Патент на изобретение №2193193

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ КЛИНИКО-ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОГО ВАРИАНТА ЛИМФАТИЗМА У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии. Способ обеспечивает более точную и раннюю диагностику клинико-патогенетического варианта лимфатизма у детей раннего возраста. Проводят определение лимфатизма по клиническим признакам. При этом вариант лимфатизма устанавливают по показателям спонтанной адгезии лимфоцитов и индекса их чувствительности к модуляторам адгезии – ФГА и тималину, диагноз конституционального варианта лимфатизма устанавливают при наличии спонтанной адгезии лимфоцитов, превышающей 36,52,49, и индексов чувствительности клеток к ФГА и тималину ниже 1,460,08 и 1,440,07 соответственно, диагноз алиментарного варианта лимфатизма устанавливают при уровне спонтанной адгезии лимфоцитов в пределах 36,52,49 и индексах чувствительности клеток к ФГА и тималину ниже 1,460,08 и 1,440,07 соответственно, диагноз акселерационного лимфатизма устанавливают при показателях спонтанной адгезии лимфоцитов ниже 36,52,49 и индексах чувствительности клеток к ФГА и тималину в пределах 1,460,08 и 1,440,07 соответственно. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии.

Диагностика лимфатизма с определением его клинико-патогенетического варианта в раннем возрасте крайне важна, так как позволяет своевременно назначить соответствующий диетический режим, составить план наблюдения детей на амбулаторном этапе с учетом варианта иммунопатологического предрасположения (индивидуальный график прививок, наблюдение специалистами и т.д.), разработать тактику лечения в случае возникновения острых заболеваний и определить прогноз состояния здоровья, так как каждый из известных в настоящее время вариантов лимфатизма угрожаем по формированию определенной патологии. Дети с конституциональным вариантом подвержены частым острым респираторным и хроническим бронхолегочным заболеваниям, ЛОР-патологии с формированием хронических очагов инфекции, вегето-сосудистой дистонии с симптомами симпато-адреналового дисбаланса, эндокринопатиям. В частности, имеющийся у них гипокортицизм затрудняет адаптацию к изменяющимся условиям внешней среды, в том числе в случае возникновения острого заболевания; при поступлении в детские учреждения часты срывы адаптации. Дети с алиментарным лимфатизмом склонны к формированию хронической патологии желудочно-кишечного тракта, аллергических заболеваний, эндокринопатий (ожирение). Лица с акселерационным вариантом угрожаемы по возникновению хронических заболеваний дыхательных путей, печени и почек, а также формированию онкопатологии. Кроме того, ребенок с любым вариантом лимфатизма должен рассматриваться как угрожаемый по развитию гемобластозов, что делает проблему своевременной диагностики состояния лимфатизма еще более актуальной.

Мы поставили перед собой задачу разработать диагностические критерии для более точной, ранней и необременительной для организма ребенка диагностики варианта лимфатизма.

Таким образом, уровень спонтанной адгезии лимфоцитов крови и характер изменения их адгезионной активности в ответ на добавление индукторов (ФГА, тималин) – являются одним из параметров иммунореактивности организма ребенка и могут быть использованы для определения варианта лимфатизма у детей с иммунопатологическим предрасположением.

Технический результат предлагаемого способа диагностики клинико-патогенетического варианта лимфатизма заключается в определении адгезивной способности лимфоцитов, в котором в качестве дифференцирующего критерия используется различный уровень спонтанной адгезии лимфоцитов и их чувствительности к модуляторам клеточной адгезии – фитогемагглютинину (ФГА) и тималину.

^oС. При этом часть адгезировавшихся клеток представляла собой моноциты, а оставшиеся в инкубационной среде – лимфоциты. Идентификация типа клеток проводилась после отмывания и последущего окрашивания путем светового микроскопирования. На каждом этапе выделения клеток определялась жизнеспособность ядросодержащих клеток и их подсчет с помощью витальной окраски 0,1% раствором трипанового синего, приготовленного на фосфатном буфере (рН 7,2-7,4). Подсчет жизнеспособных клеток проводили в камере Горяева. Число жизнеспособных клеток в суспензиях составляло 90-95%.

По 0,1 мл взвеси лимфоцитов смешивали с 0,1 мл питательной среды 199 (рН 7,4), после чего 0,1 мл взвеси помещали в камеру Горяева и подсчитывали количество клеток в 5 больших квадратах. В лунки 96-луночного планшета для иммунологических исследований с V-образным дном помещали по 0,05 мл питательной среды 199, 0,0008% раствора фитогемагглютинина и 0,01% раствора тималина, приготовленного на питательной среде 199. Из другого объема клеток лимфоциты в количестве 0,05 мл добавляли к предварительно внесенным в лунки питательной среде и модуляторам адгезии. После инкубации в термостате в течение 2 часов при температуре 37^o

САД=(Кк-Кнеадг)/Кк100%, где
Кк – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации;
Кнеадг – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации в присутствии питательной среды 199.

