Патент на изобретение №2224796
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕТЕРОЛОГИЧНОГО СЕКРЕТОРНОГО БЕЛКА
(57) Реферат: Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ секреторного продуцирования чужеродного белка, в частности трансглутаминазы, при помощи коринеформной бактерии. Гетерологичный секреторный белок, в частности трансглутаминазу, продуцируют способом, включающим использование конструкции для экспрессии гена, в которой последовательность гена целевого чужеродного белка, содержащего проструктурную часть, а именно последовательность гена протрансглутаминазы, лигирована ниже последовательности, кодирующей область сигнального пептида из коринеформной бактерии, введение указанной конструкции для экспрессии гена в коринеформную бактерию, культивирование трансформированной таким образом коринеформной бактерии и обработку секретированного из клетки белка протеазой или подобным ферментом для расщепления и удаления прочасти. Предлагаемое изобретение позволяет получить гетерологичный секреторный белок, в частности трансглутаминазу, используемую в пищевой промышленности, при изготовлении фармацевтических препаратов и в других областях. 23 з.п.ф-лы, 6 табл. Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть)н Формула изобретения 1. Способ продуцирования гетерологичного секреторного белка, который включает культивирование коринеформной бактерии, содержащей генную экспрессирующую конструкцию, в которой нуклеотидная последовательность, кодирующая домен сигнального пептида, выделенный из коринеформной бактерии, присоединена ниже последовательности промотора, функционирующей в коринеформной бактерии, и нуклеотидная последовательность, кодирующая гетерологичный секреторный белок, содержащий проструктурную часть, присоединена ниже нуклеотидной последовательности, кодирующей указанный домен сигнального пептида, благодаря чему данная коринеформная бактерия продуцирует и секретирует указанный гетерологичный секреторный белок, а также последующее расщепление и удаление проструктурной части из указанного гетерологичного секреторного белка. 2. Способ по п.1, в котором гетерологичный секреторный белок является трансглутаминазой. 3. Способ по п.1 или 2, в котором сигнальный пептид является сигнальным пептидом поверхностного белка из коринеформной бактерии. 4. Способ по п.1 или 2, в котором сигнальный пептид является сигнальным пептидом поверхностного белка из Corynebacterium glutamicum. 5. Способ по п.4, в котором сигнальный пептид имеет аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:29. 6. Способ по п.1 или 2, в котором сигнальный пептид является сигнальным пептидом поверхностного белка из Corynebacterium ammoniagenes. 7. Способ по п.6, в котором сигнальный пептид имеет аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:2. 8. Способ по любому из пп.1-7, в котором проструктурная часть соответствует проструктурной части трансглутаминазы из актиномицета. 9. Способ по п.8, в котором проструктурная часть имеет последовательность, соответствующую SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4. 10. Способ по п.8, в котором проструктурная часть включает замену, делецию, вставку или добавление, по крайней мере, одной аминокислоты или их комбинацию в аминокислотной последовательности, соответствующей SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4. 11. Способ по п.10, в котором аминокислотная последовательность проструктурной части является одной из аминокислотных последовательностей, соответствующих SEQ ID NO:30-SEQ ID NO:38. 12. Способ по п.1 или 2, в котором расщепление и удаление проструктурной части выполняют при помощи протеазы. 13. Способ по п.12, в котором коринеформная бактерия, продуцирующая и секретирующая гетерологичный секреторный белок, также продуцирует протеазу. 14. Способ по п.13, в котором расщепление и удаление проструктурной части выполняют при помощи протеазы и пептидазы. 15. Способ по п.14, в котором коринеформная бактерия, продуцирующая и секретирующая гетерологичный секреторный белок, также продуцирует протеазу и пептидазу. 16. Способ по п.12 или 14, в котором протеаза происходит из актиномицета. 17. Способ по п.12 или 14, в котором протеаза происходит из Strepromyces albogriseolus. 18. Способ по п.14, в котором пептидаза происходит из актиномицета. 19. Способ по п.14, в котором пептидаза происходит из Streptoverticillium mobaraense. 20. Способ по любому из пп.2-11, в котором трансглутаминаза является трансглутаминазой актиномицета. 21. Способ по п.20, в котором трансглутаминаза является трансглутаминазой Streptoverticillium mobaraense. 22. Способ по п.21, в котором трансглутаминаза имеет аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:5. 23. Способ по п.20, в котором трансглутаминаза является трансглутаминазой Streptoverticillium cinnamoneum. 24. Способ по п.23, в котором трансглутаминаза имеет аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:43. РИСУНКИ
|
||||||||||||||||||||||||||
