Патент на изобретение №2225007

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИСХОДА СЕПСИСА У НОВОРОЖДЕННЫХ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, в частности к неонатологии, и может быть использовано для прогнозирования исхода сепсиса у новорожденных. Сущность изобретения состоит в том, что у новорожденного с диагностированной септической инфекцией в сыворотке крови исследуют уровни цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10. Обнаружение в сыворотке крови уровня ИЛ-4 ниже 5,2 пг/мл и уровня ИЛ-10 выше 145 пг/мл позволяет прогнозировать неблагоприятный исход сепсиса. Техническим результатом является разработка высокочувствительного метода прогнозирования исхода септической инфекции у новорожденных с наибольшей степенью вероятности и в максимально ранние сроки.

Изобретение относится к области медицины, в частности к неонатологии, и найдет использование для прогнозирования исхода септической инфекции у новорожденных.

Предлагаемый способ прогнозирования исхода сепсиса у новорожденных с дыхательными расстройствами и перинатальным поражением центральной нервной системы может использоваться в неонатологии, педиатрии и реаниматологии, дополняя известные методы лабораторной диагностики, позволяя своевременно и обоснованно назначать патогенетическую терапию, тем самым повышая выживаемость больных и сокращая сроки лечения.

Наиболее тяжелая ситуация сложилась в отделениях реанимации и интенсивной терапии, где находятся дети из группы высокого риска, определяемой основным заболеванием, материнским анамнезом, повышенной восприимчивостью к инфекциям.

Актуальность клинико-лабораторного мониторинга течения сепсиса связана со значительным возрастанием летальности в группах с тяжелыми формами заболевания, с реализацией процесса в формы септического шока и полиорганной недостаточности. В этой связи фактор времени приобретает решающее значение для принятия решения о начале проведения неотсроченных и патогенетически оправданных мероприятий, направленных на купирования тяжелых форм сепсиса.

В настоящее время известны следующие методы прогнозирования исхода септической инфекции.

Способ прогнозирования течения сепсиса у детей (В.В. Эстрин, А.Ф. Комаров, 1994, патент РФ 2022268), основанный на подсчете в мазке крови у детей с сепсисом количества аномальных форм эритроцитов (сфероцитов).

Способ прогнозирования возможности генерализации инфекции при ожоговой болезни (Сидоркин В.Г., 1999, патент РФ 2134419) путем определения свободнорадикального потенциала нейтрофилов.

Способ прогнозирования гнойно-септических осложнений в посттравматическом периоде (Масютин В. А. и соавт., 1999, патент РФ 2132065), путем исследования соотношения лимфоцитов и моноцитов, вычислением коэффициента прогноза сепсиса во временном промежутке 24-48 часов.

Недостатки перечисленных методов: исследуемые параметры занимают продолжительное время, трудоемки, полученные данные не всегда своевременны, достоверность исследования связана с многократным забором крови ребенка. Интерпретация полученных результатов не находится в соответствии с современными представлениями о патогенезе, стадийности и ведущих пусковых механизмах сепсиса.

Прототипом предлагаемого изобретения выбран способ прогнозирования исхода инфекционно-воспалительного процесса, предложенный А.Л. Костюченко, А. Н. Бельских, А.Н. Тулупов “Интенсивная терапия послеоперационной раневой инфекции и сепсиса”, /СПб, “Фолиант”, 2000, с.37/. Сущность способа состоит в том, у пациента проводится количественное определение С-реактивного белка (СРБ) с помощью любого из методов: турбудиметрии, нефелометрии, иммуноферментного анализа, радиальной иммунодиффузии и так далее. Повышение концентрации СРБ в сыворотке крови более 200 мг/л свидетельствует о развитии системной воспалительной реакции инфекционного генеза, а высокие цифры СРБ (200 мг/л и более) в течение 7-10 суток и более коррелируют с неблагоприятным исходом септического процесса.

Недостатком прототипа является низкая точность и чувствительность способа. По данным литературы чувствительность определения СРВ составляет 60%, специфичность 50% (Anwer S.K., Mustafa S. Rapid identification of neonatal sepsis. JPMA J. Pak. Med. Assoc. 2000 Mar; 50 (3)P. 94-98). Кроме того, ряд авторов указывают на ненадежность СРВ – как диагностического маркера при ранней диагностике новорожденного сепсиса, например Ronnestad A, Abrahamsen TG, Gaustad P, Finne PH. C-reactive protein (CRP) response patterns in neonatal septicaemia. APMIS 1999 Jun; 107(6): 593-600. И, кроме того, необходимость неоднократного исследования в течение длительного времени (7-10 суток) делает проблематичным использование данного способа у новорожденных для своевременной верификации прогноза исхода септического процесса.

