Патент на изобретение №2204386

(54) КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ НОВООБРАЗОВАНИЯ КОЛЛАГЕНА

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается композиции для новообразования коллагена, содержащей гидроксид кальция, двух- или более атомный спирт и жирное масло растительного или животного происхождения, и в случае необходимости фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, а также касается приготовления композиции, при приготовлении лекарственного средства для стимуляции новообразования коллагена in vivo. Композиция с более продолжительным хранением для наружного влияния на процессы новообразования или регенерации кости путем стимуляции или индукции новообразования коллагена. 2 с. и 11 з.п. ф-лы, 9 ил.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к композиции из жирного масла (с большим содержанием жира) растительного или животного происхождения, гидроксида кальция, двух- или более атомного спирта, а также в случае необходимости фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, приготовлению подобной смеси, применению подобной смеси при новообразовании коллагена, а также применению подобной смеси при приготовлении лекарственного средства для усиления новообразования коллагена in vivo.

Кость состоит приблизительно на 60% из минерального вещества (гидроксилапатита, фосфата кальция) и приблизительно на 40% из органического материала, прежде всего коллагена. Костный метаболизм определяется в основном ансамблем костеобразующих клеток (остеобластов) и разрушающих кость клеток (остеокластов и остеоцитов), активности которых в здоровой кости находятся в сбалансированном соотношении.

Костеобразование (остеогенез) можно разделить на две главные фазы: (а) синтез органической ткани (синтез коллагена) и (b) примыкающее к нему и опосредованное так называемыми везикулами матрикса включение минерального вещества в образованный органический матрикс.

Соединительнотканный коллаген составляет наибольшую часть органического вещества кости. Этот белок состоит из трех спирально скрученных полипептидных цепей, аминокислотный состав которых может варьировать, что приводит к многообразию отдельных типов коллагена. Общей для всех типов коллагена является исключительно высокая механическая прочность коллагенового волокна. Эта прочность основывается на множестве внутри- и межмолекулярных связей коллагеновых волокон, которые образуют таким образом плотную сеть коллагенового волокна соединительной ткани. Костная ткань образуется, как уже упоминалось, путем включения минеральных веществ (гидроксилапатита и фосфата кальция) в эту сеть. Каждому процессу образования новой костной ткани вследствие процессов роста или регенерации предшествует биосинтез коллагена.

До сих пор при травмах костей любого происхождения процесс новообразования кости предоставляют самому себе, поддерживая его разве только антибиотиками и кортикоидами, чтобы предотвратить мешающую процессу заживления возможную опасность инфекции.

Были описаны также несколько факторов, которые могут влиять на образование и регенерацию костей. В основном речь при этом идет о физических факторах (механических и электрических силах), гормонах (например, паратгормоне, кальцитонине, инсулине, глюкокортикоидах, 1,25,OH,D3) и точно не очерченной группе факторов роста белкового характера (остеохинине, остеонектине, “инсулин-подобных факторах роста”) – срав. S. Wallach, L.V. Avioli, J.H. Carstens jun. “Factors in Bone Formation”, Calcified Tissue International 45: 4-6 (1989)). Влияние концентрации ионов водорода (показателя рН) на процессы метаболизма при регенерации костей до сих пор не исследовались в достаточной степени.

Dietz в DE-A-4240713 описывает применение смеси из гидроксида кальция и копытного коровьего жира (oleum pedum tauri) при новообразовании коллагена при повреждении костей. Однако эта композиция из гидроксида кальция и oleum pedum tauri имеет недостаток, заключающийся в том, что ее сохраняемость сильно ограничивается вследствие омыления. Тем самым может быть нанесен вред влиянию этой смеси.

Таким образом, в основе данного изобретения стояла задача обеспечения улучшенной смеси с более продолжительным хранением для нацеленного наружного влияния на процессы новообразования или регенерации кости путем стимуляции или индукции новообразования коллагена.

