Патент на изобретение №2202798

Published by on




РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ



ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(19) RU (11) 2202798 (13) C2
(51) МПК 7
G01N33/532, G01N33/569
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

Статус: по данным на 07.04.2011 – прекратил действие

(21), (22) Заявка: 2000117884/13, 05.07.2000

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

05.07.2000

(43) Дата публикации заявки: 10.09.2002

(45) Опубликовано: 20.04.2003

(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске:
ЗАГОСКИНА Т.Ю., КАЛИНОВСКИЙ А.И., МАРКОВ Е.Ю., ЕСИНА Н.Л., ГОЛУБИНСКИЙ Е.П. Использование белковополисахаридного антигена бруцелл, меченного частицами коллоидного золота, для обнаружения специфических антител методом дот-иммуноанализа. Клиническая лабораторная диагностика, 1999, № 3, с.39-41. RU 2092853, 10.10.1997. RU 2133469, 20.07.1999. RU 2025732, 30.12.1994.

Адрес для переписки:

664047, г.Иркутск, ул. Трилиссера, 78, НИПЧИ Сибири и ДВ

(71) Заявитель(и):

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока

(72) Автор(ы):

Загоскина Т.Ю.,
Калиновский А.И.,
Голубинский Е.П.,
Докорина А.А.

(73) Патентообладатель(и):

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока

(54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ ПРОТИВОБРУЦЕЛЛЕЗНЫХ АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКАХ КРОВИ МЕТОДОМ ДОТ-ИММУНОАНАЛИЗА


(57) Реферат:

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно к лабораторной диагностике. Способ осуществляется путем приготовления золя серебра и добавления полученного золя к водному раствору белковополисахаридного антигена бруцелл. Далее полученную смесь стабилизируют внесением фосфатного буфера, содержащего сывороточный альбумин, телячью фетальную сыворотку и азид натрия. Способ приготовления диагностикума дешев, технологичен, доступен, позволяет отказаться от дорогостоящего оснащения, обеспечивает высокую чувствительность и специфичность результатов дот-иммуноанализа.


Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для приготовления диагностикума, с помощью которого в дот-иммуноанализе исследуются сыворотки крови на наличие противобруцеллезных антител.

В настоящее время в клинической лабораторной практике для обнаружения противобруцеллезных антител традиционно используют реакции Хеддльсона (РХ), Райта (РА), пассивной гемагглютинации (РПГА), связывания комплемента (РСК), Кумбса (Пинигин А.Ф., Петухова О.С. Методические рекомендации по бруцеллезу. – Иркутск, 1978. – 49 с.). Однако эти реакции недостаточно чувствительны и специфичны, с их помощью выявляется приблизительно 2/3 больных животных или людей. В связи с этим актуальными остаются вопросы совершенствования существующих и разработка новых, более информативных диагностических тест-систем.

Цель изобретения – удешевление, повышение технологичности и доступности способа приготовления диагностикума.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве золя коллоидного металла используют золь серебра, который готовят обработкой раствора азотнокислого серебра равным объемом раствора боргидрида натрия. Созревший золь дробно, в три приема с интервалами по 10 мин, добавляют к водному раствору белковополисахаридного антигена бруцелл. Через 30 мин после добавления последней порции золя реакционную смесь стабилизируют внесением равного объема фосфатного буфера, содержащего бычий сывороточный альбумин, телячью фетальную сыворотку и азид натрия.

Сопоставительный анализ с прототипом показал, что предлагаемое техническое решение отличается от известного тем, что в качестве золя коллоидного металла используют золь серебра, который готовят, восстанавливая серебро из 0,02%-ного водного раствора азотнокислого серебра равным объемом 0,05%-ного водного раствора боргидрида натрия при комнатной температуре и легком встряхивании, через 10-15 мин созревший золь добавляют к раствору белковополисахаридного антигена бруцелл в соотношении по объему 10:1 соответственно, дробно, в три приема с интервалами по 10 мин, через 30 мин после добавления последней порции золя реакционную смесь стабилизируют внесением равного объема фосфатного буфера, содержащего бычий сывороточный альбумин, телячью фетальную сыворотку и азид натрия.

Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения “новизна”.

Проведенный анализ патентной и специальной литературы показал, что предлагаемый способ отличается не только от прототипа, но и от других технических решений в данной и смежных областях. Так, авторы не нашли способ приготовления диагностикума для дот-иммуноанализа на основе бруцеллезного белковополисахаридного антигена, меченного коллоидным серебром, который бы использовался для обнаружения специфических антител. Предлагаемые режимы конструирования диагностикума позволяют достичь поставленной цели – удешевление, повышение доступности и технологичности способа приготовления диагностикума для детекции противобруцеллезных антител в сыворотках крови методом дот-иммуноанализа. При этом не используются дорогостоящие реактивы и оборудование (ультрацентрифуга). Данный диагностикум может производиться и применяться в клинических, ветеринарных и научно-исследовательских лабораториях, занимающихся диагностикой бруцеллеза.

