Патент на изобретение №2193197
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ СОВМЕСТИМОСТИ ЭРИТРОЦИТАРНОЙ МАССЫ КРОВИ ДОНОРА И КРОВИ РЕЦИПИЕНТА
(57) Реферат: Способ может быть использован в медицине, а именно в хирургии, анестезиологии – реаниматологии и трансфузиологии для определения биологической совместимости препаратов крови донора и крови реципиента. У больного производят забор венозной крови, регистрируют показатели хемилюминесценции сыворотки крови в течение 5 мин, затем регистрируют хемилюминесценцию эритроцитарной массы донорской крови. После чего совмещают препарат крови донора и сыворотку больного, инкубируют в течение 5 мин, при температуре 37oС. Затем регистрируют хемилюминесценцию совмещенных препарата крови донора и сыворотки больного. Светосумму свечения рассчитывают известным способом в условных единицах. При отсутствии увеличения или уменьшения величины светосуммы более чем на 50% определяют препарат крови донора и кровь реципиента как биологически совместимые. Способ повышает точность определения биологической совместимости эритроцитарной массы крови донора и крови реципиента, снижает число посттрансфузионных осложнений. Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и анестезиологии- реаниматологии. Известен способ определения биологической совместимости переливаемой эритроцитарной массы крови и организма реципиента путем струйного переливания 10-15 мл эритроцитарной массы крови донора реципиенту с последующим наблюдением за состоянием реципиента в течение 3-х мин (см. Инструкция по переливанию крови и ее компонентов, Москва, 1988 г., стр. 16-19, МЗ СССР). Эту процедуру выполняют трижды. Оценивается частота пульса, частота дыхания, появление одышки, затрудненного дыхания, гиперемии лица и т.д. В случае развития клинических признаков реакции или осложнения поведение больного становится неспокойным: появляется ощущение озноба или жара, стеснение в груди, боли в пояснице, животе, голове. При этом могут развиваться следующие явления: снижение артериального давления, учащение пульса, учащение дыхания, появление бледности, а затем цианоза лица. При появлении любого из описываемых признаков переливание крови или ее компонентов должно быть немедленно прекращено. Отсутствие реакций у больного после троекратной проверки является основанием для продолжения трансфузии. Однако этот метод предусматривает введение препаратов крови донора в организм реципиента, что в случае положительной реакции вызывает патологическую реакцию у больного. Кроме того, у больных в состоянии наркоза при проведении этой пробы реакция организма реципиента может быть нечеткой или запоздалой. Прототипом предлагаемого изобретения является способ определения совместимости по группам крови АВО, которая выполняется с сывороткой крови больного, получаемой путем центрифугирования или отстоя (см. Инструкция по переливанию крови и ее компонентов. Москва. 1988 г. МЗ СССР). На белую пластинку наносят 2-3 капли сыворотки крови больного, к которой добавляют в 5 раз меньшую каплю крови донора. Кровь перемешивают с сывороткой больного, затем пластинку периодически покачивают в течение 5 мин и одновременно наблюдают результат реакции. Отсутствие агглютинации эритроцитов донора свидетельствует о совместимости крови донора и реципиента в отношении групп крови АВО. Появление агглютинации указывает на их несовместимость и на недопустимость переливания данной крови. Данный метод эффективен только в отношении агглютининов и агглютиногенов групп крови АВО и не реагирует на другие группы антигенов. Технический результат – повышение точности определения биологической совместимости эритроцитарной массы крови донора и крови реципиента и снижение числа посттрансфузионных осложнений. Способ осуществляется следующим образом. У больных (реципиентов) производят забор венозной крови с последующим исследованием железо-индуцированной хемилюминесценции (ХЛ) сыворотки крови, а также определяют люминол-зависимую хемилюминесценцию клеток эритроцитарной массы донора с помощью прибора для измерения хемилюминесценции ХЛ-03 в течение 5 мин. В качестве основного показателя ХЛ используют светосумму свечения. Сыворотку крови в количестве 0,5 мл разводят в 20 мл фосфатного буфера (рН 7,45), помещают в кювету хемилюминомера, в котором поддерживается температура 37oС. В течение 1 мин измеряют спонтанное свечение, а затем при постоянном перемешивании добавляют инициатор ХЛ (1 мл 50 мМ раствора сернокислого железа) и регистрируют индуцированное свечение в течение 5 мин. На основании полученных кривых ХЛ измеряют величины спонтанного свечения (СП), быстрой вспышки (А), светосуммы свечения (S). Эритроцитарную массу крови донора в количестве 0,1 мл разводят в 2 мл физиологического раствора (рН 7,0) с добавлением 0,5 мМ люминола. Регистрируют индуцированное свечение в течение 5-7 мин, измеряют светосумму свечения (S). Затем совмещают эритроцитарную массу донорской крови и сыворотку реципиента в соотношении 1:10 и инкубируют при Т=37oС в течение 5 мин, после чего определяют показатели ХЛ клеток совмещенных компонентов. При отсутствии повышения или понижения светосуммы свечения совмещенных компонентов на 50% эритроцитарная масса крови донора и кровь реципиента считается совместимой. В качестве конкретных примеров изучены изменения ХЛ при определении индивидуальной совместимости эритроцитарной массы донорской крови и сыворотки реципиента у 30 больных с различной группой крови (0(1), А(2), В(3), АВ(4)) резус-положительной и резус-отрицательной, которым по показаниям была назначена трансфузионная терапия. Среди пациентов не было больных с заболеваниями крови. Все больные нуждались в трансфузионной терапии в результате перенесенных травм, состоявшегося желудочного кровотечения, кровотечения из женских половых органов. Возраст больных составлял от 5 до 82 лет. Оценка совместимости проводилась параллельно двумя методами: методом определения совместимости по группам крови АВО (см. Инструкция по переливанию крови и ее компонентов. Москва. 