Патент на изобретение №2196607

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ АНТИРАБИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии. Способ осуществляется путем 5-кратной иммунизации овец инактивированным вирусом бешенства. Иммунизацию проводят в 3-42 точки животного с интервалом 14 дней. Способ позволяет получать сыворотки крови овец с титрами антител в тесте ингибиции фокусов флюоресценции 1: 10240 – 20480, а в реакции диффузной преципитации – 1:16 – 32. Способ позволяет эффективно и безопасно получать гипериммунные антирабические сыворотки с высокой вируснейтрализующей и преципитирующей активностью. 2 табл.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к способу получения диагностической гипериммунной антирабической сыворотки крови овец, и может быть использовано в научных учреждениях, предприятиях биологической промышленности и производственных лабораториях.

В настоящее время лабораторная диагностика бешенства базируется на серологических методах, достоверность которых зависит от качества ряда используемых реагентов и, в первую очередь, от активности и специфичности иммуноглобулинов [Laboratory techniques in rabies.- 1996,-450 с.].

В практике получения антирабических сывороток крови ряд исследователей использовали различные виды гетерологичных и гомологичных животных (морских свинок, кроликов, собак, овец, ослов, крупного рогатого скота, лошадей).

Таким образом, все известные способы получения антирабической сыворотки заключались во введении вируса под кожу животных (только на заключительных этапах использовали иной способ иммунизации) с 1-7 дневными интервалами, т. е. не учитывали динамику формирования антител и интервалы между инъекциями антигена.

Поэтому с учетом вышеописанного и в отличие от прототипов для получения высокоактивной антирабической сыворотки крови овец необходимо использование грундиммунизации с последующей комбинированной иммунизацией (внутрикожной и внутримышечной) овец гомологичным сорбированным и эмульгированным антигенами и введением антигена с высокой множественностью инъецирования.

В связи с этим нами разработан способ гипериммунизации животных при внутрикожном или внутримышечном введении антигена. Целью предлагаемого изобретения является разработка эффективного и безопасного способа получения гипериммунной антирабической сыворотки, обладающей высокой вируснейтрализующей и преципитирующей активностью.

Поставленная цель достигается тем, что при получении сывороток крови овец животных иммунизируют внутрикожным и внутримышечным способами инактивированным вирусом бешенства, референс-штаммом CVS, с высокой множественностью инъецирования (3-42 точек), с сочетанным использованием адъювантов и соблюдением интервалов иммунизации (14 дней).

В отечественной литературе материалов и результатов подобных исследований нами не обнаружено.

Примеры конкретного выполнения
Для иммунизации применяли гомологичный антиген вируса бешенства, представляющий собой 5%-ную суспензию мозга овец, инфицированных вирусом бешенства, референс-штамм CVS, инактивированную -пропиолактоном (1:4000, в течение 2 ч при 37^oС).

Антиген, предназначенный для внутрикожного введения, эмульгировали в равных пропорциях с адъювантом Фрейнда (первоначально в полном адъюванте Фрейнда (ПАФ), в последующем в неполном адъюванте Фрейнда (НАФ)). Антиген для внутримышечного введения сорбировали на 0,3% гидроокиси алюминия в течение 18 ч при 4^oС. Схема иммунизации представлена в таблице 1.

После окончания иммунизации отбирали сыворотки крови и определяли уровень вируснейтрализующих и преципитирующих антител в тесте ингибиции фокусов флуоресценции (ТИФФ) и реакции диффузионной преципитации (РДП).

С целью сравнительных исследований проведена иммунизация овец аналогично подготовленным антигеном (гомологичный, инактивированный, сорбированный), но традиционным способом – подкожно. Результаты сравнительного тестирования активности полученных гипериммунных сывороток представлены в табл. 2.

Из данных таблицы видно, что титр сывороток крови овец, полученных предлагаемым способом, составлял в ТИФФ 1:10240-20480, в РДП 1:16-32.

Следовательно, предлагаемым способом гипериммунизации овец можно получить высокоактивные антирабические сыворотки крови, пригодные для разработки высокочувствительных и специфичных средств диагностики бешенства.

Предлагаемый способ безопасен и может быть промышленно применен в научно-исследовательских институтах и производственных лабораториях.

Формула изобретения

Способ получения гипериммунной антирабической сыворотки крови овец, включающий иммунизацию овец инактивированным антигеном вируса бешенства и выделение гипериммунных антирабических сывороток, отличающийся тем, что иммунизацию овец проводят 5-кратно с интервалом 14 дней, используя внутрикожное и внутримышечное введение антигена вируса бешенства с адъювантами (адъюванты Фрейнда и гидроокись алюминия соответственно) в 3-4-2 точки животного, а выделенные сыворотки имеют титр антител в тесте ингибиции фокусов флюоресценции 1: 10240 – 20480, а в реакции диффузной преципитации – 1: 16 – 32.

РИСУНКИ

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 31.03.2003

Номер и год публикации бюллетеня: 18-2004

Извещение опубликовано: 27.06.2004