Патент на изобретение №2224797

Published by on

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ

(19)

(11)

2224797

(13)

(51) МПК ⁷
_{C12N15/55, C12N15/70, C12N9/82, C12P21/02}

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

Статус: по данным на 09.03.2011 – действует

(21), (22) Заявка: 2002108505/13, 04.04.2002

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

04.04.2002

(45) Опубликовано: 27.02.2004

(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске:
ЕР 0211639 А3, 25.02.1987. WO 87/03618 А, 24.06.1987. US 6251388, 09.06.1998. RU 2162857 С2, 10.02.2001. КОЧЕТОВ Г.А. Практическое руководство по энзимологии. – М., 1980.

Адрес для переписки:

119832, Москва, ул. Погодинская, 10/1, ГУ НИИ биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича РАМН, Н.Н. Соколову

(72) Автор(ы):

Эльдаров М.А.,
Жгун А.А.,
Гервазиев Ю.В.,
Александрова С.С.,
Богуш В.Г.,
Сидорук К.В.,
Свешникова Е.В.,
Борисова А.А.,
Омельянюк Н.М.,
Арчаков А.И.,
Скрябин К.Г.,
Соколов Н.Н.

(73) Патентообладатель(и):

Эльдаров Михаил Анатольевич,
Жгун Александр Александрович,
Гервазиев Юрий Викторович,
Александрова Светлана Серебеджановна,
Омельянюк Наталья Михайловна,
Богуш Владимир Георгиевич,
Сидорук Константин Васильевич,
Борисова Анна Аркадьевна,
Свешникова Елена Васильевна,
Арчаков Александр Иванович,
Скрябин Константин Георгиевич,
Соколов Николай Николаевич,
ГУ НИИ биомедицинской химии им. В.Н.Ореховича РАМН

(54) РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК PACYCLANS ДЛЯ ПЕРЕНОСА И ЭКСПРЕССИИ В КЛЕТКАХ ESCHERICHIA COLI ГЕНА L-АСПАРАГИНАЗЫ ERWINIA CAROTOVORA (ECAR-LANS) И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ECAR-LANS ИЗ БИОМАССЫ ШТАММА E.COLI-ПРОДУЦЕНТА

(57) Реферат:

Изобретение относится к генной инженерии и биотехнологии и может быть использовано в медико-биологической промышленности. Сконструирована рекомбинантная плазмида (pACYCLANS), содержащая природную последовательность гена L-аспарагиназы Erwinia carotovora (ECAR-LANS), которая находится под контролем промотора и терминатора РНК-полимеразы фага Т7 и кодирует полноразмерный предшественник фермента с сигнальным пептидом для экспорта белка в периплазму с последующим процессингом. Путем трансформации указанной плазмидой штаммов Е.coli, способных синтезировать РНК-полимеразу фага Т7, получают штаммы-продуценты, в которых содержание рекомбинантной L-аспарагиназы составляет от 8 до 12%. Для выделения и очистки фермента из биомассы используют разрушение клеток с помощью ультразвуковой дезинтеграции, фракционирование сульфатом аммония и хроматографию на SP-сефарозе FF. Изобретение обеспечивает получение с высоким выходом очищенного препарата L-аспарагиназы. 2 с.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть)н

Формула изобретения

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pACYCLANS для переноса и экспрессии в клетках Escherichia coli гена L-аспарагиназы Erwinia carotovora (ECAR-LANS), имеющая размер 5,8 т.п.н. и состоящая из следующих элементов: фрагмента BamH I-Pst I размером 3 т.п.н. плазмиды рАСYC 177, фрагмента Nhе I-BamH I размером 1,3 т.п.н. плазмиды рBADLANS, содержащего ген ECAR-LANS с нуклеотидной последовательностью SEQ ID №1, фрагмента Bgl II-Xba I размером 0,2 т.п.н. плазмиды рЕТ23(а), фрагмента BamHI-Рst I размером 1,3 т.п.н. плазмиды рЕТ23(а).

2. Способ получения рекомбинантной L-аспарагиназы, включающий стадии культивирования штамма-продуцента в оптимальных для синтеза указанного фермента условиях и последующего выделения и очистки продукта, отличающийся тем, что в качестве штамма-продуцента используют штамм Е.coli, трансформированный рекомбинантной плазмидной ДНК по п.1, а для выделения и очистки фермента применяют разрушение клеток с помощью ультразвуковой дезинтеграции, фракционирование сернокислым аммонием и хроматографию на SP-сефарозе FF.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 05.04.2007

Извещение опубликовано: 10.03.2008 БИ: 07/2008

NF4A Восстановление действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение

Дата, с которой действие патента восстановлено: 20.03.2008

Извещение опубликовано: 20.03.2008 БИ: 08/2008