срединную лапаротомию и под париетальную брюшину передней брюшной стенки с одной стороны (справа или слева) вводили раствор яда гадюки обыкновенной в дозе 0,4 мг/100 г массы тела животного (летальная доза). Через 4-5 мин (здесь и далее указаны промежутки времени, отсчитываемые от момента введения яда) в области инъекции яда развивался отек серозного характера, постепенно увеличивавшийся до 2-2,5 см в диаметре с развитием (через 15-17 мин) геморрагического ободка по периферии отека. Через 20-40 мин появлялись кровоизлияния точечного характера по серозной оболочке внутренних органов, а также кровоизлияния в большом сальнике. К концу третьего часа геморрагический отек распространялся на всю боковую поверхность той стороны передней брюшной стенки (справа или слева), куда был введен яд. В центральной части отека наблюдалась картина сплошного кровоизлияния с признаками развивающегося некроза брюшины и глубже лежащих тканей (мышц). По периферии отека интенсивность имбибиции (геморрагического пропитывания) была менее интенсивной.

Около 50% животных погибло в течение первых трех часов от момента введения яда, в течение которых проводилось наблюдение за динамикой развития отека и изменений во внутренних органах животного при вскрытом животе. У этих животных наблюдали следующие изменения со стороны внутренних органов: печень становилась более темной, а перед гибелью животного – почти черной. Это свидетельствовало о токсическом поражении печени – от токсического гепатита до некроза. Почки также приобретали более темную окраску, становясь рыхлыми, отечными, что соответствует картине токсического нефрита. В легких наблюдались множественные точечные кровоизлияния, сердце приобретало более темную окраску вследствие сосудистого стаза, а в предсердиях наблюдался тромб.

По истечении трехчасового наблюдения брюшная полость у животных зашивалась наглухо. Животные были малоподвижны, заторможены, шерсть у них была взъерошена. Животные не принимали ни пищу, ни воду.

Все животные контрольной группы погибли в течение первых суток от момента введения яда.

При вскрытии этих животных, погибших позже трех часов (большинство их погибло через 5-7 ч после введения яда), было выявлено обширное геморрагическое пропитывание ткани боковой стенки живота, распространявшееся вниз до паховой области и вверх по боковой стенке грудной клетки. На разрезе брюшина, мышца передней брюшной стенки были некротически изменены. Центральная часть отека имела вид сплошной гематомы, по периферии его наблюдались кровоизлияния на отдельных участках на всю толщу боковой стенки живота. По серозной оболочке внутренних органов имелись точечные геморрагические кровоизлияния. Почки были черного цвета, дряблые, печень глинистого характера, что свидетельствовало о развитии некроза в этих органах. В легких и сердце наблюдались точечные кровоизлияния, отечность тканей.

Первая опытная группа животных (суточное наблюдение). По схеме, описанной выше, животным опытной группы также вводили яд. Сразу после введения яда, на другой стороне брюшной стенки животному вводили октреотид (т.е., если яд вводили под париетальную брюшину передней брюшной стенки справа, то под париетальную брюшину передней брюшной стенки слева вводили октреотид). Октреотид вводили в дозе 50 мкг/100 г массы тела. Через 8-15 мин, т.е. позже, чем в контроле, в области инъекции яда развивался серозный отек до 2-2,5 см в диаметре с наличием геморрагического ободка (точечных кровоизлияний). В течение 30-40 мин от введения яда и октреотида серозный отек в области введения яда постепенно увеличивался в размере до 3 см с увеличивающимся равномерно геморрагическим ободком по периферии. К третьему часу диаметр геморрагического отека стабилизировался в пределах 3,5 см. Иногда геморрагическое пропитывание занимало всю площадь отека, представлявшего собой кровоподтек. В отличие от контроля, цвет отека не принимал черный оттенок. К исходу третьего часа от введения появлялись единичные кровоизлияния по серозной оболочке внутренних органов. Имело место незначительное потемнение печени и почек, но ни у одного животного они не приобретали такой темный цвет, как в контроле. Это свидетельствует о нейтрализации токсического действия яда.

Через три часа от введения веществ брюшная полость зашивалась. В первые 1-2 ч после того, как брюшная полость у животных была зашита и они помещены в клетку, животные оставалось малоподвижными, заторможенными, слабо реагировали на внешние раздражители. Шерсть была взъерошенной, животные не принимали пищу и воду. Постепенно животные становились более активными и по истечении суток, их поведение и внешний вид, практически, не отличались от таковых у здоровых животных.