1988 г. МЗ СССР), ее использовали в качестве контрольной, а также методом регистрации ХЛ. При последнем методе характерным для несовместимости препаратов крови донора и сыворотки реципиента являлось повышение или понижение светосуммы свечения смешанного препарата на 50 и более процентов от исходной величины светосуммы свечения клеток донорского препарата. Преимуществом предлагаемого способа является возможность графической регистрации проводимой реакции и возможность количественной оценки результата реакции. Пример 1. Больной Л., 39 лет, поступил в отделение реанимации. Диагноз: состояние после операции, остеосинтез левой бедренной кости, геморрагический синдром. Определены показания для переливания эритроцитарной массы донорской крови. Проведено исследование группы крови больного-реципиента и группы крови донора, согласно Инструкции по переливанию крови и ее компонентов. Москва 1988 г. Проведено исследование совместимости крови донора и сыворотки реципиента по группам антигенов АВО и резус-фактору. Противопоказаний для переливания не выявлено. Проведена биопроба, которая также не выявила противопоказаний для переливания, однако через 15 мин после начала переливания основной массы препарата у больного появилась мышечная дрожь, бледность кожных покровов. Трансфузия прекращена, проведены лечебные мероприятия. Проявления трансфузионной реакции исчезли в течение последующих 20 мин. После чего было проведено исследование совместимости эритроцитарной массы крови донора и сыворотки реципиента методом хемилюминесценции. Эритроцитарную массу крови донора в объеме 0,1 мл развели в 2 мл физиологического раствора (рН 7,0), добавили 0,5 мМ люминола и в течение 5 мин регистрировали хемилюминесценцию с помощью прибора ХЛ-03. Светосумма донорского препарата составила 15 у.е. Сыворотку реципиента в количестве 0,5 мл развели в 20 мл фосфатного буфера (рН 7,45), поместили в кювету хемилюминомера, в течение 1 мин измеряли спонтанное свечение, а затем при постоянном перемешивании добавили 1 мл 50 мМ раствора сернокислого железа и регистрировали индуцированное свечение в течение 5 мин. Светосумма свечения сыворотки реципиента была 8 у.е. После инкубации клеток донора и сыворотки реципиента в соотношении 1:10, в течение 5 мин при Т= 37oС, вновь измерили светосумму свечения смешанных инкубированных клеток донорского препарата и сыворотки реципиента (0,1 мл смешанного препарата развели в 2 мл физиологического раствора (рН 7,0), добавили 0,5 мМ люминола и регистрировали свечение в течение 5 мин). Светосумма свечения составила 3 у. е. , т.е. снизилась в 5 раз или на 500%, что свидетельствует о несовместимости данного препарата донорской крови и сыворотки реципиента. Пример 2. Больная Н., 39 лет, поступила в отделение реанимации. Диагноз: внематочная беременность по типу трубного аборта, геморрагический шок 2 степени. Операция: лапаротомия, ликвидация последствий внематочной беременности. Выявлены показания для переливания эритроцитарной массы. Определена группа крови донора и реципиента. Определена групповая и резус совместимость крови донора и реципиента обычным способом согласно инструкции. Определена совместимость крови донора и сыворотки реципиента методом хемилюминесценции согласно вышеуказанной методике. При этом светосумма свечения клеток донорской крови составила 1 у.е., а светосумма сыворотки реципиента 17 у.е. После инкубации клеток крови донорского препарата и сыворотки реципиента в соотношении 1: 10, в течение 5 мин при Т=37oС, светосумма свечения инкубированных с сывороткой реципиента клеток донорской крови достоверно не изменилась и по-прежнему составила 1 у.е. После проведения биологической пробы больной была перелита эритроцитарная масса без каких-либо субъективных и объективных патологических проявлений, что указывает о высокой совместимости донорского препарата крови и сыворотки реципиента. Таким образом, полученные данные позволяют утверждать, что метод регистрации хемилюминесценции способен оценить биологическую совместимость эритроцитарной массы донорской крови и сыворотки реципиента. Светосумма хемилюминесценции клеток эритроцитарной массы донорской крови после инкубации их с сывороткой реципиента в течение 5 мин при Т=37oС использовалась в качестве диагностического критерия биологической совместимости. Биологическая совместимость препарата донорской крови и сыворотки реципиента характеризуется изменением светосуммы свечения клеток крови донора после инкубации их с сывороткой реципиента при Т=37oС, в течение 5 мин в пределах, не превышающих 50% от величины светосуммы клеток донорской крови до инкубации, вне зависимости от того произошло ли увеличение или уменьшение величины данной светосуммы. Формула изобретения
MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 21.07.2003
Извещение опубликовано: 20.02.2005 БИ: 05/2005
|
||||||||||||||||||||||||||