Патент на изобретение №2203947
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS LICHENIFORMIS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА, ПРЕДНАЗНАЧЕННОГО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖИВОТНЫХ, ПТИЦЫ И РЫБЫ
(57) Реферат: Изобретение относится к биотехнологии, ветеринарии и может быть использовано для получения препарата из группы пробиотиков. Штамм бактерий Bacillus licheniformis BKM В-2252Д выделен из почвы. Клетки грамположительны, тип дыхания аэробный. Гидролизует глюкозу, мальтозу, сахарозу, оксидазо- и каталазоположительны. При аэробном выращивании утилизирует ацетат и цитрат. Подавляет рост стафилококков, сальмонелл, протея, кандидомикозов, синегнойной палочки и других патогенных микроорганизмов. Штамм используют как производственный для получения пробиотического препарата “Субтилис-Л”. Изобретение обеспечивает быструю нормализацию деятельности желудочно-кишечного тракта животных, птицы и рыб. Перспективен в лечении и профилактике бактериальных инфекций. 1 табл. Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологической промышленности для получения пробиотического препарата, применяемого в ветеринарии при лечении и профилактике желудочно-кишечных заболеваний животных, птицы и рыб. Известен штамм бактерий Bacillus licheniformis 31 (Институт микробиологии и вирусологии им. акад. Д.З. Заболотного НАН Украины), используемый в качестве одного из компонентов бактериального препарата биоспорин, предназначенного для лечения гнойно-септических заболеваний (SU 1722502 А1, кл. А 61 К 39/02, 1989). Известен штамм бактерий Bacillus licheniformis 1C-1 (ВКПМ В-7038), используемый в качестве компонента бактериального препарата, обладающего широким спектром антивирусной и антибактериальной активности (RU 2142287 С1, кл. А 61 К 35/74, 10.12.1999). Однако недостатком данного штамма можно считать особенного проявления его активности в составе комплексного бактериального препарата. Задачей изобретения является выявление нового бактериального штамма Bacillus licheniformis, обладающего антибактериальной активностью по отношению к широкому спектру Гр+ и Гр-микроорганизмов, продуцирующего антибиотик широкого спектра действия, использования его в качестве бактериального пробиотического препарата для ветеринарных целей и рыбного хозяйства. Технический результат достигается при осуществлении изобретения – повышение эффективности лечения, усвояемости кормов, повышение продуктивности и привесов животных, птицы, рыб. Штамм бактерий Bacillus licheniformis В-1602 депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов ИБФМ им. К.С. Скрябина РАН под В-2252Д. Штамм получен из природного изолята (почва). Подвергался селекции на подавление роста патогенных штаммов: стафилококка, синегнойной палочки, сальмонелл, трихофитов, протея, эпидермитов, кандидомикозов и др. Культурально-морфологические и биохимические свойства штамма Bacillus licheniformis BKM В-2252Д. Грамположительная палочка, способная образовывать споры. Размеры вегетативных клеток 2-5 мкм. Споры одиночные, центральные или овальные, подвижные. Жгутикование – перитрих. Вегетативные клетки Bacillus licheniformis BKM В-2252Д хорошо растут на богатых питательных средах – МПА, МПБ и ПЖА при температурах 50oС, рН 5,0-8,0. На МПА (мясопептонный агар) образует колонии белого цвета. Пигмент в среду не выделяет. Наблюдается рост до 7% NaCl. Гидролизует глюкозу, мальтозу, сахарозу, оксидазо- и каталазоположителен. Несбраживаемые соединения углерода: лактоза, маннит, сахароза. Утилизирует ацетат и цитрат при аэробном выращивании. Штамм нетоксичен для животных, человека и растений. Штамм Bacillus licheniformis BKM В-2252Д продуцирует антибиотик широкого спектра действия, подавляющий стафилококки, грибки и синегнойную палочку. Характеризуется показателями задержки роста тест-культуры, мм (метод перпендикулярных штрихов), представленными в таблице. Для культивирования штамма Bacillus licheniformis ВКМ В-2252Д используют жидкую питательную среду на основе 0,3% ФГМС, рН 6,8-7,0, содержащую 0,2%-ную глюкозу (по сухому веществу), 0,005%-ную аминопептидазу или 0,02%-ную сыворотку крови. Сухую биомассу микроорганизмов предварительно высевают в пробирку с мясопептонным бульоном (МПБ). При появлении видимого роста колонии пересевают на мясопептонный агар в пробирки. Отбирают типичные колонии и пересевают их на жидкую среду МПБ во