Патент на изобретение №2204385

(54) 2,4-ДИХЛОРБЕНЗИЛОВЫЙ СПИРТ И АМИЛМЕТАКРЕЗОЛ ПРОТИВ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

(57) Реферат:

Предложены композиция для лечения или профилактики ВИЧ-инфекции при вагинальном или ректальном введении и барьерное механическое противозачаточное средство, включающее вышеуказанную композицию. Средство представляет собой смесь 2,4-дихлорбензилового спирта и амилметакрезола. При использовании данного средства происходило синергетическое воздействие компонентов смеси на вирионы. Изобретение расширяет арсенал средств заявленного назначения. 2 с. и 5 з.п.ф-лы, 5 табл.

Изобретение относится к применению составов 2,4-дихлорбензилового спирта (или 2,4-ДХБ спирта (2,4-DCB alcohol)) и амилметакрезола (или АМК (АМС)) для лечения или предотвращения вирусных инфекций Вируса Иммунодефицита Человека (ВИЧ, HIV).

ВИЧ-инфекции в настоящее время обнаружены в каждой стране мира и наиболее распространенным способом ее передачи является сексуальный. Вирус присутствует в виде свободных частиц вируса или в виде внутриклеточных вирионов в моноцитных клетках в сперме. Поэтому вирус относительно легко передается от мужчины к женщине или от мужчины к мужчине. Альтернативно, у инфицированной женщины, вирус, либо в свободном виде, либо связанный в клетке, находится в жидкости в вагине.

Обнаружены живущие (существующие) противовирусы, которые ингибируют важные ферменты вируса, такие как обратная транскриптаза (RT), протеаза или интеграза. Первое клинически используемое лекарственное средство, а именно AZT (или зидовудин (zidovudine, Retrovir^тм)), ингибирует RT фермент вируса. Однако, AZT не лечит инфекцию и, как было показано, не препятствует распространению от персоны к персоне. На самом деле, одной из клинических проблем лекарственного средства, помимо токсичности, является наличие вируса, устойчивого к лекарственному средству, и в фактическом распространении вируса, устойчивого к лекарственному средству. Поэтому, новый подход в борьбе с ВИЧ заключается в поиске новых соединений, которые могут разрушать или инактивировать свободный вирус и/или вирус, связанный клеткой, непосредственно при контакте. Это так называемые вирулицидные соединения. Такие молекулы уже были описаны в прошлом (Oxford et al. in Appl. Microbiology 21, 606-610 (1971)), но они до настоящего времени исследованы незначительно. Поскольку БИЧ вирион окружен липидным бислоем, логично было бы испытать детергенты, подобные молекулам, обладающие поверхностно-активными свойствами, на их способность разрушать или растворять липидную мембрану вируса. Например, не-ионное поверхностно-активное вещество ноноксинол-9 было использовано в клинической практике в качестве разрушающего сперматозоиды средства и имело прямую противо-ВИЧ активность (Malkovsky et in The Lancet 645 (1988)). Однако, оно имело незначительное селективное противо-ВИЧ действие, и поскольку оно вызывает токсичность и разрушение клетки после применения в вагину, его использование фактически может усилить заражение ВИЧ (Kreiss et al. in J.A. M.A. 268 (1992)).

Соединение – 2,4-дихлорбензиловый спирт известно как антисептическое средство, т. е., как антибактериальное и противогрибковое средство, смотри, например, Martindale “The Extra Pharmacopoeia” 28^th edition, page 561, Pharmaceutical Press (1982). Амилметакрезол или 6-пентил-м-крезол также известен как дезинфицирующее средство, используемое в эликсирах для полоскания рта или в таблетках в комбинации с 2,4-дихлорбензиловым спиртом, для лечения инфекций полости рта, смотри, например, Мartindale “The Extra Pharmacopoeia” 28^th edition, page 549, The Pharmaceutical Press (1982). Антисептическое средство определено в Concise Oxford Dictionary (Oxford University Press, Oxford (1982)), как средство, которое противодействует развитию сепсиса, особенно, путем предотвращения роста бактерий. Сепсис определен в Black’s Medical Dictionary (A & С Black,. London (1990)) как отравление продуктами роста микроорганизмов в теле, и общие симптомы, которые сопровождают его, являются симптомами воспаления. Ни 2,4-дихлорбензиловый спирт, ни амилметакрезол, как представлялось ранее, не демонстрировали противовирусную или противоретровирусную активность, в частности, анти-ВИЧ активность.