Указанные недостатки устраняются в заявляемом изобретении.

Задачей изобретения является разработка более совершенного, высокочувствительного метода диагностики исхода септической инфекции у новорожденных.

Поставленная задача решается тем, что у новорожденных через каждые 12 часов после установления диагноза сепсиса методом иммуноферментного анализа (ИФА) определяют противовоспалительные доиммунные цитокины – интерлейкин-4 (ИЛ-4) и интерлейкин-10 (ИЛ-10) в сыворотке крови и при концентрациях ИЛ-4 ниже 5,2 пг/мл и ИЛ-10 выше 145 пг/мл прогнозируют неблагоприятный исход сепсиса.

Подтверждение неблагоприятного прогноза исхода заболевания позволяет усилить терапию септической инфекции назначением более эффективных антибактериальных средств, проведением дезинтоксикационной и заместительной терапии препаратами гипериммунной плазмы и иммуноглобулинов.

Цитокины или интерлейкины это класс молекул, обладающих регуляторной активностью, которые принимают участие в межклеточных взаимодействиях в иммунологических реакциях в ответ на внедрение чужеродного микробного агента. Выработку доиммунных цитокинов стимулируют непосредственно инфекционные микроорганизмы в моноцитах/ макрофагах, кератиноцитах кожи и других клетках барьерной ткани.

По данным литературы существует взаимосвязь материнской инфекции, особенностей течения родов, возникновения ишемии реперфузии в различных органах и тканях и цитокинового статуса новорожденных детей (Leviton A., Paneth N., Reuss M.L. et al. “Maternal Infection, Fetal Inflammatory Response, and Brain Damage in Very Low Birth Weight Infants.” Pediatric Research 45 (5), 1999). Учитывая это, а также то, что именно интерлейкины являются ведущей составляющей “медиаторного взрыва”, лежащего в основе септического шока, мониторинговое определение цитокинов в крови новорожденных с сепсисом позволит с высокой степенью вероятности прогнозировать исход заболевания.

Работоспособность изобретения подтверждается следующими конкретными примерами.

Пример 1.

Ребенок Р., вторых суток жизни, история болезни 11/1217. Тяжесть состояния ребенка при переводе из родильного дома в реанимационное отделение была обусловлена проявлениями дыхательной недостаточности (ДН), а также появлением ранних признаков генерализованной септической инфекции в виде мраморности кожных покровов, гепато- и спленомегалии, появлением лейкоцитоза с нейтрофильным сдвигом до юных форм в лейкоцитограмме периферической крови. В связи с этим ребенок переведен на искусственную вентиляцию легких (ИВЛ) и транспортирован в отделение реанимации. Наряду с проведением традиционных общеклинических методов исследования, при поступлении и через каждые 12 часов (до купирования клинико-лабораторных признаков сепсиса) в сыворотке крови исследовался уровень ИЛ-4 и ИЛ-10 путем выполнения следующих действий.

У новорожденного в стерильных условиях берут 1 мл венозной крови, центрифугируют 3 мин при 5000 об/мин. 100 мкл полученной сыворотки вносят в микротитражные лунки планшет от набора для определения ИЛ-4 и ИЛ-10.

Определение производят с помощью наборов для определения ИЛ-4 и ИЛ-10 методом ИФА. Оптическую плотность цветной реакции регистрируют на фотометре (Labsystems Multiskan Plus, Финляндия) при длине волны 450 нм по методике, прилагаемой к прибору.

Подсчет результатов осуществляется с помощью программного обеспечения прибора многофункциональный ридер фирмы “Victor Wallac” (Финляндия).

В результате проведенных исследований были получены следующие цифры интерлейкинов сыворотки крови новорожденного: ИЛ-4 – 45 пг/мл; ИЛ-10 – 20 пг/мл. Через 12 часов были получены результаты: ИЛ-4 – 41 пг/мл; ИЛ-10 – 24,4 пг/мл. Еще через 12 часов были получены результаты: ИЛ-4 – 37,3 пг/мл; ИЛ-10 – 18,3 пг/мл.

Обнаружение цифр ИЛ-10 ниже 145 пг/мл и ИЛ-4 выше 5,2 пг/мл у новорожденного с сепсисом свидетельствовало о прогнозе благоприятного исхода септического процесса, что явилось основанием для продолжения в прежнем объеме проводимой интенсивной терапии.