Неожиданно оказалось, что путем применения композиции из гидроксида кальция, двух- или более атомного спирта и жирного масла растительного или животного происхождения, а также в случае необходимости фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ устойчивость при хранении (сохраняемость) композиции может быть заметно улучшена, и вследствие этого при применении этой композиции в повреждениях или при повреждениях костей имеет место улучшенное по своему объему новообразование коллагена in vivo.

Предметом данного изобретения являются, таким образом, композиции, которые содержат гидроксид кальция, двух- или более атомный спирт и жирное масло (с высоким содержанием жира) растительного или животного происхождения, а также в случае необходимости фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.

Далее, предметом данного изобретения является способ приготовления подобной композиции путем смешивания гидроксида кальция и двух- или более атомного спирта, а также в случае необходимости фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ в жирном масле растительного или животного происхождения.

Далее, предметом данного изобретения является применение подобной композиции для новообразования коллагена.

Далее, предметом данного изобретения является применение подобной композиции при приготовлении лекарственного средства для стимуляции новообразования коллагена in vivo.

Содержащие сульфат бария смеси из гидроксида кальция и oleum pedum tauri применялись в стоматологии в качестве пасты для пломбирования зубных каналов (DE-PS 2932738). Смеси из карбоксилатцемента, гидроксида кальция и oleum pedum tauri также уже применялись в качестве временного укрепляющего средства для временных покрытий обломков зубов (DE-PS 3413864). Задача гидроксида кальция в первом случае заключается в том, чтобы превратить кислую среду в зубных каналах в щелочную, что приводит к устранению воспалений и постепенному образованию барьера твердой ткани. В последнем случае используется профилактическое в отношении пульпита действие гидроксида кальция. Oleum pedum tauri служит в обоих случаях в качестве средства для замеса, чтобы, с одной стороны, гарантировать простое и полное заполнение зубных каналов собственно активным веществом гидроксидом кальция (и контрастным веществом сульфатом бария) и, с другой стороны, чтобы замедлить отверждение временного укрепляющего средства для временных покрытий обломков зубов настолько, чтобы гидроксид кальция мог еще проникнуть через мелкие дентинные канальца к пульпе и там проявить свое действие. В обеих литературных ссылках нельзя найти ни малейшего указания на то, что смесь согласно изобретению способна индуцировать массивное новообразование коллагена в качестве предпосылки регенерации кости.

Согласно данному изобретению новое и применяемое далее выражение “композиция” означает фармацевтическую композицию (в дальнейшем называемую также иногда смесью), которая содержит по меньшей мере вышеупомянутые ингредиенты. Она пригодна, в частности, для назначения людям или животным с целью исследования новообразования коллагена как предпосылки новообразования кости или регенерации кости.

В дальнейшем будут описаны более подробно ингредиенты смеси в соответствии с данным изобретением.

При применении жирных масел растительного происхождения речь может идти об одном или нескольких ингредиентах следующих растительных масел:
соевого, подсолнечного, сурепного, хлопкового, льняного, касторового (клещевинного), пальмового, пальмоядрового, кокосового и оливкового масел.

Предпочтительно, в случае применимых жирных растительных масел речь идет о жирных растительных маслах с высокой стабильностью при нагревании, таких как соевое, подсолнечное и оливковое масла, в частности об оливковом масле.

В случае применимых жирных маслах животного происхождения речь может идти об одном или нескольких ингредиентах следующих масел животного происхождения:
рыбьего жира, копытного жира и жиров крупного и мелкого рогатого скота.

В случае применимых животных масел речь идет предпочтительно о копытных жирах, в частности о копытном коровьем жире (oleum pedum tauri).

В случае применимых двух- или более атомных спиртов речь идет о двухатомных спиртах, таких как этиленгликоль, пропиленгликоль, бутиленгликоль, пентиленгликоль, гексиленгликоль, а также полиэтиленгликолях, таких как диэтиленгликоль, триэтиленгликоль, полипропиленгликолях, таких как дипропиленгликоль, трехатомных спиртах, таких как глицерин, четырехатомных спиртах, таких как треит, эритрит, пятиатомных спиртах, таких как арабит, адонит, ксилит, шестиатомных спиртах, таких как сорбит, маннит, дульцит, или более высокоатомных спиртах.

