Патент на изобретение №2200164

(54) КОМПЛЕКСНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ПЛАТИНЫ, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ

(57) Реферат:

Описывается новое комплексное соединение платины формулы I, где Х представляет атом галогена, В представляет независимо гидроксильную группу или карбоксилатную группу, содержащую 1-6 атомов углерода, и А представляет группу -NH₂-R, где R является трициклическим углеводородным фрагментом, содержащим 10-14 атомов углерода, которая может быть необязательно замещена в трициклическом кольце одной или двумя алкильной группой(ами), каждая содержащая 1-4 атомов углерода, комплекс включения указанного комплекса платины с бета- или гамма-циклодекстрином, который может быть необязательно замещен гидроксиалкильными группами, содержащими 1-6 атомов углерода, способ получения комплексного соединения формулы I, основанный на окислении комплекса двухвалентной платины формулы II перекисью водорода и необязательном замещении гидроксильных групп в полученном продукте карбоксилатными группами при действии ацилирующего агента, и фармацевтическая композиция. Раскрытые комплексы можно использовать как таковые или в качестве части фармацевтической композиции при лечении онкологических заболеваний. 5 с. и 3 з.п. ф-лы, 12 табл.

Изобретение относится к новому комплексному соединению платины, которое является полезным в медицинской практике для лечения онкологических заболеваний. Изобретение дополнительно раскрывает способ получения упомянутого комплексного соединения, применение комплексного соединения в качестве фармацевтического препарата и фармацевтические композиции, содержащие это комплексное соединение платины в качестве активного вещества.

Предпосылки изобретения
Комплексные соединения платины, эффективные в качестве цитостатических агентов, были внедрены в медицинскую практику в конце семидесятых годов этого столетия. Первым фармацевтическим продуктом на основе комплексных соединений платины был цисплатин (цис-диаммин-дихлорплатина (II)). Во время последующей разработки указанных комплексных соединений были синтезированы и исследованы десятки комплексных соединений платины; среди них, карбоплатин стал соединением, которое получило наибольшее значение в онкологии. Однако, оба упомянутых соединения должны вводиться только парентерально, и ни одно из них не пригодно для перорального введения. В публикации J. Med. Chem. (1995), 38 (16), 3016-24 раскрываются гексакоординационные полностью-транс комплексы платины, имеющие галоген, гидроксильную или карбоксилатную группы и аминогруппы. Различие между этими комплексами и таковыми по изобретению состоит в том, что комплексные соединения по изобретению имеют цис, транс, цис-геометрию. ЕР-А-0503830 относится к комплексам платины (IV), имеющим транс, транс, транс-геометрию и имеющим циклогексиламиногруппу. Комплексы цис, цис, транс на самом деле получают при особых условиях в очень ограниченной степени, только, например, с помощью длительного ацетилирования, осуществляемого при действии светового облучения. Иначе, комплексы транс, транс, транс получают в условиях обычного ацетилирования. Что касается перорального введения, то в Европейских патентах ЕР 328274 и 423707 раскрываются некоторые комплексные соединения четырехвалентной платины в качестве пригодных. Эти комплексы четырехвалентной платины имеют цис, транс, цис-геометрию и содержат, помимо четырех галогенов или карбоксилатных лигандов, две основные асимметричные группы, одна из которых является аммином, и вторая является замещенным алкил- или циклоалкиламином.

В настоящее время по-прежнему проводится поиск комплексных соединений платины, которые будут проявлять более высокую противоопухолевую эффективность по сравнению с известными комплексными соединениями платины.

Сейчас, в рамках настоящего изобретения, найдены некоторые новые комплексные соединения платины, которые обладают более высокой противоопухолевой эффективностью по сравнению с комплексными соединениями платины предшествующего уровня техники. Эти новые комплексы представляют основу настоящего изобретения.

Краткое описание изобретения
По первому аспекту изобретения обеспечивается комплексное соединение платины формулы (I):

где Х представляет атом галогена,
В представляют независимо атом галогена, гидроксильную группу или карбоксилатную группу, содержащую 1-6 атомов углерода, и
А представляет группу -NH₂-R, где R является трициклическим углеводородным фрагментом, содержащим 10-14 атомов углерода, которая может быть необязательно замещена в трициклическом кольце одной или двумя алкильной группой(ами), каждая содержащая 1-4 атомов углерода.

По второму аспекту изобретения обеспечивается комплекс включения комплекса платины со степенью окисления IV формулы I

где X представляет атом галогена,
В представляют независимо атом галогена, гидроксильную группу или карбоксилатную группу, содержащую 1-6 атомов углерода, и
А представляет группу -NH₂-R, где R является трициклическим углеводородным фрагментом, содержащим 10-14 атомов углерода, которая может быть необязательно замещена в трициклическом кольце одной или двумя алкильной группой(ами), каждая содержащая 1-4 атомов углерода,
с бета- или гамма-циклодекстрином, который может быть необязательно замещен гидроксиалкильными группами, содержащими 1-6 атомов углерода.

Особенно преимущественными комплексными соединениями платины по настоящему изобретению являются комплексы формулы (I), где А представляет адамантиламиногруппу, и X и В имеют вышеопределенные значения, и кроме того, их комплексы включения с бета- или гамма-циклодекстрином, который может быть необязательно замещен, как раскрывается выше.

Другими преимущественными комплексными соединениями платины по настоящему изобретению являются комплексы формулы (I), где А представляет 3,5-диметиладамантиламиногруппу, и Х и В имеют вышеопределенные значения, и кроме того, их комплексы включения с бета- или гамма-циклодекстрином, который может быть необязательно замещен, как раскрывается выше.

В другом аспекте настоящего изобретения обеспечивается способ получения комплексного соединения платины формулы (I), отличающийся тем, что комплекс двухвалентной платины формулы (II)

где Х и А имеют вышеуказанные значения, окисляют по атому платины перекисью водорода при образовании дигидроксокомплекса платины (IV), и необязательно гидроксильные группы указанного комплекса замещают карбоксилатными группами при действии ацилирующего агента.

