Патент на изобретение №2202787
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО УРОГЕНИТАЛЬНОГО ХЛАМИДИОЗА
(57) Реферат: Изобретение относится к медицине, а именно к дерматовенерологии. В способе определяют уровень спонтанной и индуцированной зимозаном хемилюминесценции лейкоцитов, используют лизат элементарных телец хламидий, рассчитывают индексы хемилюминесценции по зимозану и специфическому антигену как отношение стимулированной хемилюминесценции к спонтанной, при значениях 21,35  ИХЛ-331,41 и 0,53ИХЛ-aг1,00 диагностируют хроническую хламидийную инфекцию. Способ обеспечивает повышение точности диагностики урогенительного хламидиоза, позволяет учесть реакцию макроорганизма, отличается высокой чувствительностью и не требует использования дорогостоящих реактивов. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматовенерологии, может быть применено в комплексной диагностике хламидийных поражений мочеполовой системы. В клинической практике с целью диагностики хламидиоза применяют методы, направленные на непосредственное определение возбудителя: прямая и непрямая иммунофлюоресценция, полимеразно-цепная реакция, иммуноферментное выявление антигена. К их недостаткам относят снижение информативности при диагностике инфекции верхних отделов урогенитального тракта, хронического процесса, для которого характерно наличие отграниченных лейкоцитарным валом кальцинированных и петрифицированных очагов воспаления. Для диагностики хламидиоза используют также и серологические методы. Суть их сводится к количественному определению специфических иммуноглобулинов класса М, А, и G к антигенам хламидий, фиксированных на твердой фазе (иммуноферментный анализ). Учитывая низкую иммуногенность хламидий, определяемые концентрации специфических антител находят лишь у 70-80% больных. Кроме того, гуморальный иммунитет при урогенитальном хламидиозе имеет скорее маркерное, нежели протективное значение [5] . Ведущая роль в осуществлении антихламидийной защиты принадлежит интерферонам и некоторым другим цитокинам, продуцируемым различными пулами клеток лейкоцитарного ряда. Таким образом, оценка их метаболической активности позволяет косвенно учесть реализацию этой функции. В настоящее время общепризнанной является точка зрения о необходимости комплексной диагностики хламидиоза с использованием 2-3 различных методик. Поэтому целесообразным представляется выработка принципиально новых подходов к диагностике урогенитального хламидиоза. Известно, что метод люминол зависимой хемилюминесценции (ЛЗХЛ) полиморфноядерных лейкоцитов (ПМЯЛ) успешно применяется для оценки ответа клеток на антигенную стимуляцию [2]. Показана целесообразность использования хемилюминесцентного анализа с целью индивидуального подбора иммунокорректоров [3], диагностики аллергии неинфекционного происхождения [4], изучения ответа фагоцитов на микробные клетки и отдельные их антигенные структуры [1, 6]. Целью изобретения является повышение точности диагностики урогенитального хламидиоза с учетом реакции лейкоцитарных клеточных систем макроорганизма на присутствие возбудителя, снижение экономических затрат на лабораторные исследования. Поставленную цель решают за счет того, что исследуют уровень спонтанной и индуцированной зимозаном хемилюминесценции лейкоцитов, используя в качестве второго индуктора лизат элементарных телец хламидий (комплексный специфический антиген), рассчитывают индексы хемилюминесценции по зимозану (ИХЛ-з) и специфическому антигену (ИХЛ-аг) как отношение стимулированной хемилюминесценции к спонтанной, при значениях 21,35 ИХЛ-зИ,41 и 0,53ИХЛ-аг1,00 подозревают хроническую хламидийную инфекцию, а при ИХЛ-з<21,35 и ИХЛ-аг>1,00 диагностируют хламидиоз.