В качестве двух- или более атомного спирта применяют предпочтительно двух- и трехатомные спирты, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль, бутиленгликоль, пентиленгликоль, гексиленгликоль, а также полиэтиленгликоли, такие как диэтиленгликоль, триэтиленгликоль, полипропиленгликоли, такие как дипропиленгликоль, а также трехатомные спирты, такие как глицерин, особенно глицерин.

Не желая связывать себя какой-либо теорией, авторы изобретения исходят из того, что двух- или более атомный спирт препятствует омылению растительных или животных жирных масел. Благодаря этому смесь удерживается более продолжительно в пригодной для смешивания или кремообразной консистенции, так что может повышаться и улучшаться биосинтез коллагена.

Согласно изобретению готовят кремообразную, пригодную для замеса композицию из отдельных ингредиентов. При этом гидроксид кальция добавляют к композиции обычно в количествах 1-90 мас.%, целесообразно 10-70 мас.%, предпочтительно 20-60 мас.%, в каждом случае в расчете на общий вес композиции.

Жирное масло растительного или животного происхождения добавляют к композиции для создания кремообразной, пригодной для смешивания консистенции обычно в количествах 9-90 мас.%, целесообразно 10-60 мас.%, предпочтительно 20-40 мас.%, в каждом случае в расчете на общий вес композиции.

Двух- или более атомный спирт добавляют к композиции для создания кремообразной, пригодной для смешивания консистенции обычно в количествах 1-40 мас.%, целесообразно 10-40 мас.%, предпочтительно 20-30 мас.%, в каждом случае в расчете на общий вес композиции.

Предметом предпочтительной формы исполнения данного изобретения является вышеупомянутая смесь, содержащая дополнительно МgО. При этом МgО может быть добавлен в количествах 1-90 мас.%, целесообразно 10-70 мас.%, предпочтительно 20-60 мас.%, в каждом случае в расчете на общий вес композиции.

Однако в настоящее время исходят из того, что МgО предпочтительно добавляют в более низких количествах 10-20 мас.%. МgО служит при этом в костном веществе в качестве антацидного средства, которое противодействует кислой среде в кости.

В смеси согласно данному изобретению отношение гидроксида кальция к растительному или животному жирному маслу составляет 5/1 – 1/5, предпочтительно 5/1 – 1/1. Однако может быть необходимым отклонение от предпочтительного соотношения смеси вследствие особенностей раневого повреждения.

Если смесь данного изобретения должна обнаруживать особенно мягкую и гладкую консистенцию, к ней добавляют также белые вазелины. Обычно белые вазелины могут быть добавлены в количествах 1-60 мас.%, целесообразно 10-60 мас. %, предпочтительно 20-40 мас.%, в каждом случае в расчете на общий вес композиции.

Хотя обычно процесс заживления или регенерации кости не требует рентгенологического наблюдения он может быть в некоторых случаях показан этим способом. Для этого случая к смеси данного изобретения может быть добавлен еще сульфат бария в качестве контрастного вещества для рентгена. Однако поскольку сульфат бария позволяет несколько слабее показать новообразование коллагена, добавляют к смеси данного изобретения в случае необходимости столько сульфата бария (например, 10-20 мас.% в расчете на общий вес композиции), что эта смесь становится видимой при рентгеновском исследовании.

Нанесение смеси данного изобретения на повреждение кости или в повреждение кости может производиться в зависимости от ее консистенции при помощи шприца, шпателей или кисточек.

Для смеси данного изобретения имеются многочисленные возможности применения в общей хирургии и челюстной хирургии, ортопедии, имплантологии, травматологии и т.п., так как смесь данного изобретения может быть нанесена на или в повреждения костной ткани, такие как поверхности переломов, просверленные отверстия, полости и т.п., и в каждом месте нанесения тотчас же индуцирует новообразование коллагена in vivo.