Изобретение также обеспечивает способ получения комплекса включения комплекса платины формулы (I) с бета- или гамма -циклодекстрином, который может быть необязательно замещен гидроксиалкильной группой, содержащей 1-6 атомов углерода, указанный способ характеризуется смешением раствора комплекса платины формулы (I) в органическом растворителе с водным раствором бета- или гамма-циклодекстрина, который необязательно замещен гидроксиалкильными группами, содержащими 1-6 атомов углерода, и на следующей стадии растворители выпаривают из полученного раствора.

Еще другим аспектом изобретения является комплекс платины формулы (I), указанной выше, или его комплекс включения с бета- или гамма-циклодекстрином для применения в качестве фармацевтического препарата.

Последний аспект изобретения обеспечивает фармацевтическую композицию для лечения онкологических заболеваний, отличающуюся тем, что она содержит, в качестве активного соединения, по меньшей мере один комплекс платины вышеуказанной формулы (I) или его комплекс включения с бета- или гамма-циклодекстрином, который может быть необязательно замещен, как указано выше, и по меньшей мере один фармацевтический эксципиент.

Комплексные соединения платины по настоящему изобретению являются новыми химическими соединениями, поскольку до настоящего времени ни эти соединения не были специально раскрыты ни в одном документе уровня техники, ни их свойства не были охарактеризованы, ни способ их получения не был раскрыт. Применимость этих соединений в качестве активных веществ при лечении онкологических заболеваний также является новой и изобретательской, поскольку невозможно было установить из известного уровня техники очевидным путем, что наличие лиганда первичного трициклического амина в комплексах четырехвалентной платины приведет к значительному повышению противоопухолевой активности новых соединений по настоящему изобретению.

Основные преимущества комплексных соединений платины по настоящему изобретению в сравнении с до сих пор известными комплексами платины и, именно, в сравнении с комплексными соединениями платины, раскрытыми в Европейских патентах ЕР 328274 и ЕР 423707 основаны не только на их более высокой эффективности при пероральном введении и низкой токсичности, а именно на более широком спектре их противоопухолевой активности.

Далее изобретение будет описано более подробно с помощью примеров конкретного воплощения. Необходимо понимать, что эти примеры приводятся для иллюстративных целей, и они никоим образом не ограничивают объем изобретения, который определяется формулой изобретения.

Подробное описание изобретения
Пример 1
Синтез комплекса аф-бис(ацетато)-b-(1-адамантиламин)-с-аммин-де-дихлорплатины (IV) (в дальнейшем называемый “LA-12”) [(ОС-6-43)-бис(ацетато) (1-адамантанамин)амминдихлорплатина (IV)]
Перемешивают 6,25 г (13,3 ммоль) комплекса b-(1-адамантиламин)-с-аммин-де-дихлор-аф-дигидроксоплатины (IV) [(ОС-6-43)-(1-адамантанамин)амминдихлордигидроксоплатина (IV)] при комнатной температуре с избытком уксусного ангидрида (50,2 мл, 532 ммоль). Во время этого из исходного раствора постоянно осаждается твердое вещество. После окончания осаждения твердое вещество фильтруют и промывают его небольшим количеством уксусного ангидрида и простого эфира. После высушивания в вакуумной сушилке получают 4,28 г (58,2%) целевого продукта.

Идентичность полученного продукта подтверждают спектром ¹H и ¹³С ядерного магнитного резонанса и инфракрасным спектром и его чистоту определяют высокоэффективной жидкостной хроматографией.

Элементный анализ продукта для C₁₄H₂₆Cl₂N₂O₄Pt:
Найдено, %: C 30,24; H 4,75; N 4,99; Cl 12,81.

Рассчитано, %: C 30,44; H 4,74; N 5,07; Cl 12,84.

Пример 2
Синтез комплекса аф-бис (ацетато)-b-(1-амино-3,5-диметил-адамантан)-с-аммин-де-дихлорплатины (IV)) (в дальнейшем называемый “LA-15”) [(ОС-6-43)-бис(ацетато)(1-амино-3,5-диметил-адамантан) амминдихлорплатина (IV)]
Перемешивают 0,96 г (1/93 ммоль) комплекса b-(1-амино-3,5-диметиладамантан)-с-аммин-де-дихлор-аф-дигидроксоплатины (IV) [(ОС-6-43)-(1-амино-3,5-диметиладамантан)амминдихлор-дигидроксоплатина (IV)] при комнатной температуре с избытком уксусного ангидрида (8 мл, 84,7 ммоль). После растворения, к реакционной смеси добавляют 10 мл простого эфира. Перемешивание продолжают, пока не заканчивается образование осадка. Осажденное твердое вещество фильтруют, промывают простым эфиром и высушивают в вакуумной сушилке. Выход составляет 0,72 г (64,3%) целевого продукта.

Идентичность полученного продукта подтверждают спектром ¹H и ¹³С ядерного магнитного резонанса и инфракрасным спектром и его чистоту определяют высокоэффективной жидкостной хроматографией.

Элементный анализ продукта для C₁₆H₃₀Cl₂N₂O₄Pt:
Найдено, %: C 32,88; H 5,21; N 4,75; Cl 12,31.

Рассчитано, %: C 33,11; H 5,21; N 4,83; Cl 12,22.

Пример 2а
Синтез комплекса b-(1-адамантиламин)-с-аммин-де-дихлор-аф-дигидроксоплатины (IV)) (в дальнейшем называемый LA-11)
Суспендируют 8,01 г (18,44 моль) комплекса цис-(1-адамантиламин)-аммин-дихлорплатины (II) в 120 мл воды при комнатной температуре. К суспензии добавляют стехиометрический избыток (20 мл) 30% (масса/масса) водного раствора перекиси водорода, реакционную смесь нагревают при 80^oС в течение 1 часа и затем охлаждают до комнатной температуры. Твердое вещество отделяют фильтрованием, промывают водой и частично высушивают. Продукт экстрагируют и промывают диметилформамидом в общем объеме 150 мл. Остатки диметилформамида удаляют промыванием простым эфиром. После высушивания в вакуумной сушилке выход составляет 6,45 г, т.е. 74,6% от теоретического (по отношению к исходному комплексу платины (II)).

