Патент на изобретение №2200760
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ОБРАБОТКИ ЭМБРИОГЕННОГО КАЛЛУСА КУКУРУЗЫ IN VITRO
(57) Реферат: Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способам генетической инженерии, и может быть использовано как в сельском хозяйстве, так и для фундаментальных исследований в области физиологии растений. Обработка эмбриогенного каллуса кукурузы in vitro заключается в культивировании эмбриогенного каллуса кукурузы на питательной среде, содержащей антибиотик цефотаксим, который добавляют в момент, необходимый для получения регенерантов, в концентрации 100-300 мг/л. Изобретение обеспечивает увеличение регенерации из эмбриогенного каллуса кукурузы в 5-10 раз, способствует ускоренной дифференцировке каллусных структур в 3-4 раза, за счет повышения частоты регенерации, обеспечивает регулируемость и контролируемость процесса регенерации, а также достигает стабильности в воспроизводимости результатов при улучшении его технологичности. 1 табл. Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам генетической инженерии, и может быть использовано как в сельском хозяйстве, так и для фундаментальных исследований в области физиологии растений. Однако для кукурузы этот эффект в научно-технической и патентной литературе неизвестен, хотя проблема регенерации эмбриогенного каллуса кукурузы in vitro является очень важной. Задачей настоящего изобретения является создание такого способа обработки эмбриогенного каллуса кукурузы in vitro, который бы обеспечивал увеличение частоты регенерации из эмбриогенного каллуса кукурузы, способствовал ускоренной дифференцировке каллусных структур, регулируемости и контролируемости процесса регенерации, а также стабильности в воспроизводимости результатов и улучшение его технологичности. Эта задача решается новым способом обработки эмбриогенного каллуса кукурузы in vitro, заключающимся в культивировании эмбриогенного каллуса кукурузы на питательной среде, причем культивирование эмбриогенного каллуса кукурузы проводят на питательной среде, содержащей антибиотик цефотаксим, который добавляют в момент, необходимый для получения регенерантов, в концентрации 100-300 мг/л. Заявляемые пределы концентрации цефотаксима определяются следующим образом. Использование концентрации ниже 100 мг/л не стимулирует процесс регенерации, а при использовании концентрации выше 300 мг/л подавляется регенерационная способность эмбриогеного каллуса. Сущность изобретения, по мнению авторов, заключается в том, что совершенно неожиданным образом выявилось, что добавление цефотаксима стимулирует процесс регенерации и способствует ускоренной дифференцировке каллусных структур. Изобретение иллюстрируется следующими примерами. Результаты, представленные в примерах 1-12 являютя воспроизводимыми и математически усредненными и представлены в таблице. Пример 2. Эмбриогенный каллус кукурузы линии 91 культивируют на твердой питательной среде. В момент, когда исследователям необходимо получение регенерантов, в питательную среду добавляют антибиотик цефотаксим (Сх) в концентрации 100 мг/л. Полученные регенеранты используют для дальнейших исследований. Пример 3. Эмбриогенный каллус кукурузы линии 91 культивируют на твердой питательной среде. В момент, когда исследователям необходимо получение регенерантов в питательную среду, добавляют антибиотик цефотаксим (Сх) в концентрации 200 мг/л. Полученные регенеранты используют для дальнейших исследований. Пример 4. Эмбриогенный каллус кукурузы линии 91 культивируют на твердой питательной среде. В момент, когда исследователям необходимо получение регенерантов, в питательную среду добавляют антибиотик цефотаксим (Сх) в концентрации 300 мг/л. Полученные регенеранты используют для дальнейших исследований. Пример 6. Эмбриогенный каллус кукурузы линии А188 культивируют на твердой питательной среде. В момент, когда исследователям необходимо получение регенерантов, в питательную среду добавляют антибиотик цефотаксим (Сх) в концентрации 100 мг/л. Полученные регенеранты используют для дальнейших исследований. Пример 7. Эмбриогенный каллус кукурузы линии А188 культивируют на твердой питательной среде. В момент, когда исследователям необходимо получение регенерантов, в питательную среду добавляют антибиотик цефотаксим (Сх) в концентрации 200 мг/л. Полученные регенеранты используют для дальнейших исследований. Пример 8. Эмбриогенный каллус кукурузы линии А188 культивируют на твердой питательной среде. В момент, когда исследователям необходимо получение регенерантов, в питательную среду добавляют антибиотик цефотаксим (Сх) в концентрации 300 мг/л. Полученные регенеранты используют для дальнейших исследований. Пример 9 (контроль). Эмбриогенный каллус кукурузы гибрида между линиями А188х91 культивируют на твердой питательной среде. Полученные регенеранты используют для дальнейших исследований. Пример 10. Эмбриогенный каллус кукурузы гибрида А188х91 культивируют на твердой питательной среде. В момент когда исследователям необходимо получение регенерантов в питательную среду добавляют антибиотик цефотаксим (Сх) в концентрации 100 мг/л Полученные регенеранты используют для дальнейших исследований. Пример 11. Эмбриогенный каллус кукурузы гибрида А188х91 культивируют на твердой питательной среде. В момент когда исследователям необходимо получение регенерантов в питательную среду добавляют антибиотик цефотаксим (Сх) в концентрации 200 мг/л Полученные регенеранты используют для дальнейших исследований. Пример 12. Эмбриогенный каллус кукурузы гибрида А188х91 культивируют на твердой питательной среде. В момент, когда исследователям необходимо получение регенерантов, в питательную среду добавляют антибиотик цефотаксим (Сх) в концентрации 300 мг/л. Полученные регенеранты используют для дальнейших исследований. Как следует из результатов таблицы, способ обработки эмбриогенного каллусса кукурузы in vitro обеспечивает увеличение регенерации из эмбриогенного каллуса кукурузы в 5-10 раз, способствует ускоренной дифференцировке каллусных структур в 3-4 раза, за счет повышения частоты регенерации, обеспечивает регулируемость и контролируемость процесса регенерации, а также достигает стабильности в воспроизводимости результатов при улучшении его технологичности. Формула изобретения
РИСУНКИ
MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 28.07.2003
Извещение опубликовано: 27.02.2008 БИ: 06/2008
|
||||||||||||||||||||||||||