Поскольку во многих относящихся к данному вопросу областях медицины работают, как известно, с металлическими фиксирующими средствами, рекомендуется подготовленное для фиксирующего средства отверстие заполнять перед применением фиксирующего средства смесью данного изобретения и лишь затем вводить фиксирующее средство. Благодаря этому можно противостоять неизбежной при подобных мероприятиях первичной атрофии кости и ускорить тем самым вхождение или наложение фиксирующего средства в или на костную ткань и фиксацию самого фиксирующего средства костной тканью.

Избыточная смесь при этом не мешает, так как при введении фиксирующего средства в заполненное смесью отверстие она не выдавливается снова наружу и не диффундирует в губчатый слой.

Само собой разумеется, что смесь данного изобретения или ее ингредиенты должны быть стерильно упакованы и должны стерильно наноситься.

Крайне неожиданным оказалось также еще и то, что смесь данного изобретения даже без антибиотика и/или поддержки кортикоидами противодействует обусловленной костным повреждением воспалительной реакции или быстро ее снимает. Простой состав композиции и ярко выраженная эффективность при новообразовании коллагена in vivo при одновременном подавлении воспаления делают смесь данного изобретения крайне необходимым в будущем средством в костной травматологии.

Следующие ниже примеры должны иллюстрировать более подробно данное изобретение.

Пример 1
А) Сначала должно быть выяснено взаимодействие между смесью данного изобретения и тканью. Так, данные о распределении смеси данного изобретения в костной ткани являются предпосылкой для возможности выдвижения гипотез о возможном механизме действия лекарственного средства. Поэтому эксперименты на культурах ткани являются более обоснованными, чем эксперименты на клеточных культурах, поскольку лишь в культуре ткани можно исследовать клетко-клеточные взаимодействия.

1. Материал и способы
1.1 Материал ткани
Костная ткань человека, которая оставалась при остеотомиях, была предоставлена в распоряжение клиниками.

Эмбриональную костную ткань получали из 10-17-дневных эмбрионов кур (Gallus domesticus).

1.2 Культура ткани
Сразу же после извлечения ткань переносили в среду для транспортировки. Ткань препарировали в стерильных условиях в виде костных фрагментов приблизительно 2 мм³ и после определения веса сразу же использовали для экспериментов.

Для культуры ткани использовали модификацию Ирла минимальной эссенциальной среды (MEM). Игла с 20 мМ Hepes-буфером.

К среде перед началом опыта добавляют 4%-ную фетальную телячью сыворотку и 1%-ный раствор антибиотиков (пенициллин/стрептомицин/амфотерицин В), для экспериментов с мечением дополнительно 1 мМ бета-аминопропионидил, 2 мМ аскорбат натрия и 2-10 мкг изотопа (мкКи-пролин). Культивирование проводят в колбах Эрленмейера на 25 мл при 37^oС в вибрационной водяной бане при наименьшей частоте.

1.3 Определение активности дыхания
Активность дыхания является чувствительным маркером для активности обмена веществ (метаболизма) ткани. Уже малейшие изменения физиологического состояния ткани отражаются в измеряемом изменении активности дыхания.

Для определения активности дыхания использовали датчик Кларка (электроды из платины/серебра в насыщенном растворе хлорида калия). При наложении напряжения 0,8 вольт на электроды электрический ток, возникающий в результате восстановления кислорода, является прямо пропорциональным парциальному давлению кислорода в измерительном растворе (культуральной среде). Подача насыщенной О₂ среды при снижении ниже определенного парциального давления кислорода и оценка результатов производятся с использованием компьютера.