Идентичность продукта подтверждают инфракрасным спектральным анализом и чистоту определяют высокоэффективной жидкостной хроматографией.

Элементный анализ полученного продукта (для C₁₀H₂₂Cl₂N₂O₂Pt):
Найдено, %: C 25,75; H 4,76; N 5,94; Cl 15,10.

Рассчитано, %: C 25,65; H 4,74; N 5,98; Cl 15,14.

Пример 3
Синтез комплекса включения соединения LA-12 с гидроксипропил-бета-циклодекстрином (в дальнейшем называемый “лекарственная форма включения LA-12”)
Соединение LA-12 растворяют в ацетоне для получения конечной концентрации 20 г/л. К полученному раствору добавляют гидроксипропил-бета-циклодекстрин (164 г/л). К этой смеси медленно добавляют забуференную водную фазу 100 мМ Hepes с рН 7,3 при перемешивании при комнатной температуре, пока конечное объемное соотношение ацетона и водной фазы не станет равным 1:10. Нерастворенный циклодекстрин быстро растворяется даже после первых добавлений водной фазы (до 10% от общего объема водной фазы). Наконец, ацетон и воду удаляют из раствора комплекса включения лиофилизацией.

Скрининг противоопухолевой активности соединений по настоящему изобретению проводят тестированием этих соединений в опытах in vivo на животных с экспериментальными опухолями, такими как мышиная лейкемия L1210 в асцитной форме (IP-L1210) или в солидной форме (SC-L1210), выращенная на мышах DBA2, лимфосаркома Гарднера в солидной и асцитной форме (LsG), выращенная на мышах С3Н, опухоль Эрлиха (Ehrlich) в солидной (STE) и асцитной форме (ATE), выращенная на мышах NMRI, опухоль МС2111 (трансплантируемая аденокарцинома млекопитающих), выращенная на мышах DBA1, метастазирующая меланокарцинома В16 в солидной и асцитной форме (SC-B16, IP-В16), выращенная на мышах С57В16, и метастазирующая карцинома легких Льюиса (LL), выращенная на мышах С57В16, а именно по методу V.Jelinek (Neoplasma 12, 469 (1965), ibid 7,146 (1960)).

Оценивали время выживания и рассчитывали оптимальную дозу, помимо точечных определений, оцениваемых t-тестом Student, пропорциональной моделью риска Кокса (Сох) и методом Картера (Carter W.H. et al.: Cancer Res. 42, 2963 (1982)). Кривые активности, полученные по этому методу вычисления, позволяют рассчитать оптимальную дозу и установить токсические дозы. Этот метод позволяет оценить не только действие при монотерапии, но также общую токсичность и влияние компонентов комбинированной терапии. Следовательно, зависимости между дозой и активностью были смоделированы и оценены в некоторых примерах также этим методом.

Для целей данного изобретения термин “терапия” означает ингибирование характерных признаков и симптомов заболевания у биологических объектов, имеющих опухоль, а именно ингибирование роста опухоли и ингибирование снижения времени выживания биологического объекта. За ростом опухоли можно наблюдать как клинически, так и в опытах in vivo, т.е. на экспериментальных животных. Оценку роста опухоли можно проводить по взвешиванию опухолевой ткани или по измерению размера опухоли.

Подобное положительное терапевтическое действие соединений по настоящему изобретению на мышах самках штамма С3Н было доказано снижением массы опухоли у животных с солидной формой лимфосаркомы Гарднера (SC-LsG), с STE, SC-B16, SC-LL и МС2111, именно при пероральном введении соединений этой группы химических веществ. Было показано статистически достоверное (р0,05) или даже высокодостоверное (р0,01) снижение средней массы опухолей по сравнению с контролем, т.е. необработанной группой.

Также, соединения по настоящему изобретению пролонгируют время выживания соответствующих биологических объектов, например, мышей с опухолями IP-L1210, МС211, SC-L1210, IP-LsG и ATE, и также предельно с IP-B16 и IP-LsG, именно при пероральном введении. Поскольку по своей природе вышеиспользованные тест-системы приводят к летальному исходу, противоопухолевое действие соединений по изобретению может быть обосновано сравнением времени выживания обработанных животных (которые выживают дольше) с необработанными контрольными животными. В типичных опытах (см. примеры) одна опытная группа обычно состояла из 10 животных, и животные обработанных групп выживали статистически достоверно дольше по сравнению с контролем, т.е. необработанными животными.

Для использования их противоопухолевого действия раскрытые соединения можно вводить соответствующим биологическим объектам, а именно млекопитающим, в пригодной для применения форме и обычными путями введения. Их можно вводить одни или, предпочтительно, в качестве активных веществ вместе с любым пригодным и нетоксичным фармацевтическим носителем, растворенным или суспендированным, например, в воде, буфере, физиологическом растворе, в растворе метилцеллюлозы, полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля и т.д. Пероральное введение является наиболее предпочтительным. Оптимальная доза зависит от типа опухоли, которая подвергается лечению, от типа биологического объекта, который лечится, от его массы и/или поверхности тела, от локализации опухоли, от ее морфологического типа, от схемы доз и т.д. Из проведенных биологических опытов становится очевидным, что, например, эффективная однократная доза вводимого перорально LA-12 составляет только 10 мг/кг (30 мг/м²) для IP-L1210, в то время, как LA-2 (см. ниже) не проявляет эффекта при этой дозе. При дробном введении (1-, 4- и 9-й день) местной дозы LA-12, оптимальная доза для мышей DBA2 с лейкемией L1210 составляет 22,9 мг/кг перорально 3 (68,7 мг/м² 3) и при непрерывном введении (1-9-й день) оптимальная доза для тех же мышей составляет 9,6 мг/кг перорально 9 (28,8 мг/м² 9).

Токсичность соединений по изобретению является низкой: значение LD₅₀ для мышей NMRI может составлять выше 600 мг/кг перорально.

