Патент на изобретение №2196174

(54) КОНСОРЦИУМ ШТАММОВ БИФИДОБАКТЕРИЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ КИСЛОМОЛОЧНЫХ, НЕФЕРМЕНТИРОВАННЫХ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ, БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК И БАКТЕРИЙНЫХ ПРЕПАРАТОВ

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицинской и пищевой промышленности. Консорциум получен путем сочетания девяти штаммов бифидобактерий – B.bifidum 791, ЛВА-3, B.longum В379М, Я-3, B.breve 79-119, 79-88, B.infantis 73-15, 79-43, B. adolescentis Г7513. Предлагаемый консорциум штаммов девяти видов бифидобактерий активно размножается в питательных средах с накоплением производственной биомассы в короткие сроки культивирования, сквашивает молоко с образованием сгустка с хорошими вкусовыми и органолептическими свойствами, обладает специфической активностью. Консорциум штаммов можно рекомендовать в составе заквасок для приготовления кисломолочных лечебно-диетических продуктов, неферментированных пищевых продуктов и бактерийных препаратов. Консорциум обладает повышенной специфической активностью, способен более быстро приживляться в кишечнике и способствующий нормализации микрофлоры кишечника в более ранние сроки. Получают лечебно-профилактические пищевые продукты с высокими органолептическими свойствами, что расширяет ассортимент арсенала средств.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой консорциум штаммов бифидобактерий, который может быть использован для приготовления кисломолочных, неферментированных пищевых продуктов и бактерийных препаратов.

Бифидосодержащие средства (препараты, биодобавки и продукты) предназначены для нормализации микробиоценоза кишечника людей, страдающих дисбактериозом, возникшим в результате неблагоприятных экологических условий, стрессовых влияний, перенесенных кишечных заболеваний, длительной антибиотикотерапии, лучевой и химиотерапии.

В кишечнике человека встречаются 5 видов бифидобактерий – B.bifidum, B. longum, B. adolescentis, B.breve и B.infantis. С наибольшей частотой в биоценозе обнаруживаются виды B.bifidum, B.longum и B.adolescentis (39-75%), причем два последних преобладают у взрослых людей, а виды B.breve и B.infantis – преимущественно у детей грудного возраста (17-36%).

Известны зарубежные моно- и комплексные препараты-эубиотики и кисломолочные продукты, включающие в свой состав бифидобактерии видов B.bifidum, B. longum, B. adolescentis, B.breve (патент 2336886, патент 2411008, Франция; патент 637297, Швейцария; патент 2134179, патент 2421066 ФРГ; патент 05227946, патент 0430642, Япония; патент 4645667, США).

У нас в стране для приготовления бактерийных препаратов и продуктов лечебно-диетического питания применяют отечественные штаммы бифидобактерий видов B. bifidum 1,791, B. longum B379M, B.adolescentis MC-42 (авторское свидетельство 343588, патент 1347221, патент 849779, патент 863639).

Задачей настоящего изобретения является получение консорциума штаммов бифидобактерий, обладающих комплексом свойств, присущих как отдельным штаммам, так и консорциуму из них, обладающего повышенной специфической активностью, способного более быстро приживляться в кишечнике, и способствующего нормализации микрофлоры кишечника в более ранние сроки.

Консорциум получен путем сочетания девяти штаммов бифидобактерий – B. bifidum 791, ЛВА-3, B.longum В379М, Я-3, B.breve 79-119, 79-88, B.infantis 73-15, 79-43, B.adolescentis Г7513.

Эти штаммы имеют близкие культуральные и физиолого-биохимические свойства, а также обладают сквашивающей активностью.

Штамм B.bifidum 791 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка, депонирован в ЦМПМ ВНИИгенетика под В-3300.

Штамм B. bifidum ЛВА-3 выделен из содержимого кишечника здорового взрослого человека, депонирован в ЦМПМ ВНИИгенетика под В-3299.

Штамм B. longum B379M выделен из содержимого кишечника здорового взрослого человека, депонирован в ЦМПМ ВНИИгенетика под В-2000.

Штамм B.longum Я-3 выделен из содержимого кишечника здорового взрослого человека, депонирован в ЦМПМ ВНИИгенетика под В-3301.

Штамм B.breve 79-119 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка, депонирован под 153 в Государственной коллекции микроорганизмов-представителей нормальной микрофлоры человека (ГКНМ) МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского.

Штамм B.breve 79-88 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка, депонирован под 150 в ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского.

Штамм B. infantis 73-15 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка, депонирован под 155 в ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского.

Штамм B. infantis 73-43 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка, депонирован под 156 в ГКНМ МНИИЭМ им.Г.Н.Габричевского.