Костная ткань в типичном случае обладает активностью дыхания 2-3 мкл О₂мин^-1г^-1. Активность дыхания находится по порядку величин в области активности дыхания покоящейся мышечной ткани. Типичная кривая дыхания для костной ткани показана на фиг.1. Пилообразный ход кривой дыхания согласно фиг. 1 объясняется тем фактом, что при снижении ниже определенного парциального давления кислорода в измерительном растворе подается свежая, насыщенная кислородом среда.

Фиг. 2 показывает средние показатели потребления O₂ из трех измерений. Потребление кислорода эмбриональной костной тканью (Gallus domesticus) определяли в культуре ткани при помощи датчика Кларка. Потребление кислорода лежит между 3 и 5 мкл O₂мин^-1г^-1. Активность дыхания снижается со временем на приблизительно 50%, что было вполне нормальным для культур ткани.

1.4 Ферментативные тесты
Ферментом, который тесно связан с минерализацией костной ткани, является щелочная фосфатаза. Этот фермент охарактеризован уже давно, но функция этого фермента при минерализации все еще дискутируется. Поскольку существует тесная связь между деятельностью остеобластов и активностью щелочной фосфатазы, щелочная фосфатаза может рассматриваться как маркер активности остеобластов. При росте скелета в подростковом возрасте, при регенерации костей и при заболеваниях, связанных с костным метаболизмом, были обнаружены повышенные активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови.

Активность щелочной фосфатазы определяли в неочищенном экстракте. Для этого 500 мг ткани соединяли с 1 мл буфера для растворения и измельчали ножом. Затем добавляли 500 мг размалывающих бусин и растворяли в течение 20 минут. После центрифугирования неочищенный экстракт подавали для измерений.

Щелочную фосфатазу детектируют посредством превращения п-нитрофенилфосфата в нитрофенол и фосфат. Возникающий при гидролизе нитрофенол является желтым и поэтому может детектироваться в фотометре при длине волны 410 нм.

Фиг. 3 показывает рН-зависимость активности щелочной фосфатазы. Активность щелочной фосфатазы из костей определяли посредством превращения п-нитрофенилфосфата. Максимум активности находится при рН 10,5. При физиологическом рН 7 щелочная фосфатаза имеет только приблизительно 1% максимальной активности.

1.5 Определение рН
На смесь данного изобретения, которая содержит гидроксид кальция, глицерин и oleum pedum tauri в весовых долях 30 мас.%, 30 мас.% или 40 мас.% в расчете на общий вес композиции, или на водную суспензию гидроксида кальция наслаивали 30 мл имидазол/НCl-буфера (1 мМ, рН 7), после чего непрерывно прослеживали показатель рН в растворе при помощи рН-электрода.

При этих измерениях оказалось, что смесь из гидроксида кальция и глицерина в oleum pedum tauri обладает существенно иными свойствами, чем гидроксид кальция в водной суспензии. Фиг.4 показывает, что водная суспензия гидроксида кальция обусловливает немедленный скачок рН до 12 и что в случае смеси глицерин/гидроксид кальция/oleum pedum tauri данного изобретения происходит медленный подъем до показателя рН более 10.

1.6 Определение коллагена
Основная часть органического вещества в костях, как уже упоминалось, состоит из коллагена, белка соединительной ткани. Процесс роста и регенерации кости связаны с новым синтезом коллагена. Затем в этом синтезе имеют место дальнейшие внутри- и внеклеточные процессы с участием коллагена. При применении радиоактивных предшественников коллагена (¹⁴С-пролина) можно точно количественно определить скорость синтеза коллагена в культуре ткани. Таким образом можно количественно и качественно определить влияние лекарственных средств на синтез коллагена.

Общее содержание коллагена определяют при помощи так называемого теста гидроксипролина. Аминокислота гидроксипролин встречается в основном в коллагене, содержанием гидроксипролина в чужеродных белках можно пренебречь. После высвобождения аминокислот из белков при помощи гидролиза (16 ч при 116^oС, 22% НСl) после химической модификации (окисления 4-гидроксипролина до пиррола) количественно определяют общее содержание гидроксипролина в тест-смеси посредством специфической цветной реакции с п-диметиламинобензальдегидом.