Является очевидным, что можно ожидать полезные терапевтические эффекты при дозах, которые являются абсолютно нетоксичными для млекопитающих. Согласно проведенным биологическим тестам можно ожидать, что переносимая и эффективная однократная пероральная доза для человека будет находиться на уровне 30 мг/м².

В последующих тестах, которые покажут противоопухолевое действие соединений по настоящему изобретению, в качестве стандарта были использованы следующие соединения предшествующего уровня техники: комплекс аф-бис(ацетато)-b-аммин-сd-дихлор-е- (циклогексиламин) платины (IV) [(ОС-6-43)-бис(ацетато)] амминдихлор (циклогексиламин) платина (IV)] (JM216, Johnson Matthey Technology Centre, Reafing, Berkshire, Great Britain, Kelland et al., 1993), называемый далее соединением LA-2 и комплекс цис-диамминдихлорплатины (II), который является активным веществом медицинского препарата Платидиама 10 (Platidiam 10).

Пример 4
Иллюстрация противоопухолевой активности комплекса аф-бис (ацетато)-b-(1-адамантиламин)-с-аммин-де-дихлорплатины (IV) (соединение (I), А=1-адамантиламин, “LA-12”) у мышей после однократного перорального введения и сравнение с комплексом аф-бис (ацетато)-b-аммин-сd-дихлор-е-(циклогексиламин) платины (IV) (соединение (I), А=циклогексиламин, код JM216-Johnson Matthey Technology Centre, “LА-2”) и с комплексом цис-диамминдихлорплатины (II) (NSC 119875, активное вещество препарата Платидиама 10 инъекционного сухого)
150 мышей самок штамма DBA2 с примерной массой 18 г распределяли на четырнадцать групп: одну контрольную группу (21 животное) и 13 опытных групп (9-10 животных). Всем животным внутрибрюшинно инокулировали летальную дозу асцитной жидкости из лейкемии L-1210. Животных 10 опытных групп лечили соединениями LA-12 и LA-2 в водных суспензиях, приготовленных ad hoc непосредственно перед применением. Суспензии содержали такие количества соответствующих соединений, что опытные животные получали через один день после инокуляции опухоли дозы 160, 80, 40, 20 и 10 мг/кг соответственно в объемах 0,2-0,4 мл. Платидиам вводили животным трех групп подкожно в виде изотонического водного раствора, приготовленного растворением лиофилизованного порошка в воде для инъекций непосредственно перед применением. За животными вели наблюдение для определения времени выживания. Зависимость значения времени выживания от использованной дозы оценивали в сравнении с контрольной группой. Единичные установленные временные точки в качестве ответных биологических реакций оценивали тестом эквивалентности двух средних значений (t-тест Student) при предположении о логарифмическом/нормальном характере распределения временных значений и при предположении о возможных неизвестных разбросах (Roth et al., 1962). Геометрическое среднее значение рассчитывали из единичных значений времени выживания. Те средние значения критерия теста, различие которых превышало критическое значение при уровне значимости 5%, оценивались как статистически достоверные.

Наблюдали, что у животных, обработанных LA-12, имелось статистически достоверное (t-тест, р0,05) более высокое среднее значение времени выживания в группе с дозой 10 мг/кг перорально, а именно на 55% по сравнению с необработанной контрольной группой. Платидиам, при дозе 5 мг/кг подкожно, увеличивал среднее значение времени выживания на 32% по сравнению с контролем, однако, это различие в значениях не было статистически достоверным в сравнении с контрольной группой. Эффект не был доказан для LA-2.

Результаты обобщены в табл. 1.

Мыши DBA2, самки, 16,6-19,1 г. Трансплантация опухоли внутрибрюшинным введением, инокулят 10⁶ опухолевых клеток. Начало лечения через 1 день после трансплантации (1 перорально, Платидиам 1 подкожно 1-й день).

В табл. 1 перечисляются по отношению к соответствующим дозам средние значения времени выживания, доверительные интервалы геометрического среднего значения для Р=1-=0,95 и соответствующие значения среднего времени выживания в виде процента от такового в контрольной группе.

Пример 5
Иллюстрация противоопухолевой активности комплекса аф-бис(ацетато)-b-(1-адамантиламин)-с-аммин-де-дихлорплатины (IV) (соединение (I), А=1-адамантиламин, “LA-12”) у мышей после перорального дробного введения и сравнение с комплексом аф-бис(ацетато)-b-аммин-сd-дихлор-е-(циклогексиламин)платины (IV) (соединение (I), А=циклогексиламин, код JM216 “LA-2”-Kelland et al., 1993) и с комплексом цис-диамминдихлорплатины (II) (NSC 119875, активное вещество препарата Платидиама 10 инъекционного сухого)
В аналогичном опыте на животных с лейкемией L1210 соединение (I) (А=адамантиламин, LA-12) вводили неоднократно в трех ежедневных дозах, а именно на 1-, 4- и 9-й день после инокуляции, вместе с LA-2 перорально и Платидиамом подкожно по той же схеме.

Наблюдали, что у животных, обработанных LA-12, было статистически достоверное (t-тест, р0,05) более высокое среднее значение времени выживания в группе с дозой 4 мг/кг/день перорально 3 (148%) в сравнении с необработанной контрольной группой. Соединение LA-2 показало такой же эффект (148%) только в двойной дозе, т.е. в дозе 8 мг/кг/день перорально 3. Оптимальная доза LA-12, рассчитанная по Картеру (Carter), составила только 4,55 мг/кг/день перорально 3, в то время как для LA-2 она была равна 10,96 мг/кг/день перорально 3, т.е. более чем в два раза. Таким образом, типичное соединение по настоящему изобретению более чем в два раза эффективнее, чем типичное соединение из вышеупомянутых патентов по его оптимальной терапевтической схеме.

Результаты обобщены в табл. 2.