флаконах. Через сутки выросшую биомассу переносят в 15-литровую бутыль с 9-ю литрами питательной среды и культивируют 22 часа при 37-40oС, получая посевной материал. Питательную среду на основе ФГМС помещают в реактор, стерилизуют, охлаждают и засевают полученным материалом. Проводят аэробное культивирование при рН 6,8-7,2 с поддержкой 40%-ным раствором глюкозы. При достижении концентрации 20 млрд. бактериальных клеток прекращают подачу глюкозы и отключают подачу воздуха при достижении рН 4,6. Полученную культуральную жидкость с биомассой охлаждают до 20oС, перекачивают в емкости или расфасовывают во флаконы. При указанном способе культивирования получают препарат в виде жидкой лекарственной формы, названной “Субтилис-Л”, с содержанием 85-90% спор бактерий Bacillus licheniformis ВКМ В-2252Д. Препарат “Субтилис-Л” безвреден и не содержит посторонней микрофлоры. Безвредность проверена на белых мышах массой тела 18-20 г и на годовиках карпах, которым перорально вводили 1,0 мл препарата. Пробиотическая активность препарата “Субтилис-Л” в одной дозе (15-20) млрд. клеток/мл. Предлагаемый штамм Bacillus licheniformis ВКМ В-2252Д может быть использован как производственный для получения препарата пробиотического действия, рекомендуемого для лечения желудочно-кишечных заболеваний животных, птицы и рыб. Изобретение поясняется примерами. Пример 1. Бактериальная геморрагическая септицемия карпа. В прудовом хозяйстве заболела рыба с клиническими признаками бактериальной геморрагической септицемии. Лабораторный анализ патматериала показал наличие патогенной микрофлоры во внутренних органах рыб. Количество больных рыб (двухлетки карпа) достигало 30% от общего количества. Назначено лечение с добавлением в корм путем его смачивания 3,5 млн. микробных клеток (спор) “Субтилис-Л” на 1 кг живой массы тела рыбы. Корм с “Субтилис-Л” давали рыбе 1 раз в день в течение 7 дней. Через 14 дней после окончания курса лечения установлено, что количество больных рыб уменьшилось до 10%, а признаки острого воспаления остались лишь у отдельных экземпляров. Пример 2. Сохранность цыплят. Проведены производственные испытания “Субтилис-Л” на сохранность цыплят в первые две недели после их посадки. “Субтилис-Л” применялся перорально в жидком виде путем выпаивания с 4%-ным раствором глюкозы и в лиофильно высушенном виде путем добавления в корм. Отход цыплят контрольной группы составил 4,3%. Усредненный отход в опытных группах составил при даче лиофильно высушенного “Субтилис-Л” с кормом – 2,1%, при выпаивании жидкого “Субтилис-Л” – 0,6%. В опытных группах цыплята более интенсивно набирали вес: после первых трех дней для контрольной группы средний вес составил 58 грамм, для опытной – 69 грамм. Пример 3. Сохранность поросят. В хозяйстве наблюдался значительный отход поросят в связи с заболеваниями желудочно-кишечного тракта. Проведенные микробиологические и патологоанатомические исследования выявили несколько видов заболеваний ЖКТ поросят бактериальной этиологии. Назначен курс лечения: применение “Субтилис-Л” перорально сразу после рождения из расчета 1 доза на 3-х поросят на 4%-ной глюкозе в течение 5-7 дней. Курс профилактики: применение “Субтилис-Л” внутрь из расчета 1 доза на 10 новорожденных поросят на 10%-ной глюкозе в течение 3-х дней. Сохранность поросят поднялась на 60% и достигла стабилизации на уровне 94%, который поддерживается на этом уровне профилактикой. Проведенные исследования показали эффективность бактериального препарата “Субтилис-Л” на основе предложенного штамма Bacillus licheni-formis BKM В-2252Д. Формула изобретения
РИСУНКИ
PC4A – Регистрация договора об уступке патента Российской Федерации на изобретение
Номер и год публикации бюллетеня: 33-2003
(73) Патентообладатель:
Дата и номер государственной регистрации перехода исключительного права: 24.09.2003 № 17429
Извещение опубликовано: 27.11.2003
TK4A – Поправки к публикациям сведений об изобретениях в бюллетенях “Изобретения (заявки и патенты)” и “Изобретения. Полезные модели”
Страница: 366
Напечатано: Адрес для переписки:115583, Москва, ул. Воронежская, 8, корп. 3, кв. 224, Г.В. Кулакову
Следует читать: Адрес для переписки: 117556, Москва, Варшавское ш., 74/1, ООО “НИИ Пробиотиков”, генеральному директору Г.В. Кулакову
Номер и год публикации бюллетеня: 13-2003
Код раздела: FG4A
Извещение опубликовано: 20.10.2005 БИ: 29/2005
|
||||||||||||||||||||||||||
