Патент на изобретение №2210769

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕТОК ШТЕРНГЕЙМЕРА-МАЛЬБИНА У БОЛЬНЫХ ПИЕЛОНЕФРИТАМИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, в частности к урологии. Способ позволяет повысить точность и информативность определения клеток Штернгеймера-Мальбина у больных пиелонефритами, а также прост в использовании. Проводят забор мочи в объеме 10 мл, центрифугируют в течение 5 мин при 2000 об/мин, из центрифугата удаляют надосадочный слой в объеме 9 мл, к оставшемуся 1 мл осадка мочи добавляют каплю дистиллированной воды и 0,1 мл красящего раствора, содержащего смесь 30 мл уксусной кислоты, 2 мл раствора фуксина в спирте при соотношении компонентов 1:10, разбавленной до 100 мл дистиллированной воды, далее содержимое пробирки смешивают путем встряхивания, выдерживают при комнатной температуре 10 мин, затем вновь перемешивают и далее микроскопируют, качественно оценивая морфологические свойства лейкоцитов мочи и при наличии ярко окрашенных в бордовый цвет обычных размеров клеток с неразличимым ядром определяют неактивные лейкоциты, при наличии неокрашенных увеличенных в 2-3 раза по сравнению с обычными размерами клеток с оттесненным к периферии многодольчатым ядром и броуновским движением гранул зернистости определяют клетки Штернгеймера-Мальбина.

Изобретение относится к области медицины урологии, конкретно к способам определения клеток Штернгеймера-Мальбина у больных пиелонефритами.

Известен способ определения клеток Штернгеймера-Мальбина у больных пиелонефритами, заключающийся в окрашивании препарата центрифугата мочи многокомпонентным красителем с последующей микроскопией [1]. Однако данному способу присуще наличие ряда недостатков, основными из которых являются:
– недостаточная точность и информативность вследствие нестабильности раствора красителя в щелочной среде мочи больных пиелонефритами;
– низкая пропускная способность из-за наличия ряда технических трудностей в приготовлении многокомпонентного красителя.

Новая техническая задача – повышение точности и информативности, упрощение техники выполнения, сокращение времени исследования, расширение арсенала лабораторных методов дифференциации по морфологическим признакам лейкоцитов мочи больных пиелонефритами.

Поставленную задачу решают применением нового способа определения клеток Штернгеймера-Мальбина у больных пиелонефритами, включающим забор мочи, центрифугирование, отделение осадка, его окрашивание и микроскопию, причем проводят забор мочи в объеме 10 мл, центрифугируют в течение 5 мин при 2000 об/мин, из центрифугата удаляют надосадочный слой в объеме 9 мл, к оставшемуся 1 мл осадка мочи добавляют 1 каплю дистиллированной воды и 0,1 мл красящего раствора, содержащего смесь 30 мл уксусной ледяной кислоты, 2 мл раствора фуксина в спирте при соотношении компонентов 1:10, разбавленной до 100 мл дистиллированной водой, далее содержимое пробирки смешивают путем встряхивания, выдерживают при комнатной температуре 10 мин, затем вновь перемешивают и далее микроскопируют, качественно оценивая морфологические свойства лейкоцитов мочи, и при наличии ярко окрашенных в бордовый цвет обычных размеров клеток с неразличимым ядром определяют неактивные лейкоциты, при наличии неокрашенных увеличенных в 2-3 раза по сравнению с обычными размерами клеток с оттесненным к периферии многодольчатым ядром и броуновским движением гранул зернистости определяют клетки Штернгеймера-Мальбина.

Способ осуществляют следующим образом.

Из свежевыпущенной и тщательно перемешанной мочи берут 10 мл в градуированную центрифужную пробирку и подвергают центрифугированию в течение 5 мин при 2000 об/мин. С помощью пипетки удаляют надосадочный слой в объеме 9 мл.

К 1 мл центрифугированного осадка мочи микропипеткой добавляют 1 каплю дистиллированной воды и 0,1 мл красящего раствора, который состоит из смеси уксусной ледяной кислоты в объеме 30,0 мл, раствора фуксина в спирте 1:10 в объеме 2,0 мл, разбавленной до 100,0 мл дистиллированной водой.