Мыши DBA2, самки, 19,8-21,2 г. Трансплантация опухоли внутрибрюшинным введением, инокулят 10⁶ опухолевых клеток. Начало лечения через 1 день после трансплантации (3 перорально, Платидиам 3 подкожно 1-, 5- и 9-й день).

В табл. 2 перечисляются, по отношению к соответствующим дозам, средние значения времени выживания, доверительные интервалы геометрического среднего значения для Р= 1-=0,95 и соответствующие значения среднего времени выживания в виде процента от такового в контрольной группе.

Пример 6
Иллюстрация противоопухолевой активности комплекса аф-бис(ацетато)-b-(1-адамантиламин)-с-аммин-де-дихлорплатины (IV) (соединение (I), А=1-адамантиламин, “LA-12”) у мышей с лейкемией L1210 после непрерывного и дробного перорального введения и сравнение с комплексом аф-бис(ацетато)-b-аммин-cd-дихлор-е-(циклогексиламин) платины (IV) (соединение (I), А=циклогексиламин, код JM216 “LA-2”-Kelland et al., 1993) и с комплексом цис-диамминдихлорплатины (II) (NSC 119875, активное вещество препарата Платидиама 10 инъекционного сухого)
В опыте на животных с лейкемией L1210, который был поставлен аналогично примерам 4 и 5, соединение (I) (А=адамантиламин, LA-12) вводили неоднократно в обоих случаях в 9 ежедневных дозах, а именно на 1-9-й день после инокуляции, и также дробно на 1-, 4- и 9-й день вместе с LA-2 перорально таким образом, что суммарные дозы были одинаковыми при обеих схемах. Платидиам вводили подкожно.

Соединение LA-12 статистически достоверно увеличивало значение времени выживания по сравнению с контрольной группой в дозе 6 мг/кг перорально 9, а именно на 130%, и оно было оценено как обладающее противоопухолевой активностью аналогично Платидиаму в дозах 8 и 4 мг/кг подкожно 1. Соединение LA-2 не увеличивало статистически достоверно время выживания по сравнению с контрольной группой ни в одной из групп по дозам, и, таким образом, оно было оценено как не обладающее противоопухолевой активностью.

При дробной схеме (1-, 5- и 9-й день после инокуляции) эффект не был доказан с помощью точечных определений.

Оценка зависимости доза/эффект LA-12 показала, что непрерывная лечебная схема является более преимущественной при тех же суммарных дозах.

Результаты обобщены в табл. 3.

Мыши DBA2, самки, 19,3-21,4 г. Инокуляция опухоли внутрибрюшинным введением, инокулят 10⁶ опухолевых клеток. Начало лечения через 1 день после инокуляции (9 перорально, 1-9-й и 3 1-, 5- и 9-й день соответственно, Платидиам 1 подкожно 1-й день).

В табл. 3 перечисляются, по отношению к соответствующим дозам, средние значения времени выживания, доверительные интервалы геометрического среднего значения для Р= 1-=0,95 и соответствующие значения среднего времени выживания в виде процента от такового в контрольной группе.

Пример 7
Иллюстрация противоопухолевой активности комплекса аф-бис(ацетато)-b-(1-адамантиламин)-с-аммин-де-дихлорплатины (IV) (соединение (I), А=1-адамантиламин, “LA-12”), лекарственной формы включения LA-12 и комплекса аф-бис(ацетато)-b-(1-амино-3,5-диметиладамантан)-с-аммин-де-дихлорплатины (IV) (соединение (I), А=1-амино-3,5-диметиладамантан, “LA-15”) у мышей с лейкемией L1210 после непрерывного перорального введения и сравнение с комплексом аф-бис(ацетато)-b-аммин-cd-дихлор-е- (циклогексиламин)платины (IV) (соединение (I), А=циклогексиламин, код JM216 “LA-2”-Kelland et al., 1993) и с комплексом цис-диамминдихлорплатины (II) (NSC 119875, активное вещество препарата Платидиама 10 инъекционного сухого)
В опыте на животных с лейкемией L1210, проведенном аналогично примерам 4, 5 и 6, соединение LA-12, его новая лекарственная форма и соединение LA-15 вводили неоднократно в девяти ежедневных дозах, а именно на 1-9-й день после инокуляции, вместе с LA-2 перорально, по той же схеме. Платидиам вводили подкожно.

Соединение LA-12, его лекарственная форма включения и LA-15 увеличивали значение времени выживания с высокой достоверностью по сравнению с контрольной группой в использованных дозах, а именно на 130%, и они были оценены как обладающие противоопухолевой активностью аналогично Платидиаму в дозе 4 мг/кг подкожно 1 (123%) и LA-2 в дозе 3 мг/кг/день перорально 9 (114%).

Результаты обобщены в табл. 4.

Мыши DBA2, самки, 18,0-19,7 г. Инокуляция опухоли внутрибрюшинным введением, инокулят 1,210⁶ опухолевых клеток. Начало лечения с 1-го дня после инокуляции (9 перорально 1-9-й день, Платидиам 1 подкожно 1-й день).

В табл. 4 перечисляются, по отношению к соответствующим дозам, средние значения времени выживания, доверительные интервалы геометрического среднего значения для Р= 1-=0,95 и соответствующие значения среднего времени выживания в виде процента от такового в контрольной группе.

Пример 8
Иллюстрация противоопухолевой активности комплекса аф-бис(ацетато)-b-(1-адамантиламин)-с-аммин-де-дихлорплатины (IV) (соединение (I), А=1-адамантиламин, “LА-12”] у мышей с лимфосаркомой Гарднера после однократного перорального введения и сравнение с комплексом аф-бис(ацетато)-b-аммин-cd-дихлор-е-(циклогексиламин) платины (IV) (соединение (I), А=циклогексиламин, код JM216 “LA-2”-Kelland et al., 1993) и с комплексом цис-диамминдихлорплатины (II) (NSC 119875, активное вещество препарата Платидиама 10 инъекционного сухого)
Две сотни мышей самок штамма С3Н с массой тела примерно 25 г распределяли на 10 групп, а именно одну контрольную и девять опытных групп, каждая содержащая 20 животных. Всем животным трансплантировали летальную дозу гомогената опухоли от лимфосаркомы Гарднера. Животных опытных групп обрабатывали соединениями LA-12 и LA-2 в водной суспензии, приготовленной ad hoc непосредственно перед применением. Суспензии содержали такие количества соответствующего соединения, что опытные животные получали на 5-й день после инокуляции опухоли дозы 32,8 и 2 мг/кг соответственно, в объемах 0,2-0,4 мл; Платидиам применяли однократно в дозе 8,4 и 2 мг/кг подкожно. Половину животных в группе с каждой дозой убивали на 14-й день после инокуляции под эфирным наркозом и опухоли хирургически были извлечены из организма. При взвешивании определяли массу опухоли у каждого животного. Вторую половину животных оставляли для мониторинга времени выживания.

