Патент на изобретение №2206893

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПЕРТРОФИЧЕСКОЙ КАРДИОМИОПАТИИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии и кардиохирургии. Способ позволяет повысить специфичность диагностики гипертрофической кардиомиопатии и прост в исполнении. Исследуют биоптаты миокарда межжелудочковой перегородки, препараты окрашивают азотно-кислым серебром в присутствии коллоидного раствора, в ядрах кардиомиоцитов и фибробластов определяют количество Ag-гранул и при количестве ядер кардиомиоцитов, содержащих более 30 Ag-гранул на ядро, не менее 20%, и ядер фибробластов, содержащих более 10 Ag-гранул на ядро, не менее 10%, диагностируют гипертрофическую кардиомиопатию.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, кардиохирургии, и может быть использовано как метод скрининга при постановке диагноза гипертрофической кардиомиопатии (ГКМП).

Основным недостатком этого способа является его неспецифичность, что практически исключает дифференциальную диагностику между ГКМП, ГБ и артериальной гипертензией почечного генеза и требует осуществления дополнительных исследований.

Задачей изобретения является создание способа диагностики гипертрофической кардиомиопатии, обладающего высокой специфичностью и не требующего использования сложных и дорогостоящих технических средств.

Поставленная задача решается тем, что в известном способе диагностики гипертрофической кардиомиопатии согласно изобретению исследуют биоптаты миокарда межжелудочковой перегородки, препараты окрашивают азотно-кислым серебром в присутствии коллоидного раствора, в ядрах кардиомиоцитов и фибробластов определяют количество Аg-гранул и при количестве ядер кардиомиоцитов, содержащих более 30 Аg-гранул на ядро, не менее 20%, и ядер фибробластов, содержащих более 10 Аg-гранул на ядро, не менее 10%, диагностируют гипертрофическую кардиомиопатию.

Авторами были проведены исследования, в которых избирательная импрегнация ядрышек солями серебра изучалась в кардиомиоцитах (КМЦ) и стромальных клетках миокарда больных гипертрофической кардиомиопатией, артериальной гипертензией различного генеза и практически здоровых лиц.

Всего было обследовано 46 пациентов: 7 – практически здоровых лиц, масса миокарда 30324.0; 10 больных ГБ II стадией, масса миокарда 501.067.0; 11 – ГБ III, масса миокарда 436.047.1; 11 больных артериальной гипертензией почечного генеза, масса миокарда 433.072.0; 7 больных ГКМП, масса миокарда 521.068.15.

В миокарде практически здоровых лиц (группа контроля) в обобщенной гистограмме распределения ядер кардиомиоцитов в зависимости от числа Аg-гранул ядра с количеством Аg-гранул более 30 отсутствуют. В миокарде больных артериальной гипертензией почечного генеза и гипертонической болезнью II и III стадией заболевания в обобщенной гистограмме распределения ядер кардиомиоцитов в зависимости от количества Аg-гранул доля ядер, содержащих более 30 Аg-гранул, колеблется от 1 до 5%.

Что касается доли ядер фибробластоподобных клеток, содержащих более 10 Аg-гранул, то в миокарде здоровых лиц и больных ГБ II стадией, по нашим данным, они отсутствуют. При гипертонической болезни III, осложненной ХПН (I ст.), присутствовали единичные ядра (1%) и у больных артериальной гипертензией почечного генеза в условиях ХПН (I-III ст.) их доля варьирует от 1 до 6.4%. При этом важно отметить отсутствие достоверных различий по массе миокарда между больными ГКМП и пациентами ГБ и артериальной гипертензией почечного генеза.

У больных гипертрофической кардиомиопатией в гистологическом препарате доля ядер кардиомиоцитов, которые содержат более 30 Аg-гранул, составляла не менее 20%, а доля ядер фибробластов, содержащих более 10 Аg-гранул на ядро, составляла не менее 10%.

Таким образом, проведенные исследования показали высокую специфичность предложенного способа диагностики ГКМП.

Способ осуществляют, например, следующим образом.