1.7 Определение скорости синтеза коллагена
Коллаген в ткани и среде получают по модифицированному Проффом (Proff (1991)) способу Миллера и Ротса (срав. E.J. Miller und R.H. Roths “Methods in Symol.” 82: 33 (1982)). Посредством нескольких стадий осаждения с последующим центрифугированием коллаген определяют количественно с использованием гель-электрофореза с ДСН и последующего сцинтилляционного измерения (определения удельной радиоактивности). Для расчета скорости новообразования определяют измеряемую по включению ¹⁴С-пролина долю коллагена в расчете на общее содержание коллагена, которое определяют посредством теста гидроксипролина.

С использованием количественного определения биосинтеза коллагена можно исследовать влияние препаратов гидроксида кальция на костеобразование (остеогенез).

Количественное определение биосинтеза коллагена производят, как указано в разделе 1.7, по способу радиоактивного мечения коллагена. Компонентом коллагенового волокона является аминокислота пролин. К культуральной среде добавляют точно определенное количество ¹⁴С-меченого пролина. Этот пролин включается во вновь синтезирующиеся во время инкубирования ткани белки. После отделения коллагена от других белков можно посредством определения удельной активности сделать точное количественное заключение о скорости de novo синтеза коллагена.

Выделение коллагена происходит посредством нескольких стадий осаждения с последующим центрифугированием и гель-электрофорезом с ДСН. При специфическом осаждении коллагена коллагеновые волокна, отделенные от других белков, получают путем установления посредством добавления хлорида натрия подходящей концентрации соли, при которой неколлагеновые белки большей частью остаются в растворе, а коллаген выпадает в виде осадка из раствора. При последующем центрифугировании коллаген седиментирует. При гель-электрофорезе с ДСН белки разделяются в зависимости от их величины. Белки мигрируют в электрическом поле через матрикс из высокоструктурированного (сшитого) полимера (акриламида). Малые белки перемещаются быстро через этот матрикс, так как этот матрикс оказывает малым молекулам меньшее сопротивление, а большие белки перемещаются медленнее, так как их подвижность сильно тормозится этим матриксом. После окрашивания белки становятся видимыми в этом геле в виде так называемых “полос”. С использованием внутренних стандартов таким образом можно идентифицировать белки по их величине.

В результате вырезания представляющих интерес полос из геля эти белки становятся доступными для дальнейшего анализа, например для измерения радиоактивности.

Экстракция коллагена:
Посредством добавления 3%-ной уксусной кислоты культуру ткани (срав. раздел 1.2) останавливали. Вышедший в раствор коллаген осаждали 2 М хлоридом натрия в течение ночи при 4^oС и затем получали центрифугированием (1 ч, 24000g, 4^oС). Осадок помещали в 10 мл 3%-ной уксусной кислоты. Посредством механической дезинтеграции блоков ткани в анализ включают вновь синтезированный коллаген, который находится внутри блоков ткани. Остатки ткани получали центрифугированием (1 ч, 45000g, 4^oС). Осадок после солюбилизации разделяли при помощи гель-электрофореза. Для контроля разделения белков их окрашивали в геле.

Гель после проведения электрофореза разрезали поперек направления движения на полосы шириной 5 мм, фрагменты геля переносили в сцинтилляционные флаконы и считали в сцинтилляционном счетчике.

На фиг.5 показано сравнение между жизнеспособной и денатурированной нагреванием тканью.

Это сравнение на фиг.5 представлено посредством распределения радиоактивности в геле. Коллаген как относительно большой белок можно обнаружить в области, удаленной от старта на 2 см.

Полосе коллагена, которая обнаруживается окрашиванием при помощи Кумасси, можно путем сопоставления приписать специфическую радиоактивную полосу.