Наблюдали, что у животных, обработанных LA-12, была статистически достоверной (t-тест, р0,05) более низкая средняя масса опухоли (77%) в дозе 32 мг/кг перорально в сравнении с контрольной группой (100%). Эффект не наблюдали с LA-2, соединением предшествующего уровня техники.

Результаты обобщены в табл.5 .

Мыши С3Н, самки, 20,7-28,3 г. Трансплантация опухоли подкожным введением 0,2 мл гомогената опухоли. Начало лечения с 5-го дня после трансплантации (1 перорально, Платидиам 1 подкожно 5-й день).

В табл. 5 перечисляются, по отношению к соответствующим дозам, средние значения массы опухолей, доверительные интервалы арифметического среднего значения для Р=1-=0,95 и соответствующие значения средней массы опухоли в виде процента от таковой в контрольной группе.

Пример 9
Иллюстрация противоопухолевой активности комплекса аф-бис(ацетато)-b-(1-адамантиламин)-с-аммин-де-дихлорплатины (IV) (соединение (I), А=1-адамантиламин, “LA-12”) у мышей с аденокарциномой МС2111 млекопитающих после неоднократного непрерывного перорального введения и сравнение с комплексом аф-бис(ацетато)-b-аммин-сd-дихлор-е-(циклогексиламин)платины (IV) (соединение (I), А=циклогексиламин, код JM216 “LA-2”-Kelland et al., 1993) и с комплексом цис-диамминдихлорплатины (II) (NSC 119875, активное вещество препарата Платидиама 10 инъекционного сухого)
130 мышей самок штамма DBA1 с массой тела примерно 20 г распределяли на 12 групп, а именно одну контрольную и одиннадцать опытных групп, каждая содержащая 10 животных. Всем животным подкожно инокулировали летальную дозу гомогената опухоли. Животных опытных групп обрабатывали соединениями LA-2, LA-12 и LA-15 в водной суспензии, приготовленной ad hoc непосредственно перед применением. Суспензии содержали такие количества соответствующих соединений, что опытные животные получали дозы 12,6 и 3 мг/кг/день перорально 9 соответственно в объемах 0,2-0,4 мл; Платидиам применяли однократно в дозе 8 и 4 мг/кг подкожно в объеме 0,2 и 0,4 мл на пятый день после инокуляции.

Животных из контрольной группы и из группы каждой дозы взвешивали и определяли размеры опухолей на 14-й день после инокуляции. Половину животных из контрольной группы убивали под эфирным наркозом и хирургическим путем опухоли удаляли из организма. Зависимость массы опухоли от ее размера оценивали регрессионным анализом. Массу опухоли от каждого животного определяли по этой функции регрессии. Массы опухолей оценивали в случае точечных определений тестом эквивалентности двух средних значений (t-тест Student) при предположении о нормальном характере распределения значений массы и при предположении о возможных неизвестных разбросах. Арифметическое среднее значение определяли по отдельным значениям массы опухоли. Те различия в средних значениях, при которых значение критерия теста превышало критическое значение при уровне значимости 5%, оценивали как статистически достоверные.

Зависимость времени выживания от использованной дозы оценивали в сравнении с необработанным контролем. Время оценивали аналогично, как в случаях с лейкемией и асцитными опухолями, а именно в случае установленных временных точек тестом эквивалентности двух средних значений (t-тест Student) при предположении о логарифмическом/нормальном характере распределения временных значений и при предположении о возможных неизвестных разбросах (Roth Z., Josifko М. , Maly V., Trcka V.: Statisticke metody v experimentalni medicine, SZN Prague, 1992, p. 278). Геометрическое среднее значение рассчитывали по отдельным значениям времени выживания. Те средние значения критерия теста, различия которых превышали критическое значение при уровне значимости 5%, оценивались как статистически достоверные.

Наблюдали, что у животных, обработанных LA-12, была статистически достоверная (t-тест, р0,05) более низкая средняя масса опухолей (86%) при дозе 3 мг/кг/день перорально 9. Кроме того, у них были статистически достоверные (t-тест, р0,05) более высокие средние значения времени выживания (128%) в сравнении с необработанной контрольной группой (100%). Другие тестированные соединения (за исключением Платидиама) не имели статистически достоверного различия при точечных определениях времени выживания в сравнении с контрольной группой.

Соединение LA-12, а также Платидиам, было оценено как обладающее противоопухолевой активностью. Эффект не наблюдали с LA-2, соединением предшествующего уровня техники.

Результаты обобщены в табл. 6-1.

Мыши DBA1, самки, 20,4-21,8 г. Инокуляция опухоли подкожным введением 0,2 мл гомогената опухоли, разведение 1:1. Начало лечения с 5-го дня после инокуляции (9 перорально, 5-13-й дни, Платидиам 1 подкожно 5-й день).

В табл. 6-1 перечисляются, по отношению к соответствующим дозам, средние значения времени выживания, доверительные интервалы геометрического среднего значения для Р=1-=0,95 и относительные значения среднего времени выживания в виде процента от такового в контрольной группе.

Мыши DBA1, самки, 20,4-21,8 г. Инокуляция опухоли подкожным введением 0,2 мл гомогената опухоли, разведение 1:1. Начало лечения с 5-го дня после инокуляции (9 перорально, 5-13-й день, Платидиам 1 подкожно 5-й день).

