|
(21), (22) Заявка: 2002120645/14, 29.07.2002
(24) Дата начала отсчета срока действия патента:
29.07.2002
(45) Опубликовано: 20.06.2003
(56) Список документов, цитированных в отчете о поиске:
ШИЛЛЕР Н. и др. Клиническая эхокардиография. – М.: Мир, 1993, с.92-99. RU 2070329 С1, 10.12.1996. RU 2140639 C1, 27.10.1999. RU 2058554 C1, 20.04.1996.
Адрес для переписки:
197022, фил.1, Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, 6/8, СПбГМУ им. акад. И.П.Павлова, патентный отдел, пат.пов. Г.Б. Сахновской, рег.№ 236
|
(71) Заявитель(и):
Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова
(72) Автор(ы):
Гудкова А.Я., Мамаев Н.Н., Семернин Е.Н., Рыбакова М.Г., Костарева А.А., Шляхто Е.В.
(73) Патентообладатель(и):
Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова
|
(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПЕРТРОФИЧЕСКОЙ КАРДИОМИОПАТИИ
(57) Реферат:
Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии и кардиохирургии. Способ позволяет повысить специфичность диагностики гипертрофической кардиомиопатии и прост в исполнении. Исследуют биоптаты миокарда межжелудочковой перегородки, препараты окрашивают азотно-кислым серебром в присутствии коллоидного раствора, в ядрах кардиомиоцитов и фибробластов определяют количество Ag-гранул и при количестве ядер кардиомиоцитов, содержащих более 30 Ag-гранул на ядро, не менее 20%, и ядер фибробластов, содержащих более 10 Ag-гранул на ядро, не менее 10%, диагностируют гипертрофическую кардиомиопатию.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, кардиохирургии, и может быть использовано как метод скрининга при постановке диагноза гипертрофической кардиомиопатии (ГКМП).
Основным недостатком этого способа является его неспецифичность, что практически исключает дифференциальную диагностику между ГКМП, ГБ и артериальной гипертензией почечного генеза и требует осуществления дополнительных исследований.
Задачей изобретения является создание способа диагностики гипертрофической кардиомиопатии, обладающего высокой специфичностью и не требующего использования сложных и дорогостоящих технических средств.
Поставленная задача решается тем, что в известном способе диагностики гипертрофической кардиомиопатии согласно изобретению исследуют биоптаты миокарда межжелудочковой перегородки, препараты окрашивают азотно-кислым серебром в присутствии коллоидного раствора, в ядрах кардиомиоцитов и фибробластов определяют количество Аg-гранул и при количестве ядер кардиомиоцитов, содержащих более 30 Аg-гранул на ядро, не менее 20%, и ядер фибробластов, содержащих более 10 Аg-гранул на ядро, не менее 10%, диагностируют гипертрофическую кардиомиопатию.
Авторами были проведены исследования, в которых избирательная импрегнация ядрышек солями серебра изучалась в кардиомиоцитах (КМЦ) и стромальных клетках миокарда больных гипертрофической кардиомиопатией, артериальной гипертензией различного генеза и практически здоровых лиц.
Всего было обследовано 46 пациентов: 7 – практически здоровых лиц, масса миокарда 303 24.0; 10 больных ГБ II стадией, масса миокарда 501.0 67.0; 11 – ГБ III, масса миокарда 436.0 47.1; 11 больных артериальной гипертензией почечного генеза, масса миокарда 433.0 72.0; 7 больных ГКМП, масса миокарда 521.0 68.15.
В миокарде практически здоровых лиц (группа контроля) в обобщенной гистограмме распределения ядер кардиомиоцитов в зависимости от числа Аg-гранул ядра с количеством Аg-гранул более 30 отсутствуют. В миокарде больных артериальной гипертензией почечного генеза и гипертонической болезнью II и III стадией заболевания в обобщенной гистограмме распределения ядер кардиомиоцитов в зависимости от количества Аg-гранул доля ядер, содержащих более 30 Аg-гранул, колеблется от 1 до 5%.
Что касается доли ядер фибробластоподобных клеток, содержащих более 10 Аg-гранул, то в миокарде здоровых лиц и больных ГБ II стадией, по нашим данным, они отсутствуют. При гипертонической болезни III, осложненной ХПН (I ст.), присутствовали единичные ядра (1%) и у больных артериальной гипертензией почечного генеза в условиях ХПН (I-III ст.) их доля варьирует от 1 до 6.4%. При этом важно отметить отсутствие достоверных различий по массе миокарда между больными ГКМП и пациентами ГБ и артериальной гипертензией почечного генеза.