Неожиданно было обнаружено, что состав 2,4-дихлорбензилового спирта и амилметакрезола имеет противоретровирусную активность и вызывает инактивацию ВИЧ-инфективности.

Согласно настоящему изобретению, предлагается применение композиции, включающей 2,4-дихлорбензиловый спирт и амилметакрезол, для получения лекарственного средства для лечения или предотвращения ВИЧ вирусных инфекций.

В конкретном предпочтительном варианте осуществления данного изобретения обеспечивается применение Strepsil^тм-пoдобного состава 2,4-дихлорбензилового спирта и амилметакрезола для получения лекарственного средства для лечения или предотвращения ВИЧ вирусных инфекций.

Фармацевтическая композиция может быть адаптирована для применения любым целесообразным путем, например, вагинальным, ректальным или оральным путями. Такие композиции можно получить любым способом, известным в данной области фармации, например, путем смешения активного ингредиента с носителем(ями) или наполнителем(ями) в стерильных условиях.

Для получения растворов или сиропов, используемых в технологии приготовления лекарственного средства, наполнители, которые могут быть использованы, включают, например, воду, полиолы и сахара. Для получения суспензий можно использовать масла (например, растительные масла), получая их как суспензии масло-в-воде или вода-в-масле. К другим подходящим наполнителям относятся, например, растительные масла, воски, жиры, полу-твердое вещество, или жидкие полиолы и т.д.

Альтернативно, композицию можно приготовить в виде мази, крема, суспензии, лосьона, порошка, раствора, пасты, геля, распыляемого раствора, аэрозоля или масла. При приготовлении мази, активный ингредиент можно использовать либо с парафиновой основой, либо с смешиваемой с водой основой мази. Активный ингредиент может также входить в состав крема на масло-в-воде основе крема или на основе вода-в-масле. Кроме того, можно получить композиции, в которых активные ингредиенты растворены или суспендированы в подходящем носителе, особенно, в водном растворителе.

Фармацевтические композиции, адаптированные для вагинального применения, могут быть представлены в виде пессариев (вагинальных суппозиториев), тампонов, кремов, гелей, паст, пенных или аэрозольных составов. Фармацевтические композиции, адаптированные для ректального применения, могут быть представлены в виде суппозиториев или клизм.

Также предполагается, что композиции могут включать антиоксиданты, буферы, бактериостатические факторы, растворенные вещества, суспендирующие средства и загустители. Наполнители, которые могут быть использованы, включают, например, воду, спирты, полиолы, глицерин и растительные масла.

Фармацевтические композиции могут содержать консерванты, солюбилизирующие средства, стабилизаторы, увлажняющие средства, эмульгаторы, сластители, красители, одоранты, соли (вещества данного изобретения могут сами по себе форме обеспечиваться в форме фармацевтически пригодной соли), буферы, покрывающие средства или антиоксиданты. Они могут также содержать терапевтически активные средства помимо вещества данного изобретения.

Дозы вещества настоящего изобретения могут варьироваться в широких пределах, в зависимости от возраста и состояния индивидуума, подлежащего лечению, и т.д., и, в конечном счете, врач обычно определяет целесообразные дозы, которые подлежат использованию. Однако, не привязываясь к каким-либо конкретным дозам, предполагается, что для вагинального, ректального и орального применения, эффективная композиция в соответствии с данным изобретением (обычно присутствующая как часть фармацевтической композиции, описанной выше) может быть пригодной для лечения данным изобретением следующим образом:
Пределы подходящей концентрации для соединений, присутствующих в данной композиции, могут быть следующими. 2,4-ди-хлорбензиловый спирт может присутствовать в композиции при концентрации от 10 мкг/мл до 10 мг/мл, предпочтительно от 0,1 мг/мл до 5 мг/мл и особенно от 0,1 мг/мл до 5 мг/мл. Концентрация амилметакрезола в композиции может составлять от 10 мкг/мл до 5 мг/мл, предпочтительно от 50 мкг/мл до 2,0 мг/мл и особенно от 0,05 мг/мл до 1,0 мг/мл. При появлении побочных действий, количество и/или частота применения композиции могут быть уменьшены, в соответствии с обычной клинической практикой.