На третьи сутки проведения интенсивной терапии у новорожденного отмечалось снижение интенсивности клинико-лабораторных признаков сепсиса. Полученные на 5-7 сутки лечения результаты бактериологического исследования явились подтверждением основного клинического диагноза.

Через 18 суток ребенок был отлучен от аппарата искусственной вентиляции легких, диагноз сепсиса у него был снят, еще через 5 дней состоялся перевод пациента в отделение патологии новорожденных.

Таким образом, из данного примера следует, что обнаружение уровня ИЛ-4 выше 5,2 пг/мл и ИЛ-10 ниже 145 пг/мл свидетельствовало о возможном благоприятном прогнозе исхода сепсиса.

Пример 2.

Ребенок Б. , первых суток жизни, история болезни 73/7758. Дыхательная недостаточность (ДН) развилась сразу же после рождения, что было расценено как проявление внутриутробной пневмонии. Ребенок переведен на искусственную вентиляцию легких (ИВЛ) в отделение реанимации. Несмотря на проводимое лечение, с первых часов жизни у ребенка наблюдалось ухудшение состояния пациента за счет нарастания клинико-лабораторных проявлений септической интоксикации. Сразу же после поступления проведено исследование уровня ИЛ-4 и ИЛ-10, выявившее следующие уровни данных цитокинов сыворотки крови новорожденного: ИЛ-4 – 4,1 пг/мл; ИЛ-10 – 391 пг/мл.

Обнаружение цифр ИЛ-10 выше 145 пг/мл и ИЛ-4 ниже 5,2 пг/мл у новорожденного с сепсисом свидетельствовало о возможном неблагоприятном прогнозе исхода септического процесса, что явилось основанием для усиления терапии септического процесса назначением более эффективных антибактериальных средств, проведением дезинтоксикационной и заместительной терапии препаратами гипериммунной плазмы и иммуноглобулинов.

Через 8 часов после поступления у ребенка отмечалось нарастание расстройств центральной и периферической гемодинамики, потребовавших применения плазмозамещающих растворов и вазопрессоров. Данное ухудшение состояния было расценено как тяжелый сепсис, септический шок.

Проведенные через 12 часов повторные исследования уровня данных интерлейкинов выявило их следующие уровни: ИЛ-4 равно 3,6 пг/мл; ИЛ-10 равно 185 пг/мл. Еще через 12 часов: ИЛ-4 равно 2,9 пг/мл; ИЛ-10 равно 212 пг/мл.

Полученные в дальнейшем результаты бактериологического обследования крови, материала из зева и трахеи выявили рост бактериальной микрофлоры и также явились подтверждением основного клинического диагноза.

На 4-5 сутки у ребенка наступило клиническое улучшение. Ребенок отлучен от искусственной вентиляции легких на 14-е сутки и на 19-е сутки жизни переведен для дальнейшего лечения в отделение патологии новорожденных. При переводе признаки бактериальной инфекции отсутствуют.

Таким образом, из данного примера следует, что обнаружение уровня ИЛ-4 менее 5,2 пг/мл и ИЛ-10 более 145 пг/мл свидетельствовало о возможном неблагоприятном прогнозе исхода сепсиса, переходе процесса в тяжелый сепсис, с присоединением шока и полиорганной недостаточности, что послужило основанием для своевременного усиления патогенетической терапии, начатой до клинической реализации признаков тяжелого сепсиса и септического шока, с последующим купированием ранних проявлений дисфункции органов и клинико-лабораторных признаков генерализованного инфекционного процесса.

Исследование уровня интерлейкинов в крови у 27 новорожденных, получающих интенсивную терапию, показало, что точность заявляемого способа составляет 92,3%.

Исходя из вышеизложенного, заявляемый способ прогнозирования исхода септической инфекции у новорожденных по сравнению с существующими имеет следующие преимущества:
1. Способ позволяет диагностировать прогноз септической инфекции в фазе, предшествующей развитию тяжелого сепсиса и полиорганной недостаточности, позволяя своевременно усилить проводимую интенсивную терапию.

2. Способ относится к экспресс-диагностике (время выполнения 2 часа).

3. Предлагаемый способ обладает высокой точностью и найдет широкое применение не только в отделениях реанимации, но и в других педиатрических стационарах.

Формула изобретения

Способ прогнозирования исхода сепсиса у новорожденных путем анализа крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют цитокины ИЛ-4 и ИЛ-10 и при концентрациях ИЛ-4 ниже 5,2 пг/мл и ИЛ-10 выше 145 пг/мл прогнозируют неблагоприятный исход септического процесса.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 03.09.2004

Извещение опубликовано: 20.05.2006 БИ: 14/2006