Содержимое пробирки смешивают путем встряхивания, выдерживают при комнатной температуре 10 мин, затем снова перемешивают, помещают в камеру Горяева и исследуют под микроскопом при увеличении 400. При этом на фоне ярко окрашенных в бордовый цвет обычных размеров неактивных лейкоцитов с неразличимым ядром визуализируют увеличенные в 2-3 раза по сравнению с обычными размерами неокрашенные активные лейкоциты или клетки Штернгеймера-Мальбина с оттесненным к периферии многодольчатым ядром и броуновским движением гранул зернистости и по общепринятой методике количественно оценивают степень активности воспалительного процесса у больных пиелонефритами [2].

Красящий раствор имеет pH, равное 1,0, что обеспечивает его стабильность в щелочной среде мочи. Применение данного красителя предотвращает преждевременный и необратимый цитолиз лейкоцитов мочи и одновременно приводит к гемолизу эритроцитов, препятствующих изучению качественных свойств лейкоцитов.

Обоснование режима: объем мочи в 10 мл необходим для количественного подсчета в камере Горяева форменных элементов, содержащихся в 1 мл мочи, когда в формуле расчета содержания лейкоцитов учитывается степень разведения осадка в надосадочной жидкости [3]. Центрифугирование мочи в течение 5 мин при 2000 об/мин с последующей эвакуацией надосадочного слоя в объеме 9 мл проводят с целью выделения осадка, содержащего клеточные элементы. Объем осадка центрифугата мочи в 1 мл является оптимальным для микроскопии с качественной оценкой лейкоцитов по предлагаемому способу и количественным подсчетом общепринятым способом в камере Горяева. Добавление дистиллированной воды в объеме 1 капли к центрифугату осадка мочи необходимо для набухания клеток Штернгеймера-Мальбина, что соответствует увеличению их в размерах в 2-3 раза по сравнению с неактивными лейкоцитами. Время экспозиции окраски центрифугированного осадка мочи составляет 10 мин при комнатной температуре. При меньшем времени экспозиции (<10 мин) – неактивные лейкоциты полноценно не окрашиваются, а при большем (>10 мин) окраска неактивных лейкоцитов становится более интенсивной и лейкоцитарные клетки плохо визуализируются.

Способ апробирован при комплексном обследовании 44 человек, из которых у 3 по совокупности общепринятых клинических, анамнестических, инструментальных и лабораторных критериев был верифицирован острый пиелонефрит, у 29 – обострение хронического пиелонефрита, у 12 – предполагалось латентное течение хронического пиелонефрита.

В результате дифференцированной оценки по морфологическим признакам лейкоцитурии предлагаемым способом клетки Штернгеймера-Мальбина были обнаружены при однократном исследовании осадка мочи у всех больных (100%) с острым пиелонефритом, у 27 (89,7%) пациентов с хроническим пиелонефритом. У 8 (66,7%) пациентов с предполагаемым латентным течением хронического пиелонефрита диагноз косвенно подтвердился посредством обнаружения в моче клеток Штернгеймера-Мальбина.

Клинический пример:
Пациентка М. , 35 лет, обратилась 15.08.01. в урологический кабинет поликлиники с жалобами на общее недомогание, повышенную утомляемость, постоянные боли ноющего характера умеренной интенсивности в поясничной области в течение последней недели. Из анамнеза известно, что вышеперечисленные жалобы периодически беспокоят около 6 месяцев; за специализированной медицинской помощью ранее не обращалась.

При осмотре кожные покровы бледные, отмечается незначительная пастозность лица. Температура тела 37,2^oС. Пальпаторно определяется умеренная болезненность в области почек, положительный симптом поколачивання с обеих сторон.

Общий анализ крови от 15.08.01. – умеренное повышение СОЭ (20 мм/час), умеренный лейкоцитоз (8,4109/л) со сдвигом лейкоцитарной формулы влево. Общий анализ мочи от 15.08.01. – моча светлая, мутная, pH 6,0, относительная плотность 1012, лейкоцитурия (20-30 лейкоцитов в поле зрения), бактериурия (++), протеинурия, микрогематурия (10-12 эритроцитов в поле зрения), цилиндры – 0-1 в поле зрения. Проба по Нечипоренко от 16.08.01.: в 1 мл средней порции мочи: лейкоциты – до 8000, эртроциты – до 2000.