Фиг.5 – мечение 1, головка бедра, губчатый слой, пол мужской, 45 лет:
Различие производительности синтеза коллагена между жизнеспособной и денатурированной нагреванием ткани (СРМ: импульсы в минуту). Здесь показано распределение радиоактивности в геле. Полоса коллагена находится в области, которая удалена приблизительно на 2 см от старта. Полоса коллагена обнаруживается только у жизнеспособной ткани, т.е. обнаруженной в геле радиоактивности соответствует новый синтез коллагена во время инкубирования.

Жизнеспособная ткань обнаруживает детектируемую производительность синтеза коллагена, убитая ткань уже не показывает никакой активности метаболизма. Это показывает, что обнаруженный радиоактивный коллаген действительно является результатом нового синтеза коллагена в культуре ткани, а не является неспецифическим связыванием радиоактивного пролина с белками костной ткани. Для всех опытов использовали сравнимое количество материала ткани (приблизительно 100 мг).

Обнаружены дополнительные радиоактивно меченые полосы меньшей величины, в случае которых может идти речь о продуктах распада коллагена. Распад коллагена в культуре ткани можно наблюдать прежде всего в экспериментах мечения после 4 дней инкубации. В меньшей степени присутствует также радиоактивно меченый белок в геле, который не мог быть полностью удален посредством осаждений.

Устойчивость костной ткани к слабощелочному рН обнаруживается из эксперимента, параллельного эксперименту, описанному на фиг.5. В случае параллельного эксперимента физиологический Hepes-буфер культуральной среды (рН 7,4) заменяли бикарбонатным буфером (рН 8,0). При этом оказалось, что подщелачивание культуральной среды до рН 8,0 не приводило к какому-либо измеримому различию производительности синтеза коллагена в сравнении с рН 7,4. До рН 8,5 нельзя было наблюдать никакого повышенного новообразования коллагена в сравнении с самопроизвольным новообразованием коллагена.

Фиг. 6-9 показывают количества новообразованного коллагена в опытных исходных смесях с различными смесями данного изобретения в сравнении с контрольными смесями без этой смеси или без одновременного применения двух- или более атомного спирта. Различие вновь синтезированных количеств коллагена в контроле и в опытной смеси выражено в процентах. 0% обозначает отсутствие увеличенного в сравнении с контролем вновь синтезированного количества коллагена; 100% обозначает в два раза увеличенное в сравнении с контролем новообразование коллагена под влиянием смеси данного изобретения.

Из фиг.6 следует, что в четырех экспериментах под влиянием смеси глицерин/гидроксид кальция/oleum pedum tauri (состав: 30 мас.% Са(ОН)₂, 30 мас.% глицерина, 40 мас. % oleum pedum tauri) синтез коллагена в сравнении с контролем повышается до величины между 100 и 120%. Это повышение является значимым, так как экспериментально обусловленные колебания производительности синтеза коллагена лежат в области от 10 до 20%, определенные под влиянием смеси глицерин/гидроксид кальция/oleum pedum tauri повышения лежат, в противоположность этому, между 100 и 120%. Кроме того, заметно также повышение производительности синтеза коллагена в сравнении со смесью, не содержащей глицерин.

Из фиг. 7 следует, что в четырех экспериментах под влиянием смеси пропиленгликоль/гидроксид кальция/oleum pedum tauri (состав: 30 мас.% Са(ОН)₂; 30 мас. % пропиленгликоля, 40 мас.% oleum pedum tauri) синтез коллагена в сравнении с контролем повышается до величины между 100 и 120%. Это повышение является значимым, так как экспериментально обусловленные колебания производительности синтеза коллагена лежат в области от 10 до 20%, определенные под влиянием смеси полиэтиленгликоль/гидроксид кальция/oleum pedum tauri повышения лежат, в противоположность этому, между 100 и 120%. Кроме того, заметно также повышение производительности синтеза коллагена в сравнении со смесью, не содержащей полипропиленгликоль.

