Патент на изобретение №2225003

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИДИОПАТИЧЕСКОЙ ДИЛАТАЦИОННОЙ КАРДИОМИОПАТИИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии и кардиохирургии. Проводят исследование миокарда, при этом исследуют биоптаты миокарда, которые окрашивают азотно-кислым серебром, в препаратах определяют ядра кардиомиоцитов, в ядрышках которых отсутствуют Ag-гранулы, и при их количестве более 10% диагностируют идиопатическую дилатационную кардиомиопатию. Способ обеспечивает высокую специфичность и точность диагностики идиопатической дилатационной кардиомиопатии без использования сложных и дорогостоящих технических средств.

Изобретение относится к области медицины, а именно кардиологии, кардиохирургии, и может быть использовано при диагностике идиопатической дилатационной кардиомиопатии.

Известен способ диагностики семейной идиопатической дилатационной кардиомиопатии путем генетического анализа мутаций генов белков-саркомеров (Mestroni et al. Europian Heart Journal 1999: 20:93-102 и 21:1825-1832). Способ генетического анализа секвенированием является малодоступным, так как требует дорогостоящего специального оборудования и реактивов.

– фракция выброса левого желудочка менее 45%(в норме больше 60%);
– фракция укорочения левого желудочка менее 25% (в норме 25% и больше);
– конечный диастолический размер левого желудочка более 112-117% по отношению к должному с учетом возраста и площади поверхности тела;
– уменьшение толщины стенок и увеличение размеров полости левого желудочка (толщина задней стенки левого желудочка в норме 1,0-1,1 см, межжелудочковой перегородки – 1,0-1,1 см). Этот способ принят за прототип.

Однако эхокардиографические показатели могут представлять диагностическую ценность для диагностики идиопатической дилатационной кардиомиопатии только при исключении всех других причин дисфункции миокарда. Основным недостатком известного способа является его неспецифичность, что всегда требует проведения дифференциальной диагностики больших сердец с применением специальных дорогостоящих (гистохимических, иммунологических) методов обследования.

Задачей изобретения является создание способа диагностики идиопатической дилатационной кардиомиопатии, обеспечивающего высокую специфичность и точность диагностики без использования сложных и дорогостоящих технических средств.

Поставленная задача решается тем, что в известном способе диагностики идиопатической дилатационной кардиомиопатии, включающем исследование миокарда, согласно изобретению исследуют биоптаты миокарда, которые окрашивают азотнокислым серебром, в препаратах определяют ядра кардиомиоцитов, в ядрышках которых отсутствуют Аg-гранулы, и при их количестве более 10% диагностируют идиопатическую дилатационную кардиомиопатию.

Были проведены исследования, в которых избирательная импрегнация ядрышек кардиомиоцитов солями серебра изучалась при различной патологии сердечно-сосудистой системы, включая идиопатические кардиомиопатии.

Всего обследовано 48 пациентов: 7 практически здоровых лиц, 10 пациентов с ГБ II стадии, 11 больных с ГБ III стадии, 7 больных с идиопатической гипертрофической кардиомиопатией и 13 пациентов с идиопатической дилатационной кардиомиопатией.

Проведенные исследования показали, что в миокарде практически здоровых лиц, больных с ГБ II и III стадии заболевания, не осложненной развитием сердечной недостаточности, ядра кардиомиоцитов, в ядрышках которых отсутствуют Аg-гранулы, не встречаются. При наличии проявлений тяжелой сердечной недостаточности встречаются единичные ядра кардиомиоцитов, в ядрышках которых отсутствуют Аg-гранулы.

При идиопатической гипертрофической кардиомиопатии ядра кардиомиоцитов, в ядрышках которых отсутствуют Ад-гранулы, не встречаются.

При идиопатической дилатационной кардиомиопатии доля ядер кардиомиоцитов, в ядрышках которых отсутствуют Аg-гранулы, составляет не менее 10%.

Полученные результаты дали основание для выбора критерия диагностики идиопатической дилатационной кардиомиопатии и подтвердили высокую специфичность выбранного критерия.

Способ осуществляют, например, следующим образом.

В качестве исследуемого материала могут быть использованы интраоперационный материал миокарда, кардиобиоптаты, экспресс-аутопсии миокарда. Биоптат миокарда помещают в жидкий азот, готовят криостатные срезы толщиной 10 мкм, размещают на предметных стеклах, высушивают на воздухе, фиксируют смесью метиловый спирт/ледяная уксусная кислота в отношении 3:1 в течение 10 минут и ополаскивают дистиллированной водой. После высушивания на воздухе препараты обрабатывают в 2 N растворе муравьиной кислоты в течение 20 минут. По окончании инкубации стекла повторно ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и окрашивают 50%-ным раствором нитрата серебра по стандартной методике (Мамаев Н.Н., Гудкова А.Я., Аминева Х.К., Ковалева В.А. и др. Метод оценки белок-синтезирующей функции кардиомиоцитов человека. Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1989; 5:69-72). Для этого на предметное стекло со срезами миокарда наносят 2 капли 2%-ного водного раствора желатина, приготовленного на 1%-ном водном растворе муравьиной кислоты и 4 капли 50%-ного водного раствора нитрата серебра. Препарат накрывают покровным стеклом и оставляют при комнатной температуре на 1 минуту. Затем переносят в камеру с увлажненным и подогретым до 68-70^oС воздухом и инкубируют 2-3 минуты. Препараты докрашивают 2%-ным раствором краски Гимза, приготовленным на фосфатном буфере (Рh=6,8). Количественный анализ проводят под микроскопом при увеличении 1000. В каждом случае анализируют не менее 100 ядер кардиомиоцитов, в ядрышках которых определяют количество Аg-гранул на ядро. При доле ядер кардиомиоцитов, в ядрышках которых отсутствуют Аg-гранулы более 10%, диагностируют идиопатическую дилатационную кардиомиопатию.

Способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Больной Е. А.Г, 25 лет. Клинический диагноз: идиопатическая дилатационная кардиомиопатия, семейная форма. Кардиомегалия. Относительная недостаточность митрального клапана III ст., относительная недостаточность трикуспидального клапана II ст. Сердечная недостаточность IV ф. кл. NYHA. Тромбоэмболия ветвей легочной артерии. Двухсторонняя нижнедолевая застойная пневмония. Дыхательная недостаточность II ст.

Эхокардиографические данные:
– фракция выброса левого желудочка – 18%;
– фракция укорочения левого желудочка – 6,6%;
– толщина задней стенки левого желудочка – 0,92 см;
– конечный диастолический размер левого желудочка – 6,92 см;
– конечный диастолический объем левого желудочка – 123% (критерий – более 112-117%) по отношению к должному с учетом возраста и площади поверхности тела.

Исследованы экспресс-аутопсии миокарда свободной стенки левого желудочка.

Подготовку препарата и его окрашивание проводили по описанной выше методике. Количество Аg-гранул в ядрах кардиомиоцитов больного варьировало от 0 до 38. Доля ядер, в ядрышках которых отсутствовали Аg-гранулы, составила 43%.

Пример 2. Больной Г.А.В., 43 года. Клинический диагноз: Идиопатическая дилатационная кардиомиопатия, семейная форма. АВ-блокада III ст. С 1997 г. электрокардиостимуляция. Пароксизмальная желудочковая тахикардия. Мерцательная аритмия, тахисистолическая форма. Сердечная недостаточность III ф. кл. NYHA.

Эхокардиографические данные:
– фракция выброса левого желудочка – 23%;
– фракция укорочения левого желудочка – 13%;
– толщина задней стенки левого желудочка – 1,1 см;
– толщина межжелудочковой перегородки – 1,2 см;
– конечный диастолический размер левого желудочка – 6,37 см;
– конечный диастолический объем левого желудочка – 117% по отношению к должному с учетом возраста и площади поверхности тела.

Исследованы кардиобиоптаты межжелудочковой прегородки и верхушечной области ЛЖ. Подготовку препарата и его докрашивание проводили по описанной ранее методике. Количество Аg-гранул в ядрах кардиомиоциттов больного варьировало от 0 до 48. Доля ядер кардиомиоцитов, в ядрышках которых отсутствовали Аg-гранулы, составила 15%.

Пример 3. Больной З.Ю.Д., 45 лет. Клинический диагноз: Ишемическая болезнь сердца. Стенокардия напряжения и покоя IV функционального класса. Постинфарктный кардиосклероз (передне-перегородочной локализации) неизвестной давности. Кардиомегалия. Хр. Постинфарктная аневризма левого желудочка. Пароксизмальная мерцательная аритмия. Сердечная недостаточность IV ф. кл. NYHA.

Эхокардиографические данные:
– фракция выброса левого желудочка – 21%;
– фракция укорочения левого желудочка – 24%;
– толщина задней стенки левого желудочка – 1,09 см;
– толщина межжелудочковой перегородки – 0,85 см;
– конечный диастолический размер левого желудочка – 6,53 см;
– конечный диастолический объем левого желудочка – 119% по отношению к должному с учетом возраста и площади поверхности тела.

Исследованы экспресс-аутопсии свободной стенки левого желудочка. Подготовку препарата осуществляли по описанной ранее методике. Количество Аg-гранул в ядрах кардиомиоцитов больного варьировало от 3 до 26. Ядра кардиомиоцитов, в ядрышках которых отсутствовали Аg-гранулы, не обнаружены.

Использование предложенного способа диагностики идиопатической дилатационной кардиомиопатии обеспечивает высокую специфичность и точность диагностики без использования сложных и дорогостоящих технических средств.

Формула изобретения

Способ диагностики идиопатической дилатационной кардиомиопатии путем исследования миокарда, отличающийся тем, что исследуют биоптаты миокарда, которые окрашивают азотно-кислым серебром, в препаратах определяют ядра кардиомиоцтов, в ядрышках которых отсутствуют Ag-гранулы, и при их количестве более 10% диагностируют идиопатическую дилатационную кардиомиопатию.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 26.03.2005

Извещение опубликовано: 20.08.2006 БИ: 23/2006

NF4A Восстановление действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение

Дата, с которой действие патента восстановлено: 27.06.2008

Извещение опубликовано: 27.06.2008 БИ: 18/2008