У больных гипертрофической кардиомиопатией в гистологическом препарате доля ядер кардиомиоцитов, которые содержат более 30 Аg-гранул, составляла не менее 20%, а доля ядер фибробластов, содержащих более 10 Аg-гранул на ядро, составляла не менее 10%.
Таким образом, проведенные исследования показали высокую специфичность предложенного способа диагностики ГКМП.
Способ осуществляют, например, следующим образом.
В качестве исследуемого материала могут быть использованы интраоперационный материал миокарда, кардиобиоптаты, экспресс-аутопсии миокарда межжелудочковой перегородки. Биоптат миокарда помещают в жидкий азот, готовят криостатные срезы толщиной 10 мкм, размещают их на предметных стеклах, высушивают на воздухе, фиксируют смесью метиловый спирт/ледяная уксусная кислота в отношении 3:1 в течение 10 минут и ополаскивают дистиллированной водой. После высушивания на воздухе препараты обрабатывают в 2N растворе муравьиной кислоты в течение 20 минут. По окончании инкубации стекла повторно ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и окрашивают 50% раствором нитрата серебра по стандартной методике (Howell W.M., Black D.A. Controlled silver staining of nucleolus organizer regions with a protective colloidal developer: a one step method. Experientia. 1980; 36:1014-15) в модификации, предложенной авторами (Мамаев Н.Н., Гудкова А.Я., Аминева Х.К., Ковалева В.А. и др. Метод оценки белок-синтезирующей функции кардиомиоцитов человека. Архив анатомии гистологии и эмбриологии 1989; 5: 69-72). Для этого на предметное стекло со срезами миокарда наносят 2 капли 2% водного раствора желатина, приготовленного на 1% водном растворе муравьиной кислоты и 4 капли 50% водного раствора нитрата серебра. Препарат накрывают покровным стеклом и оставляют при комнатной температуре на 1 мин. Затем его переносят в камеру с увлажненным и подогретым до 68 70 Сo воздухом и инкубируют 2.5 3 минуты. Препараты докрашивают 2% водным раствором краски Гимза, приготовленным на фосфатном буфере (рН 6.8). Количественный анализ проводят под микроскопом при увеличении х1000 (например, Карл-Цейс, Йена). В каждом случае анализируют не менее 100 ядер кардиомиоцитов и фибробластов, определяют количество Аg-гранул на ядро как КМЦ, так и стромальный клетки и при доле ядер кардиомиоцитов, содержащих более 30 Аg-гранул, не менее 20%, а доле ядер фибробластов содержащих более 10 Аg-гранул, не менее 10%, – диагностируют гипертрофическую кардиомиопатию.
Способ иллюстрируется следующим клиническим примером.
Больная Б., 16 лет. Диагноз: Семейная обструктивная гипертрофическая кардиомиопатия. Исследован интраоперационный образец миокарда межжелудочковой перегородки, полученный во время миотомии и миэктомии межжелудочковой перегородки и протезирования митрального клапана. Показанием к операции послужило прогрессирующее течение заболевания, нарастание градиента давления в выходном отделе левого желудочка (88 мм рт. ст.).
Подготовку препарата и его окрашивание проводили по описанной выше методике.
Количество Аg-гранул в ядрышках кардиомиоцитов больной варьировало от 9 до 61 (среднее 29.5 4.0). Доля ядер, содержащих 30 и более Аg-гранул на ядро, составила 38%. Число Аg-гранул в ядрах фибробластов колебалось от 1 до 16 (среднее 8.28 0.48). Доля ядер фибробластов с 11 и более гранулами серебра на ядро достигала 26%.
Таким образом, предлагаемый способ диагностики гипертрофической кардиомиопатии обладает высокой специфичностью и не требует использования сложных и дорогостоящих технических средств.
Формула изобретения
Способ диагностики гипертрофической кардиомиопатии, отличающийся тем, что исследуют биоптаты миокарда межжелудочковой перегородки, препараты окрашивают азотно-кислым серебром в присутствии коллоидного раствора, в ядрах кардиомиоцитов и фибробластов определяют количество Ag-гранул и при количестве ядер кардиомиоцитов, содержащих более 30 Ag-гранул на ядро, не менее 20%, и ядер фибробластов, содержащих более 10 Ag-гранул на ядро, не менее 10%, диагностируют гипертрофическую кардиомиопатию.
MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 30.07.2004
Извещение опубликовано: 10.12.2005 БИ: 34/2005
|
|