Таким образом, предлагаемый способ приготовления диагностикума для детекции противобруцеллезных антител в сыворотках крови методом дот-иммуноанализа соответствует критериям “изобретательский уровень” и “промышленная применимость”.

Предлагаемый способ приготовления диагностикума для обнаружения противобруцеллезных антител выполняется следующим образом: к 0,0001 г азотнокислого серебра, растворенного в 5 мл дистиллированной воды, добавляют равный объем 0,05%-ного водного раствора боргидрида натрия. Смесь перемешивают 15 мин при комнатной температуре для созревания золя серебра. К 1 мл водного раствора белковополисахаридного антигена (БПА) концентрацией 4 мг добавляют дробно, в три приема, приготовленный золь серебра с интервалами по 10 мин и постоянном легком перемешивании в количестве 5 мл, 3 мл и 2 мл соответственно. Через 30 мин после добавления последней порции золя реакционную смесь стабилизируют внесением равного объема 0,02 М фосфатного буфера рН 7,2, содержащего 2% БСА, 20% телячьей фетальной сыворотки и 0,04% азида натрия.

Пример. К 0,0001 г азотнокислого серебра, растворенного в 5 мл дистиллированной воды, добавляют равный объем 0,05%-ного водного раствора боргидрида натрия. Смесь перемешивают 15 мин при комнатной температуре для созревания золя серебра. К 1 мл водного раствора БПА концентрацией 4 мг добавляют дробно, в три приема, приготовленный золь серебра с интервалами по 10 мин и постоянном легком перемешивании в количестве 5 мл, 3 мл и 2 мл соответственно. Через 30 мин после добавления последней порции золя реакционную смесь стабилизируют в течение 30 мин внесением равного объема 0,02 М фосфатного буфера рН 7,2, содержащего 2% БСА, 20% телячьей фетальной сыворотки и 0,04% азида натрия. Полученный диагностикум использован в дот-иммуноанализе для детекции противобруцеллезных антител в сыворотках крови больных людей и животных. Отмечена высокая чувствительность и специфичность диагностикума, приготовленного по предлагаемой методике. Сыворотки считаются положительными, если специфические антитела в них выявляются в разведении 1:400.

Предлагаемая методика получения диагностикума легко воспроизводима, экономична, технологически проста, не требует специального дорогостоящего оснащения, доступна. Использование диагностикума в дот-иммуноанализе позволяет быстро и качественно осуществлять детекцию противобруцеллезных антител в сыворотках крови.

Диагностикум, приготовленный данным способом, апробирован в дот-иммуноанализе при исследовании 200 сывороток крови людей и животных. Во всех случаях у больных людей и животных с установленным диагнозом острого, хронического или резидуального бруцеллеза обнаружены специфические антитела. При исследовании сывороток крови здоровых людей или животных, а также гетерологичных сывороток противобруцеллезные антитела обнаружены не были, что указывает на высокую специфичность приготовленного диагностикума. Аналогичные результаты получены при параллельном исследовании указанных сывороток в дот-иммуноанализе с БПА, меченным коллоидным золотом. Однако диагностикум на основе серебра дешевле, технологичнее, доступнее, позволяет отказаться от использования дорогостоящих импортных реактивов и оборудования (ультрацентрифуги).

Формула изобретения


Способ приготовления диагностикума для детекции противобруцеллезных антител в сыворотках крови методом дот-иммуноанализа, включающий приготовление золя коллоидного металла и адсорбцию на нем белковополисахаридного антигена бруцелл, отличающийся тем, что в качестве золя коллоидного металла используют золь серебра, который готовят, восстанавливая серебро из 0,02%-ного водного раствора азотнокислого серебра равным объемом 0,05%-ного водного раствора боргидрида натрия при комнатной температуре и легком встряхивании, через 10-15 мин созревший золь добавляют к раствору белковополисахаридного антигена бруцелл в соотношении по объему 10:1, соответственно, дробно, в три приема с интервалами по 10 мин, через 30 мин после добавления последний порции золя реакционную смесь стабилизируют внесением равного объема фосфатного буфера, содержащего бычий сывороточный альбумин, телячью фетальную сыворотку и азид натрия.


MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 06.07.2002

Номер и год публикации бюллетеня: 18-2004

Извещение опубликовано: 27.06.2004


Categories: BD_2202000-2202999