В качестве исследуемого материала могут быть использованы интраоперационный материал миокарда, кардиобиоптаты, экспресс-аутопсии миокарда межжелудочковой перегородки. Биоптат миокарда помещают в жидкий азот, готовят криостатные срезы толщиной 10 мкм, размещают их на предметных стеклах, высушивают на воздухе, фиксируют смесью метиловый спирт/ледяная уксусная кислота в отношении 3:1 в течение 10 минут и ополаскивают дистиллированной водой. После высушивания на воздухе препараты обрабатывают в 2N растворе муравьиной кислоты в течение 20 минут. По окончании инкубации стекла повторно ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и окрашивают 50% раствором нитрата серебра по стандартной методике (Howell W.M., Black D.A. Controlled silver staining of nucleolus organizer regions with a protective colloidal developer: a one step method. Experientia. 1980; 36:1014-15) в модификации, предложенной авторами (Мамаев Н.Н., Гудкова А.Я., Аминева Х.К., Ковалева В.А. и др. Метод оценки белок-синтезирующей функции кардиомиоцитов человека. Архив анатомии гистологии и эмбриологии 1989; 5: 69-72). Для этого на предметное стекло со срезами миокарда наносят 2 капли 2% водного раствора желатина, приготовленного на 1% водном растворе муравьиной кислоты и 4 капли 50% водного раствора нитрата серебра. Препарат накрывают покровным стеклом и оставляют при комнатной температуре на 1 мин. Затем его переносят в камеру с увлажненным и подогретым до 6870 С^o воздухом и инкубируют 2.53 минуты. Препараты докрашивают 2% водным раствором краски Гимза, приготовленным на фосфатном буфере (рН 6.8). Количественный анализ проводят под микроскопом при увеличении х1000 (например, Карл-Цейс, Йена). В каждом случае анализируют не менее 100 ядер кардиомиоцитов и фибробластов, определяют количество Аg-гранул на ядро как КМЦ, так и стромальный клетки и при доле ядер кардиомиоцитов, содержащих более 30 Аg-гранул, не менее 20%, а доле ядер фибробластов содержащих более 10 Аg-гранул, не менее 10%, – диагностируют гипертрофическую кардиомиопатию.

Способ иллюстрируется следующим клиническим примером.

Больная Б., 16 лет. Диагноз: Семейная обструктивная гипертрофическая кардиомиопатия. Исследован интраоперационный образец миокарда межжелудочковой перегородки, полученный во время миотомии и миэктомии межжелудочковой перегородки и протезирования митрального клапана. Показанием к операции послужило прогрессирующее течение заболевания, нарастание градиента давления в выходном отделе левого желудочка (88 мм рт. ст.).

Подготовку препарата и его окрашивание проводили по описанной выше методике.

Количество Аg-гранул в ядрышках кардиомиоцитов больной варьировало от 9 до 61 (среднее 29.54.0). Доля ядер, содержащих 30 и более Аg-гранул на ядро, составила 38%. Число Аg-гранул в ядрах фибробластов колебалось от 1 до 16 (среднее 8.280.48). Доля ядер фибробластов с 11 и более гранулами серебра на ядро достигала 26%.

Таким образом, предлагаемый способ диагностики гипертрофической кардиомиопатии обладает высокой специфичностью и не требует использования сложных и дорогостоящих технических средств.

Формула изобретения

Способ диагностики гипертрофической кардиомиопатии, отличающийся тем, что исследуют биоптаты миокарда межжелудочковой перегородки, препараты окрашивают азотно-кислым серебром в присутствии коллоидного раствора, в ядрах кардиомиоцитов и фибробластов определяют количество Ag-гранул и при количестве ядер кардиомиоцитов, содержащих более 30 Ag-гранул на ядро, не менее 20%, и ядер фибробластов, содержащих более 10 Ag-гранул на ядро, не менее 10%, диагностируют гипертрофическую кардиомиопатию.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 30.07.2004

Извещение опубликовано: 10.12.2005 БИ: 34/2005