Штамм B. adolescentis Г7513 выделен из содержимого кишечника здорового взрослого человека, депонирован под 158 в ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского.

Заявляемый консорциум штаммов бифидобактерий используется для получения кисломолочных, неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок и бактерийных препаратов.

Как показали проведенные нами исследования, не все штаммы бифидобактерий способны сосуществовать в виде консорциума, сохраняя при этом свои свойства. Предлагаемый нами комплекс штаммов не только не подавляет друг друга, а напротив, суммируя полезные свойства каждого из них, повышает специфическую активность консорциума, тем самым улучшая его свойства.

Техническим результатом заявленного изобретения является получение консорциума, обладающего повышенной специфической активностью, способного более быстро приживляться в кишечнике и способствующего нормализации микрофлоры кишечника в более ранние сроки, а также получение лечебно-профилактических пищевых продуктов с высокими органолептическими свойствами, что расширяет ассортимент арсенала средств.

Культурально-морфологические признаки консорциума.

Клетки штаммов бифидобактерий представляют собой грам+ полиморфные палочки с бифуркацией или утолщением на 1-2-х концах, склонные к образованию скоплений. В жидких питательных средах растут по всей высоте объема, кроме зоны аэробиоза. Логарифмическая фаза роста заканчивается к 24 часам.

Физиолого-биохимические признаки консорциума.

Неподвижные, бесспоровые анаэробы. Оптимальная температура выращивания – 37,5-38^oС, рН питательных сред – 7,2-7,4. Каталазу не образуют, желатину не разжижают. Сбраживают глюкозу с образованием уксусной и L+ молочной кислоты без образования газа, закисляя среду выращивания до рН 4,1-3,8. Видовая принадлежность каждого из штаммов определена в соответствии с их ферментативной активностью. Штаммы сквашивают молоко к 24 часам культивирования.

Консорциум штаммов активно размножается на средах разного состава, а также в молоке, сквашивая его, к 16-24 часам культивирования с высоким титром бифидобактерий – 10⁸/мл, что является основным показателем использования штаммов в технологическом процессе.

Продуцируя кислоты, консорциум штаммов бифидобактерий ингибирует рост патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Способность консорциума штаммов наращивать микробную массу в питательных средах, сквашивать молоко в короткие сроки, проявлять специфическую активность делает возможным его использование в приготовлении кисломолочных, неферментированных пищевых продуктов, биодобавок и бактерийных препаратов.

Пример 1. Использование консорциума штаммов бифидобактерий для приготовления кисломолочных продуктов.

1-й пассаж: лиофилизированные штаммы B. bifidum 791, ЛВА-3, B.longum В379М, Я-3, B.breve 79-119, 79-88, B.infantis 73-15, 79-43, B.adolescentis Г7513 в количестве 0,1 г сухой биомассы (1 доза) вносят по отдельности в среду выращивания и титруют методом десятикратных разведений до 10^-7-9. Выращивают до появления отдельных колоний в последнем разведении. Или 1 дозу сухой биомассы каждого штамма вносят в две пробирки с 30 мл питательной среды в каждой. Выращивают до получения биомассы с содержанием не менее 10⁸/мл бифидобактерий.

2-й пассаж: выросшую культуру каждого из штаммов объемом не более 10% вносят в среду накопления и культивируют до получения биомассы с содержанием микробных тел не менее 10⁸/мл.

3-й пассаж (продукт): полученную биомассу каждого из штаммов смешивают, получая консорциум, и в объеме не более 5% вносят в стерильное молоко и культивируют до образования сгустка. Получают готовый кисломолочный продукт с нежным вкусом густой однородной консистенции с содержанием не менее в 1 мл 10⁸ живых бифидобактерий
Кисломолочный продукт, приготовленный на основе консорциума штаммов бифидобактерий (см. пример 1), прошел клинические испытания. Он был использован при лечении 25 больных с различными хроническими заболеваниями желудочно-кишечного тракта и вирусными гепатитами. Во всех случаях после проведенного лечения было отмечено купирование диспептических явлений, нормализация стула, улучшение состояния кишечной микрофлоры в более короткие сроки, по сравнению с применением кисломолочного продукта, приготовленного с использованием моно-штамма.

Полученные данные позволяют считать кисломолочные продукты, приготовленные на основе заявляемого консорциума штаммов бифидобактерий, эффективными продуктами лечебно-диетического питания и рекомендовать их для лечения больных с хроническими заболеваниями желудочно-кишечного тракта, вирусными гепатитами, сопровождающимися выраженными явлениями дисбактериоза кишечника.

Пример 2. Использование консорциума штаммов бифидобактерий для получения неферментированных пищевых продуктов.