Выживаемость животных через сутки составила около 80% (2 животных погибло).

Через 24 ч (от введения яда и октреотида) под общим эфирным наркозом снимали швы с передней брюшной стенки и производили релапаротомию для изучения дальнейших результатов проведенного лечения. В месте инъекции на париетальной брюшине на фоне серозного отека определялся ободок геморрагической имбибиции ткани в виде точечных кровоизлияний диаметром до 1,5-2 см и по ширине до 1,2 мм. Иногда серозный отек брюшины вниз распространялся до малого таза. Цвет отечных тканей – более бледного характера, чем в контроле, без признаков некроза. Наблюдались некоторые изменения внутренних органов. Печень была отечная, рыхлая, редко – глинистого характера. Почки – несколько более темного оттенка по сравнению с трехчасовым наблюдением, но светлее, чем в контроле; слегка отечные и рыхлые. Картина свидетельствовала о наличии остаточных явлений токсического гепатита, нефрита. Других изменений внутренних органов брюшной и плевральной полостей не было найдено.

Таким образом, суточный эксперимент на животных позволяет сделать следующие выводы:

– введение октреотида приводит к 80% выживаемости животных;

– местно процесс носит ограниченный характер – в опыте геморрагический отек не превышает 1,5 см, в то время как в контроле он носит обширный характер, распространяясь на всю боковую поверхность с переходом на грудную стенку и вглубь на всю толщину ткани. В отличие от контроля, в опыте отсутствует некроз;

– изменения со стороны внутренних органов носят характер остаточных проявлений в виде отека (отечного гепатита, отечного нефрита).

Вторая опытная группа (трехсуточное наблюдение).

Характер и динамика изменений у животных этой группы в течение первых трех часов от введения веществ, когда брюшная стенка не ушивалась, были аналогичны тем, что наблюдались в первой опытной группе. Через сутки от введения геморрагического яда и октреотида выжило 10 животных. Как показали эксперименты, животные, выжившие в первые сутки, далее в течение срока наблюдения почти все остаются живыми.

Через трое суток от введения веществ животным под эфирным наркозом проводили релапаротомию по старому рубцу со снятием лигатурных швов. В области инъекции раствора змеиного яда наблюдался серозный отек брюшины диаметром 1,5-2 см с наличием точечных кровоизлияний на ободке. Выпота в брюшной полости не наблюдалось, что свидетельствовало об отсутствии воспалительного процесса во внутренних органах. Печень и почки были обычного цвета, но несколько рыхловатые (отечные) – остаточные явления отравления ядом. Со стороны других органов изменений найдено не было. Поведение и внешний вид животных не отличались от поведения и внешнего вида здоровых животных.

Третья опытная группа (срок наблюдения – 14 суток).

В течение первых суток погибло 2 животных. Остальным 9 животным через 14 суток под эфирным наркозом производили релапаротомию и исследовали внутренние органы и местные изменения в области инъекции змеиного яда. В области инъекции яда имелся отек брюшины серозного (не геморрагического) характера. Выпота в брюшной полости не было. При ревизии печени, почек и других органов брюшной и плевральной полостей макроскопических изменений не обнаружено. Поведение и внешний вид животных не отличались от поведения и внешнего вида здоровых животных.

Проведенные эксперименты показывают, что применение октреотида приводит к 80% выживаемости животных, а изменения со стороны внутренних органов носят минимальный характер. Поведение и внешний вид животных, отравленных змеиным ядом геморрагического, гемотоксического действия, и пролеченных октреотидом, не отличается от поведения и внешнего вида здоровых животных.

Формула изобретения

1. Применение октреотида в качестве средства, обладающего свойствами предотвращать развитие геморрагического, кровесвертывающего и отечно-некротического действия яда змеи при отравлении им организма.

2. Применение по п.1, отличающееся тем, что ядом является яд змеи семейства гадюковых.

3. Применение по п.2, отличающееся тем, что ядом является яд гадюки обыкновенной.

4. Применение по п.1, отличающееся тем, что ядом является яд змеи семейства гремучих змей.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 09.07.2006

Извещение опубликовано: 10.06.2007 БИ: 16/2007