В контексте настоящего изобретения термин “ВИЧ” распространяется на ВИЧ-1, ВИЧ-2 и другие родственные вирусы, ответственные за медицинское состояние, описанное как Синдром Приобретенного Иммуннодефицита (СПИД, AIDS) или состояние, описанное как СПИД-Родственный Комплекс (ARC). Термин ВИЧ (HIV) – международно принятое определение вирусов, ранее известных под названиями HTLV-III, LAV и ARV.

Альтернативно, изобретение относится к применению 2,4-дихлорбензилового спирта и/или амилметакрезола для получения лекарственного средства для лечения или предотвращения вирусных инфекций, вызванных ВИЧ.

Применение состава 2,4-дихлорбензилового спирта и амилметакрезола на основе кислой сахарозы для получения лекарственного средства для лечения или предотвращения вирусных инфекций, вызванных ВИЧ, также находятся в соответствии с настоящим изобретением.

Кроме того, частью изобретения является обеспечение применения композиции, включающей 2, 4-дихлорбензиловый спирт и/или амилметакрезол, для получения средства для лечения или предотвращения ВИЧ вирусных инфекций. Средство может представлять барьерное механическое противозачаточное средство, или оно может быть адаптировано для вагинального или ректального применения.

Настоящее изобретение, поэтому, также охватывает способ лечения или предотвращения ВИЧ вирусных инфекций, и этот способ включает применение эффективного количества 2,4-дихлорбензилового спирта и/или амилметакрезола.

Композиции данного изобретения могут использоваться для вагинального, ректального или орального применения. Когда путь введения – вагинальный, композиция может обеспечиваться в форме вагинального суппозитория, крема, геля, лосьона или аэрозоля. Когда маршрут введения – ректальный, композиция может обеспечиваться в виде клизмы.

Поскольку идентичный состав использовался на протяжении двух декад или более в виде Strepsil^тм таблеток (лепешек) через рот для борьбы с бактериальными инфекциями, то сделано предположение, что смесь имеет небольшое вредное действие на клетки, относящиеся к слизистой оболочке, в данной области. Предполагают, что если такое отсутствие клеточной токсичности на поверхности, относящейся к слизистой оболочке человека, сопровождается вирулицидными действиями, обнаруженными в настоящее время против ВИЧ, то этот состав или аналогичный состав могли бы использоваться в виде вагинального или ректального применения, или как составляющая в барьерном механическом противозачаточном средстве, для инактивации при контакте ВИЧ, или состав мог бы использоваться орально, для разрушения внеклеточного вируса и, следовательно, для уменьшения или предотвращения распространения вируса. Такая композиция или барьерное механическое противозачаточное средство, содержащее такую композицию, может также содержать другие активные средства, например, средство, разрушающее сперматозоиды. Барьерное механическое противозачаточное средство может также снабжаться смазывающим веществом, таким как например, Вазелин^тм (Vaselin^тм) или KY Jelly^тм.

Барьерные механические противозачаточные средства включают оболочку мужского презерватива или кондом, колпачок и женский кондом или Femidom^тм. Как описано выше, предполагается также, что композиции согласно данному изобретению могут применяться в таких средствах (устройствах) или входить в состав таких средств (устройств).

Таким образом, в других аспектах данное изобретение обеспечивает (а) композицию изобретения для использования при вагинальном, ректальном или оральном применении, или подлежащую применению в барьерном механическом противозачаточном средстве (устройстве), таком как кондом или колпачок; и (b) барьерное механическое противозачаточное средство (устройство), такое как кондом или колпачок, включающее композицию изобретения.

Данное изобретение включает также продукт, содержащий 2,4-дихлорбензиловый спирт и амилметакрезол, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного использования для лечения или предотвращения ВИЧ вирусных инфекций.