В табл. 6-2 перечисляются, по отношению к соответствующим дозам, средние значения массы опухолей, доверительные интервалы арифметического среднего значения для Р=1-=0,95 и соответствующие значения средней массы опухоли в виде процента от таковой в контрольной группе.

Пример 10
Иллюстрация противоопухолевой активности комплекса аф-бис(ацетато)-b-(1-адамантиламин)-с-аммин-де-дихлорплатины (IV) (соединение (I), А=1-адамантиламин, “LA-12”) у мышей с асцитной опухолью Эрлиха (Ehrlich) после неоднократного перорального введения и сравнение с комплексом аф-бис(ацетато)-b-аммин-сd-дихлор-е-(циклогексиламин)платины (IV) (соединение (I), А=циклогексиламин, код JM216 “LA-2”-Kelland et al., 1993) и с комплексом цис-диамминдихлорплатины (II) (NSC 119875, активное вещество препарата Платидиама 10 инъекционного сухого)
200 мышей самок штамма ICR с массой тела примерно 24 г распределяли на 10 групп, а именно одну контрольную и девять опытных, каждая содержащая 20 животных. Всем животным внутрибрюшинно инокулировали летальную дозу асцитной жидкости от ATE. Животных опытных групп обрабатывали соединениями LA-12 и LA-2 в водной суспензии, приготовленной ad hoc непосредственно перед применением. Суспензии содержали такие количества соответствующих соединений, что опытные животные получали дозы 12, 6 и 3 мг/кг/день перорально 9 соответственно в объемах 0,2-0,4 мл; Платидиам использовали однократно в дозе 8, 4 и 2 мг/кг подкожно в объеме 0,2 и 0,4 мл на первый день после инокуляции. Половину животных в группе каждой дозы убивали на 10-й день после инокуляции под эфирным наркозом, после лапаротомии отсасывали асцитную жидкость и определяли массу опухоли у каждого из животных по разнице в массе до и после отсасывания асцитной жидкости. Оставшиеся животные были оставлены для мониторинга времени выживания.

Наблюдали, что у обработанных животных была более низкая средняя масса опухоли в сравнении с необработанным контролем (табл. 7-1). Однако увеличение среднего времени выживания было статистически высоко достоверным (р0,01) по сравнению с необработанным контролем только для LA-12 и Платидиама, но не LA-2 (табл. 7-2).

Мыши ICR, самки, 23,7-25,4 г. Инокуляция опухоли внутрибрюшинным введением, инокулят 0,2 мл асцитной жидкости. Начало лечения на 1-й день после инокуляции (9 перорально, 1-9-й день, Платидиам 1 подкожно 1-й день).

В табл. 7-1 перечисляются, по отношению к соответствующим дозам, средние значения массы опухолей, доверительные интервалы арифметического среднего значения для Р=1-=0,95 и соответствующие значения средней массы опухоли в виде процента от таковой в контрольной группе.

Мыши ICR, самки, 23,7-25,4 г. Инокуляция опухоли внутрибрюшинным введением, инокулят 0,2 мл асцитной жидкости. Начало лечения с 1-го дня после инокуляции (9 перорально, 1-9-й дни, Платидиам 1 подкожно 1-й день).

В табл. 7-2 перечисляются, по отношению к соответствующим дозам, средние значения времени выживания, доверительные интервалы геометрического среднего значения для Р= 1-=0,95 и соответствующие значения среднего времени выживания в виде процента от такового в контрольной группе.

Иллюстрация противоопухолевой активности комплекса аф-бис(ацетато)-b-(1-адамантиламин)-с-аммин-де-дихлорплатины (IV) (соединение (I), А=1-адамантиламин, “LA-12”), лекарственной формы включения LA-12 и комплекса аф-бис(ацетато)-b-(1-амино-3,5-диметиладамантан)-с-аммин-де-дихлорплатины (IV) (соединение (I), А=1-амино-3,5-диметиладамантан, “LA-15”) у мышей с ATE после непрерывного и дробного перорального введения и сравнение с комплексом аф-бис(ацетато)-b-аммин-cd-дихлор-е-(циклогексиламин)платины (IV) (соединение (I), А=циклогексиламин, код JM216, “LA-2”-Kelland et al., 1993) и с комплексом цис-диамминдихлорплатины (II) (NSC 119875, активное вещество препарата Платидиама 10 инъекционного сухого)
В опыте на животных с ATE, который был поставлен аналогично примеру 10, соединение LA-12, его лекарственная форма включения и соединение LA-15 вводили неоднократно в девяти суточных дозах, а именно на 1-9-й день после инокуляции вместе с LA-2 перорально по той же схеме. Платидиам вводили подкожно.

После окончания применения, половину животных в группе каждой дозы убивали на 10-й день после инокуляции под эфирным наркозом, после лапаротомии асцитную жидкость отсасывали и определяли массу опухоли у каждого из животных по разнице масс до и после отсасывания асцитной жидкости. Определяли асцитокрит в асцитной жидкости отдельных животных на центрифуге для микрометода определения гематокрита в капиллярных пробирках с гепарином длиной 75 мм. Значение “общего асцитокрита”, соответствующее массе клеток в асцитной жидкости, определяли по проценту асцитокрита и массы опухоли. Оставшихся животных сохраняли для мониторинга времени выживания. У этих животных время выживания контролировали каждый день. Зависимость значения времени выживания от использованной дозы оценивали в сравнении с контрольной группой.

Отдельные установленные временные точки, в качестве биологической ответной реакции, оценивали тестом эквивалентности двух средних значений (t-тест Student). Среднее геометрическое значение определяли по отдельным значениям времени выживания, арифметическое среднее значение рассчитывали из отдельных значений массы опухоли и общего асцитокрита. Различие между средними значениями оценивали тестом эквивалентности двух средних значений (t-тест Student) при предположении о нормальной вероятности распределения значений массы, а также значений общего асцитокрита и логарифмическом/нормальном распределении временных значений, все при предположении о возможных неизвестных разбросах. Те различия между средними значениями, чьи значения критерия теста превышали критическое значение при уровне значимости 5 и 1%, оценивали как статистически достоверные и высоко статистически достоверные, соответственно.