Способ осуществляют следующим образом. Венозную кровь (4 мл) обследуемого забирают в центрифужную пробирку, хорошо перемешивают с 80 ЕД гепарина и 1 мл полиглюкина. Для осаждения эритроцитов смесь инкубируют при 37oС в течение 20 мин и 20 мин при комнатной температуре. Лейкоцитарный супернатант переносят в чистую центрифужную пробирку, доводят объем 0,1% раствором желатина на реактиве Хенкса без индикатора до 7 мл и дважды отмывают в течение 7 мин при 1000 об/мин. По окончании последнего центрифугирования супернатант удаляют, а осадок разводят в 2 мл раствора Хенкса, производят подсчет клеток в камере Горяева и доводят их концентрацию до 4 млн/мл. Для определения спонтанной хемилюминесценции в кювету хемилюминометра вносят 250 мкл клеточной суспензии, 100 мкл люминола в концентрации 10-5 М и 650 мкл реактива Хенкса; для определения реакции на неспецифический антиген (опсонизированный зимозан) – 250 мкл клеточной суспензии, 40 мкл пуловой донорской IV (АВ) группы сыворотки, 50 мкл зимозана (2 мг/мл), 100 мкл люминола и 560 мкл раствора Хенкса; для определения специфического ответа – 250 мкл клеточной суспензии, 250 мкл раствора лизата ЭТ хламидий в разведении 1:400, 40 мкл пуловой сыворотки, 100 мкл люминола и 360 мкл раствора Хенкса. Измерения проводили на серийном медицинском хемилюминометре CL-3606 (“Биофизика”, Красноярск), предназначенном для исследования сверхслабых свечений биологически активных объектов в спектральной области 200 – 650 нм. Прибор выполнен в виде единого конструктива и работает под управлением ПЭВМ типа IBM Pentium 166. В качестве детектора в установке используют 24-разрядный счетчик импульсов ФЭУ-85. В рабочем режиме установки напряжение питания для ФЭУ-85 составляет 1500 В, световая чувствительность фотокатода 9х10 ехр-5, энергетический эквивалент собственных шумов 0,85 КэВ. Кюветы помещают в термостатируемый барабан с температурой 37,0o С. Время измерения одной точки хемилюминесцентной кривой составляет 0,1 сек, минимальное число точек измерения на каждую кривую -1, общее время измерения – 90 мин. Графическую информацию подвергали математической обработке с помощью прилагаемого программного обеспечения функцией полинома 5 степени, после чего рассчитывали максимумы спонтанной и индуцированной ХЛ. С целью интегральной оценки результатов вычисляли индексы ХЛ как отношение индуцированной хемилюминесценции к спонтанной по зимозану (ИХЛ-з) и хламидийному антигену (ИХЛ-аг).
Способ был применен на базе поликлиники Красноярского краевого кожно-венерологического диспансера. Обследован 61 больной хроническим урогенитальным хламидиозом в различных стадиях инфекционного процесса и 14 человек контрольной группы без хламидиоза в анамнезе. Установлено, что при спонтанной активности лейкоцитов 2430,86 426,48 в контрольной группе добавление специфического антигена ингибировало их хемилюминесценцию, так что ИХЛ-аг= 0,510,02. Спонтанная ЛЗХЛ и ИХЛ-аг у больных хроническим урогенитальным хламидиозом статистически значимо повышаются по мере активации инфекции (см. табл. 1). Достоверное, в сравнении с контролем, снижение ИХЛ-з свидетельствует о текущем инфекционном процессе и указывает на специфичность реакции с комплексным хламидийным антигеном.
Пример 1. Больной Н., 28 лет. Поступил с жалобами на выделения из уретры по утрам слизистого характера, рези при мочеиспускании, периодические ноющие боли в промежности. В анамнезе 2 года назад лечился по поводу хламидийного уретропростатита, на контроль излеченности не явился. После проведения хемилюминесцентного анализа (ИХЛ-з = 18,23, ИХЛ-аг = 1,34) у больного диагностирован хронический хламидиоз. Данные ультразвукового исследования свидетельствовали о поражении предстательной железы. Диагноз урогенитального хламидиоза был впоследствии подтвержден обнаружением возбудителя методом прямой иммунофлюоресценции. Лечение скорректировано по методикам терапии хламидийного уретропростатита.
Выводы:1. Использование в реакции ЛЗХЛ в качестве индукторов лизата элементарных телец хламидий и опсонизированного зимозана позволяет установить наличие хламидийной инфекции без непосредственного определения возбудителя в совокупности с оценкой нарушений функционального состояния полиморфноядерных лейкоцитов. 2. Предложенный метод способствует повышению точности диагностики хламидиоза, отличается простотой, высокой чувствительностью, обеспечивает объективную аппаратную регистрацию результатов и не требует использования дорогостоящих реактивов. 3. Метод позволяет учесть реакцию макроорганизма на присутствие инфекционного агента, может быть использован у больных хроническими, застарелыми формами, инфекцией верхних отделов урогенитального тракта, при различных стадиях инфекционного процесса. ЛИТЕРАТУРА Формула изобретения
ИХЛ-з31,41 и 0,53ИХЛ-aг1,00 диагностируют хронический урогенитальный хламидиоз.
РИСУНКИ
MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 15.04.2002
Извещение опубликовано: 27.09.2004 БИ: 27/2004
|
||||||||||||||||||||||||||