Композиции согласно данному изобретению могут также использоваться как часть набора, включающего барьерное механическое противозачаточное средство (устройство), такое как кондом или колпачок, и необязательно, средство, разрушающее сперматозоиды, и/или смазывающее вещество, например Вазелин^тм (Vaseline^тм) или KY Jelly^тм. Средство, разрушающее сперматозоиды, может быть также введено в состав, который может иметь любую удобную форму, такую как гель, крем или аэрозоль, для последующего применения как часть набора.

Предпочтительные признаки изобретения для второго и последующего признаков являются такими же, как для первого аспекта, с известными оговорками (mutatis mutandis).

Изобретение ниже описывается с помощью сопровождающих примеров, которые приводятся с целью иллюстрации и их не следует рассматривать как ограничивающие данное изобретение.

Пример 1: Получение вирулицидной смеси
Вирулицидную смесь для использования в анализах по определению in vitro активности получают следующим образом. Таблетку коммерческого приготовления, содержащую 1,6 мг 2,4-дихлорбензилового спирта (2,4-ДХБ спирта(2,4-DCB alcohol)) и 0,6 мг агугилметакрезола (АМК (АМС)) В. Р., смешивают в 5 мл забуференной слюны. Этот препарат, содержащий активные факторы, известен как вирулицидная смесь.

Пример 1: In vitro активность
Вирус: Лабораторный изолят ВИЧ-1 (HIV-1), MN
Клетки: С8166-клетки
Пробу ВИЧ-1 добавляют к препарату 2,4-дихлорбензилового спирта (2,4-ДХБ спирта (2,4-DCB alcohol)) и амилметакрезола (АМК(АМС)) в 5 мл забуференной слюны (вирулицидная смесь). Соответствующую пробу ВИЧ-1 отдельно добавляют к 5 мл необработанной забуференной слюны (контрольная смесь). Две смеси, содержащие вирус, инкубируют в течение 2, 4, 20 и 60 мин при 37^oС. При этих конкретных периодах времени, пробу вируса отбирают из каждой из этих двух смесей и титруют в чувствительных CS166-клетках на остаточную инфективность вируса. Соединение не токсично для С8166-клеток. Эксперимент повторяют четыре раза, используя различные количества ВИЧ-1 в смеси.

Результаты
Результаты экспериментов показаны в табл. 1 и 2. Количество инфекционного вируса, оставшегося в смеси, выражают как синцитий индуцирующие единицы вируса на мл.

Эксперименты, результаты которых показаны в табл. 1 и 2, делаются путем инкубации двух смесей либо с 10⁶, либо с 10⁵ индуцирующих синцитий единиц ВИЧ-1. Раствор, содержащий препарат 2,4-ДХБ и АМК, вызывает 10³-10⁴-кратное уменьшение инфекционности (синцитий индуцирующая активность) вируса в обоих экспериментах. Заметим, что ВИЧ вызывает слияние клеток (или синцитиев) в чувствительных клетках и это используют как полезную и достоверную оценку инфекционной способности вируса.

Пример 2: Влияние рН на in vitro активность
В дальнейших экспериментах нами исследовано влияние рН на вирулицидное действие смеси. Низкий рН необходим для противо-ВИЧ-активности препарата, но низкий рН сам по себе не уничтожает инфекционность вируса. Инкубация вируса с 30% сахарозой не имеет вирулицидного действия. In vitro данные указывают на удивительную способность смеси двух органических молекул в кислом растворе, содержащем сахарозу и дополнительные ионные элементы, очень существенно понижать инфекционность живого инфекционного ВИЧ-1. Соединения, содержащиеся в препарате, могут действовать сообща с возможным синергическим эффектом (результатами) или они могут иметь раздельные активности. Возможно, что они проявляют свою активность путем связывания с внешними (наружными) спайками (потенциалами действия) вируса, тем самым уничтожая абсорбцию вируса к индикаторной клетке, путем агрегации вируса, путем частичной денатурации спайк-белка, путем действия на липидный бислой или путем стабилизации структуры вируса (Oxford and Thomas in Principles of Bacteriology Virology and Immunology 4 (1990) Published by Edward Arnold).