1-й пассаж: лиофилизированные штаммы B. bifidum 791, ЛВА-3, B.longum В379М, Я-3, B.breve 79-119, 79-88, B.infantis 73-15, 79-43, B.adolescentis Г7513 в количестве 0,1 г сухой биомассы (1 доза) вносят по отдельности в среду выращивания и титруют методом десятикратных разведений до 10^-7-9. Выращивают до появления отдельных колоний в последнем разведении. Или 1 дозу сухой биомассы каждого штамма вносят в две пробирки с 30 мл питательной среды в каждой. Выращивают до получения биомассы с содержанием не менее 10⁸/мл бифидобактерий.

2-й пассаж: выросшую биомассу каждого из штаммов объемом не более 10% вносят в среду накопления и культивируют до получения биомассы с содержанием микробных тел не менее 10⁸/мл.

Получение пищевого продукта, обогащенного бифидобактериями: полученную биомассу каждого из штаммов смешивают, получая консорциум, вносят в пищевое сырье (молоко, соки, пиво, и пр.), перемешивают и разливают в емкости. В результате получают продукт с титром бифидобактерий не менее в 1 мл 10⁶.

Пример 3. Использование консорциума штаммов бифидобактерий для получения биологически активной добавки.

1-й пассаж: лиофилизированные штаммы B. bifidum 791, ЛВА-3, B.longum В379М, Я-3, B.breve 79-119, 79-88, B.infantis 73-15, 79-43, B.adolescentis Г7513 активизируют путем посева в питательную среду. Выращивают до получения биомассы с содержанием не менее 10⁸/мл бифидобактерий.

2-й пассаж: выросшую биомассу каждого из штаммов объемом не более 10% вносят в среду накопления и культивируют до получения биомассы с содержанием микробных тел не менее 10⁸/мл.

Получение БАД: полученную биомассу каждого из штаммов смешивают, получая консорциум, вносят в питательную среду не более 5% и выращивают до получения биомассы с содержанием бифидобактерий в 1 мл не менее 10⁸ и разливают в емкости. В результате получают биологически активную добавку, которая представляет собой жидкий концентрат с высоким, не менее 10⁸/мл, содержанием бифидобактерий.

Пример 4. Использование консорциума штаммов бифидобактерий для получения бактерийного препарата.

Штаммы B.bifidum 791, ЛВА-3, B.longum В379М, Я-3, B.breve 79-119, 79-88, B.infantis 73-15, 79-43, B.adolescentis Г7513 1-2-3 – его пассажей культивируют до получения микробной массы с содержанием бифидобактерий не менее 10⁸/мл. К выращенной биомассе консорциума добавляют защитные среды высушивания (сахароза 80% и желатина 8% в объеме 10-12%, обезжиренное молоко до 20%). Полученную суспензию разливают по 2 мл (2 дозы) в ампулы или по 5 мл (5 доз) в пенициллиновые флаконы, замораживают при t (40-45)^oC и лиофилизируют из замороженного состояния в вакуум-сушильных аппаратах. Полученный препарат в 1 дозе содержит 10⁸ живых клеток бифидобактерий. Согласно НТД на сухой бифидумбактерин (ФС 42-1,32 ВС 94) допускается содержание в 1 дозе препарата не менее 10⁷ живых клеток бифидобактерий.

Таким образом, предлагаемый консорциум штаммов девяти видов бифидобактерий активно размножается в питательных средах с накоплением производственной биомассы в короткие сроки культивирования; сквашивает молоко с образованием сгустка с хорошими вкусовыми и органолептическими свойствами; обладает специфической активностью.

Полученный консорциум можно рекомендовать для использования в составе заквасок для приготовления кисломолочных лечебно-диетических продуктов, неферментированных пищевых продуктов и бактерийных препаратов.

Формула изобретения

Консорциум штаммов бифидобактерий Bifidobacterium bifidum ЦМПМ ВНИИгенетика В-3300, Bifidobacterium bifidum коллекционный номер ЦМПМ ВНИИгенетика В-3299, Bifidobacterium longum коллекционный номер ЦМПМ ВНИИгенетика В-2000, Bifidobacterium longum коллекционный номер ЦМПМ ВНИИгенетика В-3301, Bifidobacterium adolescentis коллекционный номер ГКНМ МНИИЭМ им. Г. Н. Габричевского 158, Bifidobacterium breve коллекционный номер ГКНМ МНИИЭМ им. Г. Н. Габричевского 153, Bifidobacterium breve коллекционный номер ГКНМ МНИИЭМ им. Г. Н. Габричевского 150, Bifidobacterium infantis коллекционный номер ГКНМ МНИИЭМ им. Г. Н. Габричевского 155, Bifidobacterium infantis коллекционный номер ГКНМ МНИИЭМ им. Г. Н. Габричевского 156, используемый для получения кисломолочных, неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок и бактериальных препаратов.