Из фиг.8 следует, что в четырех экспериментах под влиянием смеси глицерин/гидроксид кальция/оливковое масло (состав: 30 мас.% Са(ОН)₂, 30 мас.% глицерина, 40 мас.% оливкового масла) синтез коллагена в сравнении с контролем повышается до величины между 100 и 120%. Это повышение является значимым, так как экспериментально обусловленные колебания производительности синтеза коллагена лежат в области от 10 до 20%, определенные под влиянием смеси глицерин/гидроксид кальция/оливковое масло повышения лежат, в противоположность этому, между 100 и 120%. Кроме того, заметно также повышение производительности синтеза коллагена в сравнении со смесью, не содержащей глицерин.

Из фиг.9 следует, что в четырех экспериментах под влиянием смеси глицерин/гидроксид кальция/оксид магния/oleum pedum tauri (состав: 20 мас.% Са(ОН)₂, 20 мас. % глицерина, 20 мас.% оксида магния, 40 мас.% oleum pedum tauri) синтез коллагена в сравнении с контролем повышается до величины между 100 и 140%. Это повышение является значимым, так как экспериментально обусловленные колебания производительности синтеза коллагена лежат в области от 10 до 20%, определенные под влиянием смеси глицерин/гидроксид кальция/оксид магния/oleum pedum tauri повышения лежат, в противоположность этому, между 100 и 140%. Кроме того, заметно также повышение производительности синтеза коллагена в сравнении со смесью, не содержащей глицерин и МgО.

Пример 2
В тесте устойчивости при хранении, при котором приведенные далее смеси после приготовления в виде пригодной для замешивания или кремообразной массы хранили при комнатной температуре и влажности воздуха окружающей среды, было установлено, что сохранение желательной консистенции смеси при совместном применении двух- или более атомного спирта в сравнении с пробами без спирта может быть продлено самое меньшее на 50% периода сохраняемости (см. таблицу).

Примененные смеси:
1) Смесь глицерин/гидроксид кальция/oleum pedum tauri (30 мас.%/30 мас. %/40 мас.%).

2) Смесь пропиленгликоль/гидроксид кальция/oleum pedum tauri (30 мас. %/30 мас.%/40 мас.%).

3) Смесь глицерин/гидроксид кальция/оливковое масло (30 мас.%/30 мас. %/40 мас.%).

Формула изобретения

1. Фармацевтическая композиция для новообразования коллагена, содержащая гидроксид кальция, жирное масло растительного или животного происхождения, а также в случае необходимости фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит двух- или более атомный спирт.

2. Фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что объемное соотношение гидроксид кальция, растительное или животное жирное масло составляет 5/1-1/5.

3. Фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что объемное соотношение гидроксид кальция, растительное или животное жирное масло составляет 1/1.

4. Фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что объемное соотношение гидроксид кальция, растительное или животное жирное масло составляет 5/1.

5. Фармацевтическая композиция по одному из пп. 1-4, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит сульфат бария.

6. Фармацевтическая композиция по одному из пп. 1-5, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит белые вазелины.

7. Фармацевтическая композиция по одному из предыдущих пунктов, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит MgO.

8. Фармацевтическая композиция по одному из пп. 1-7, отличающаяся тем, что двух или более атомный спирт является глицерином.

9. Фармацевтическая композиция по одному из пп. 1-8, отличающаяся тем, что растительное или животное жирное масло является oleum pedum tauri (копытным коровьим жиром).

10. Фармацевтическая композиция по одному из пп. 1-8, отличающаяся тем, что растительное или животное жирное масло является оливковым маслом.

11. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-10, для применения при новообразовании коллагена.

12. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-10, для приготовления лекарственного средства для стимуляции новообразования коллагена in vivo.

13. Способ приготовления фармацевтической композиции по одному из предыдущих пунктов путем смешивания гидроксида кальция и двух- или более атомного спирта в жирном масле растительного или животного происхождения.

РИСУНКИ

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 17.04.2006

Извещение опубликовано: 20.12.2007 БИ: 35/2007