Противовирусная эффективность смеси может быть улучшена с помощью реформуляции (изменения технологии приготовления лекарственного средства) или добавления сходных молекул, но нынешний состав имеет преимущество обширной клинической базы данных после применения смеси 2,4-дихлорбензилового спирта и амилметакрезола на слизистых поверхностях человека для предотвращения или лечения фарингитов (ангин), вызванных бактериальной инфекцией.

Пример 3: Вирулицидная активность 2,4-ДХБС и АМК составов
Также были исследованы, по отдельности, противо-вирусные действия различных концентраций АМК и ДХБС. Результаты этих экспериментов представлены в табл. 3-5.

Вещества и способы
Тест-реагент
АМК приобретают в виде темно-желтого раствора и сначала растворяют в ДМСО (DMSO) и затем последующие растворы готовят в искусственной слюне (2,4 мг/мл, 0,12 мг/мл, 0,06 мг/мл, 0,03 мг/мл, 0,015 мг/мл и 0,0075 мг/мл). ДХБС (DCBA) приобретают в виде белого порошка и растворяют в ДМСО (стандартно, 100 мг/мл) и последующие растворы готовят в искусственной слюне (4,8 мг/мл, 2,4 мг/мл, 0,24 мг/мл, 0,12 мг/мл, 0,06 мг/мл, 0,03 мг/мл и 0,015 мг/мл).

Культуры клеток
Для вирулицидных тестов используют С8166 линию Т-клеток человека и клетки культивируют в RPMl 1640 среде (от Sigma Chemical Company, UK), дополненной 10% инактивированной теплом (56^oC, 30 мин) фетальной телячьей сывороткой (FCS), 2 мМ L-глутамина, 100 Е/мл (U/ml) пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 210^-5 м 2-меркаптоэтанола (Sigma Chemical Cоmpany, UK).

Биомасса вируса
В анализах используют хранимый в жидком азоте лабораторный штамм ВИЧ-1_111B (HlV_lllB), содержащий супернатант, свободный от клеток культуры ткани. До и после замораживания, штамм вируса титруют, чтобы гарантировать правильное значение TCID₅₀, требуемое для конкретного анализа.

Пример 3: Вирулицидный анализ (Анализ на способность инактивировать вирус)
Лимфобластоидные С8166 клетки помещают в 96-луночные планшеты (180 мкл/лунка) при концентрации 510⁵ на мл, в шести репликатах (дублируя шесть раз), в питательной среде. Различные концентрации соединений смешивают с высоким титром ВИЧ-1_111В (10⁶ TCID₅₀) при соотношении 1:10 (всего 1 мл) и инкубируют при 37^oC в течение от 1 до 15 мин. После инкубации, смесь вирус/соединение (20 мкл) добавляют к верхнему ряду С8166 клеток. Затем, после смешения, 20 мкл переносят в следующие серии лунок и т.д., получая серии десятикратного разбавления от 10^-1 до 10, и планшеты инкубируют при 37^oC в течение 10 дней.

Формула изобретения

1. Композиция, предназначенная для лечения или профилактики ВИЧ-инфекции при вагинальном или ректальном введении, которая содержит 2,4-дихлорбензиловый спирт и амилметакрезол.

2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что включает 2,4-дихлор-бензиловый спирт и амилметакрезол в кислой сахарозной основе.

3. Композиция по п. 1 или 2, представленная в форме пессария, клизмы, крема, геля, аэрозоля или лосьона.

4. Композиция по п. 1 или 2, для применения в барьерном механическом противозачаточном средстве.

5. Композиция по п. 4, где противозачаточное средство представляет собой кондом или колпачок.

6. Барьерное механическое противозачаточное средство, включающее композицию, содержащую 2,4-дихлорбензиловый спирт и амилметакрезол.

7. Барьерное механическое противозачаточное средство по п. 6, отличающееся тем, что оно представляет собой кондом или колпачок.

РИСУНКИ

PC4A – Регистрация договора об уступке патента Российской Федерации на изобретение

Прежний патентообладатель:

Дзе Бутс Компани Плс (GB)

(73) Патентообладатель:

Рекитт Бенкизер Хелскэа Интернэшнл Лимитед (GB)

Дата и номер государственной регистрации перехода исключительного права: 28.03.2007 № РД0020138

Извещение опубликовано: 10.05.2007 БИ: 13/2007