Патент на изобретение №2202794
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) НЕИНВАЗИВНЫЙ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОНИЦАЕМОСТИ КИШЕЧНОЙ СТЕНКИ
(57) Реферат: Изобретение может быть использовано в медицине для неинвазивного определения проницаемости кишечной стенки. Способ заключается в спектрофотометрическом определении отношения содержания маннита и лактулозы в моче после пероральной нагрузочной пробы, основанном на реакции с 2.3.5-трифенилтетразолием. Благодаря способу сокращается время определения и повышается воспроизводимость и точность полученных результатов. 2 табл. Изобретение относится к области медицины, преимущественное применение найдет в аллергологии, гастроэнтерологии и лабораторной диагностике и может быть использовано для неинвазивного определения проницаемости кишечной стенки. Известны способы определения проницаемости кишечной стенки, основанные на скорости абсорбции в кровь различных инертных газов (ксенон, гелий, радон и др. ) после их энтерального введения [4]. Однако данные способы приемлемы скорее для исследовательских целей, чем для клинической практики, вследствие их материалоемкости и дороговизны. Известны способы определения проницаемости кишечной стенки, основанные на скорости абсорбции из кишечника различных радиоактивных и флюоресцентных меток, полимеров различной молекулярной массы [1], однако они неприемлемы в клинической практике, поскольку данные соединения не включены в Фармакопею России. Наиболее близким к заявляемому является способ определения проницаемости кишечной стенки [2, 3] , основанный на различиях во всасывании инертного дисахарида и моносахарида или гомологичного ему полиспирта. Авторы прототипа использовали эквимолярную смесь лактулозы и маннита. В моче, собранной в течение 3 часов после приема пациентом смеси, определялись концентрации маркерных веществ трехкратной одномерной восходящей хроматографией на пластинках Silufol. Используемая система растворителей, необходимость трехкратного хроматографирования делает пробу достаточно трудоемкой и снижает воспроизводимость результатов. Замена способа определения маннита и лактулозы в смеси на высокоэффективную жидкостную хроматографию не представляется возможным из-за значительного удорожания определения. Целью изобретения является сокращение времени определения и повышение воспроизводимости и точности полученных результатов. Сущность предлагаемого способа заключается: 1. Проведение нагрузочной пробы жидкостью, содержащей лактулозу и маннит. 2. Сбор мочи в течение 3 часов после приема тестирующей смеси. 3. Спектрофотометрическое определение содержания в моче восстанавливающих сахаров. 4. Спектрофотометрическое определение содержания в моче полиспиртов. 5. Вычисление показателя проницаемости кишечной стенки. Для осуществления заявляемого способа необходимо перорально ввести пациенту или экспериментальному животному эквимолярную смесь (по 0.025 М/л) лактулозы в виде препарата “Нормазе”(MOLTE-NI SAS, PHARM Italla) и маннита (Днепропетровский ХФЗ) из расчета 5 мл/кг массы. Затем в течение 3 часов осуществлять сбор мочи. Для определения содержания восстанавливающих сахаров (до 90% из которых в условиях проводимой нагрузочной пробы составляет лактулоза) к 2 мл мочи прибавляют 1 мл 2н. раствора NaOH и 1 мл 0.3% водного раствора 2.3.5-трифенилтетразолия. Оставляют на 5 минут при комнатной температуре. Появляющуюся розовую окраску закрепляют прибавлением 1 мл 2М раствора уксусной кислоты (проба Л). Для определения содержания полиспиртов (подавляющую часть которых в условиях проводимой нагрузочной пробы составляет маннит) параллельно, в другой пробирке (проба М), к 2 мл мочи прибавляют 0.1 мл 0.03М раствора метапериодата натрия, оставляют на 5 минут, а затем проводят реакцию, как с пробой Л. Обе пробы спектрофотометрируют против разбавленной физиологическим раствором (1:1) мочи при длине волны 485 нм. Показатель проницаемости кишечной стенки вычисляют как отношения разности экстинций пробы М и пробы Л к экстинции пробы Л. Пример 1. Проведена нагрузочная проба у кроликов – 5 интактных животных и 5 животных с 30-минутной ишемией и 120-минутной реперфузией кишечника. Лактулоза (1) и маннит (m) определены в моче по прототипу и заявляемым способом. Полученные результаты представлены в табл.1 и свидетельствуют об имеющихся преимуществах заявляемого способа. В частности, об этом свидетельствует меньший разброс в сериях у заявляемого способа по сравнению с прототипом. Пример 2. Проведена нагрузочная проба у 10 здоровых детей и 15 детей с обострением атонического дерматита с пищевой сенсибилизацией при поступлении в стационар и после курса лечения энтеросорбентами (полисорб, 10 дней). Лактулоза (1) и маннит (m) определены в моче по прототипу и заявляемым способом. Определена корреляция показателей между заявляемым способом и прототипом. Полученные результаты представлены в табл.2 и свидетельствуют о высокой воспроизводимости предлагаемого способа. Полученные на основе заявляемого способа данные о снижении проницаемости кишечной стенки при приеме энтеросорбента согласуются с клинико-лабораторными показателями и литературными сведениями. Литература Формула изобретения
РИСУНКИ
MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Извещение опубликовано: 27.10.2006 БИ: 30/2006
|
||||||||||||||||||||||||||