В комплексе диагностических мероприятий использовался предлагаемый способ, включающий применение иного красителя, в результате чего в моче пациентки обнаружены клетки Штернгеймера-Мальбина, которые в дальнейшем были подвергнуты подсчету в камере Горяева по общепринятой методике и их количество было диагностически значимым – 400 клеток в 1 мл мочи.

УЗИ почек от 16.08.01.: диффузные изменения почек по типу хронического пиелонефрита в стадии обострения. Умеренная пнелоэктазия правой почки. Правосторонний нефроптоз I степени.

На основании данных клинического, лабораторного и инструментального обследования пациентке был выставлен диагноз: хронический пиелонефрит, стадия обострения. Проведено адекватное этиопатогенетическое и симптоматическое лечение, на фоне которого отмечалась положительная клинико-лабораторная динамика.

Таким образом, практическое применение способа определения клеток Штернгеймера-Мальбина у больных пиелонефритами благодаря использованию стабильного раствора красителя позволяет точно и информативно выявить наличие воспалительного очага в почечной паренхиме у больных с острым и хроническим пиелонефритом посредством определения и дифференциации по морфологическим признакам лейкоцитов мочи, в частности клеток Штернгаймера-Мальбина. Простота и краткосрочность выполнения данного способа, доказанная практическим применением, а также низкая его себестоимость определяют необходимость его использования широким кругом клинических лабораторий.

Источники информации
1. Пытель А. Л. , Голигорский С.Д. Избранные главы нефрологии и урологии/Ленинград:Медицина.-1968.-С.186.

2. Пытель А. Л. , Голигорский С.Д. Избранные главы нефрологии и урологии/Л.: Медицина.-1968.-C.178.

3. Тареева В.М., Сумарокова А.В. Учебное пособие по клиническим лабораторным методам исследования/М.: Медицина.-1975.-С.196.

Формула изобретения

Способ определения клеток Штернгеймера-Мальбина у больных пиелонефритами, включающий забор мочи, центрифугирование, отделение осадка, его окрашивание и микроскопию, отличающийся тем, что проводят забор мочи в объеме 10 мл, центрифугируют в течение 5 мин при 2000 оборотах в минуту, из центрифугата удаляют надосадочный слой в объеме 9 мл, к оставшемуся 1 мл осадка мочи добавляют 1 каплю дистиллированной воды и 0,1 мл красящего раствора, содержащего смесь 30 мл уксусной кислоты, 2 мл раствора фуксина в спирте при соотношении компонентов 1: 10, разбавленной до 100 мл дистиллированной воды, далее содержимое пробирки смешивают путем встряхивания, выдерживают при комнатной температуре 10 мин, затем вновь перемешивают и далее микроскопируют, качественно оценивая морфологические свойства лейкоцитов мочи и при наличии ярко окрашенных в бордовый цвет обычных размеров клеток с неразличимым ядром определяют неактивные лейкоциты, при наличии неокрашенных увеличенных в 2-3 раза по сравнению с обычными размерами клеток с оттесненным к периферии многодольчатым ядром и броуновским движением гранул зернистости определяют клетки Штернгеймера-Мальбина.

RH4A – Выдача дубликата патента Российской Федерации на изобретение

Дата выдачи дубликата: 30.03.2005

Наименование лица, которому выдан дубликат:

Томский военно-медицинский институт (RU)

Наименование лица, которому выдан дубликат:

Белова Екатерина Юрьевна

Наименование лица, которому выдан дубликат:

Гибадулина Ирина Олеговна

Наименование лица, которому выдан дубликат:

Бауэр Валерий Александрович

Наименование лица, которому выдан дубликат:

Гибадулин Наиль Валерианович (RU)

Извещение опубликовано: 10.08.2005 БИ: 22/2005

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 06.11.2003

Извещение опубликовано: 20.04.2006 БИ: 11/2006