Оптимальную дозу рассчитывали из значений времени выживания согласно пропорциональной модели риска Кокса (Сох) (Carter et al., 1982). Параметры распределения Weinbull и логарифмическое преобразование предварительных данных использовали для установления основной и модифицированной функции выживания из экспериментальных данных.

Лекарственная форма включения LA-12 увеличивала статистически достоверное время выживания по сравнению с контрольной группой и была оценена как обладающая противоопухолевой активностью, аналогично Платидиаму в дозах 8 и 4 мг/кг подкожно 1. Соединения LA-2, LA-12 и LA-15 не увеличивали время выживания статистически достоверно по сравнению с контрольной группой (табл. 8-1).

Наблюдали, что у обработанных животных было меньшее среднее значение массы опухоли в сравнении с необработанной контрольной группой (табл. 8-2), но это различие не было статистически достоверным.

Среднее значение массы клеточной фракции опухоли (общий асцитокрит) было статистически достоверно ниже только в случае соединения LA-15 в дозе 6 мг/кг/день перорально 9 (табл. 8-3), что является доказательством противоопухолевого действия указанного соединения.

Полученные результаты обобщены в табл. 8-1 и 8-2.

Мыши ICR, самки, 30,1-33,7 г. Инокуляция опухоли внутрибрюшинным введением, инокулят 510² опухолевых клеток в 0,2 мл асцитной жидкости. Начало лечения с 1-го дня после инокуляции (9 перорально, 1-9-й день, Платидиам 1 подкожно 1-й день).

В табл. 8-1 перечисляются, по отношению к соответствующим дозам, средние значения времени выживания, доверительные интервалы геометрического среднего значения для Р= 1-=0,95 и соответствующие значения среднего времени выживания в виде процента от такового в контрольной группе.

Мыши ICR, самки, 30,1-33,7 г. Инокуляция опухоли внутрибрюшинным введением, инокулят 510⁶ опухолевых клеток в 0,2 мл асцитной жидкости. Начало лечения с 1-го дня после инокуляции (9 перорально, 1-9-й день, Платидиам 1 подкожно 1-й день).

В табл. 8-2 перечисляются, по отношению к соответствующим дозам, средние значения массы опухолей, доверительные интервалы арифметического среднего значения для Р=1-‘=0,95 и соответствующие значения средней массы опухолей в виде процента от таковой в контрольной группе.

Мыши ICR, самки, 30,1-33,7 г. Инокуляция опухоли внутрибрюшинным введением, инокулят 510⁶ опухолевых клеток в 0,2 мл асцитной жидкости. Начало лечения с 1-го дня после инокуляции (9 перорально, 1-9-й день, Платидиам 1 подкожно 1-й день).

В табл. 8-3 перечисляются, по отношению к соответствующим дозам, средние значения массы опухолей, доверительные интервалы арифметического среднего значения для Р=1-=0,95 и соответствующие значения средней массы опухолей в виде процента от таковой в контрольной группе.

Формула изобретения

1. Комплексное соединение платины со степенью окисления IV формулы I

где Х представляет атом галогена;
В представляют независимо друг от друга гидроксильную группу или карбоксилатную группу, содержащую 1-6 атомов углерода;
А представляет группу -NH₂-R, где R является трициклическим углеводородным фрагментом, содержащим 10-14 атомов углерода, которая может быть необязательно замещена в трициклическом кольце одной или двумя алкильной группой(ами), каждая содержащая 1-4 атомов углерода.

2. Комплексное соединение платины по п. 1 формулы I, где А представляет адамантиламиногруппу и Х и В имеют значения, определенные в п. 1.

3. Комплексное соединение платины по п. 1 формулы I, где А представляет 3,5-диметиладамантиламиногруппу и Х и В имеют значения, определенные в п. 1.

4. Комплекс включения комплекса платины со степенью окисления IV формулы I

где X представляет атом галогена;
В представляют независимо друг от друга гидроксильную группу или карбоксилатную группу, содержащую 1-6 атомов углерода;
А представляет группу -NH₂-R, где R является трициклическим углеводородным фрагментом, содержащим 10-14 атомов углерода, которая может быть необязательно замещена в трициклическом кольце одной или двумя алкильной группой(ами), каждая содержащая 1-4 атомов углерода,
с бета- или гамма-циклодекстрином, который может быть необязательно замещен гидроксиалкильными группами, содержащими 1-6 атомов углерода.

5. Способ получения комплексного соединения платины формулы I по п. 1, отличающийся тем, что комплекс двухвалентной платины формулы II

где Х и А имеют значения, определенные в п. 1,
окисляют по атому платины перекисью водорода при образовании дигидроксокомплекса платины (IV) и, необязательно, гидроксильные группы указанного комплекса замещают карбоксилатными группами действием ацилирующего агента.

6. Способ получения комплекса включения комплекса платины формулы I с бета- или гамма-циклодекстрином, который может быть необязательно замещен гидроксиалкильными группами, содержащими 1-6 атомов углерода, по п. 4, отличающийся тем, что раствор комплекса платины формулы I в органическом растворителе смешивают с водным раствором бета- или гамма-циклодекстрина, который необязательно замещен гидроксиалкильными группами, содержащими 1-6 атомов углерода, с последующим выпариванием растворителей из полученного раствора.

7. Комплексное соединение платины формулы I или его комплекс включения с бета- или гамма-циклодекстрином по п. 1 или 4 в качестве фармацевтического препарата, обладающего противоопухолевой активностью.

8. Фармацевтическая композиция для лечения онкологических заболеваний, отличающаяся тем, что она содержит, по меньшей мере, одно комплексное соединение платины формулы I или его комплекс включения с бета- или гамма-циклодекстрином по п. 1 или 4 в качестве активного соединения и, по меньшей мере, один фармацевтический эксципиент.

РИСУНКИ