Мод адг=(Кк-Кмод)/Кк100%, где
Кк – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации;
Кмод – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации в присутствии модулятора адгезии.

Индекс чувствительности клеток рассчитывали по формуле (рационализаторское предложение местного значения от 13.12.1999 г., N2273 Федоровой М.Ю., Чемоданова В.В., Баклушина А.Е., Горнакова И.С. “Способ оценки чувствительности мононуклеаров и лимфоцитов у детей с лимфатизмом к модуляторам адгезии” ):
И чувствительности = Мод адг/ САД, где
И чувствительности – индекс чувствительности;
САД – показатель спонтанной адгезии;
Мод адг – показатель модулированной адгезии.

Нами обследовано 124 ребенка раннего возраста с различными вариантами лимфатизма. При этом 67 детей имели конституциональный вариант, 29 – алиментарный и 28 – акселерационный. 22 ребенка аналогичного возраста составили контрольную группу.

Диагноз лимфатизма с определением его варианта у детей ставился на основании клинико-лабораторных показателей с привлечением ряда дополнительных методов обследования (иммунологическое, рентгенологическое, ультразвуковое).

Для доказательства адекватности оценки варианта лимфатизма по показателям адгезии и чувствительности клеток к ее модуляторам и клинико-лабораторному способу диагностики провели сопоставление данных клинико-лабораторного обследования и предложенного способа как у детей с лимфатизмом, так и у лиц контрольной группы. Выявленные изменения адгезивной активности клеток сравнивались с результатами контрольной группы обследования (таблица).

Проведенные исследования показали, что у детей без лимфатизма отмечается выраженная стимуляция адгезивной активности лимфоцитов в присутствии ФГА и тималина, о чем свидетельствуют более высокие по сравнению с показателем спонтанной адгезии уровни ФГА- и тималин-модулированной адгезии. В группе детей с конституциональным лимфатизмом отмечается повышение спонтанной адгезии лимфоцитов по сравнению с контролем. У детей с алиментарным лимфатизмом уровень спонтанной адгезии лимфоцитов нормальный (т.е. не отличается от показателей контроля), а при акселерационном варианте он наиболее низкий. Добавление модуляторов адгезии (ФГА, тималина) во всех изучаемых группах детей не приводит к наблюдаемому в контрольной группе усилению адгезивной активности клеток, что не позволяет отдифференцироватъ один вариант лимфатизма от другого. В то же время чувствительность клеток к ФГА и тималину у детей с конституциональным и алиментарным лимфатизмом снижена, а при акселерационном варианте нормальна за счет сохранения функциональных резервов адгезивной активности клеток и более низкого исходного уровня их кондиционирования.

Таким образом, различные уровни спонтанной адгезии лимфоцитов и их чувствительности к ФГА и тималину могут быть использованы для диагностики варианта иммунопатологического предрасположения (лимфатизма).

Пример 1. Больная С., 1 год 3 месяца (рост 79 см, вес 13,9 кг). Ребенок от 1 беременности, протекавшей на фоне анемии, гестоза второй половины, угрозы прерывания в третьем триместре, первых срочных стремительных родов, осложненных развитием среднетяжелой асфиксии у ребенка. При рождении крик после реанимационных мероприятий, слабый, масса при рождении 3830 г, длина тела 54 см. На естественном вскармливании до 1 месяца жизни, затем переведена на адаптированные смеси, прикормы даны по возрасту. Физическое развитие – рост выше среднего, избыток массы 11%. Часто болела простудными заболеваниями, в возрасте 1 года перенесла острую ангину, подчелюстной лимфаденит. Госпитализирована в возрасте 1 года 3 месяцев в связи с острой двухсторонней пневмонией, осложненной развитием инфекционного токсикоза, длительного синдрома бронхиальной обструкции. Выявлены признаки лимфатизма: грубые черты лица; макросомия; генерализованное увеличение лимфоузлов (9 групп) на фоне бледности и повышенной влажности кожных покровов, склонности к гипотермии, пастозности и сниженного тургора тканей, мышц и их тонуса, дряблости кожной складки; гиперплазия ткани небной миндалины I степени, аденоиды I степени; печень пальпируется на 3,5 см ниже реберной дуги, селезенка – на 1 см. В период реконвалесценции от заболевания проведено исследование спонтанной, ФГА- и тималин-модулированной адгезии лимфоцитов с оценкой способности клеток к прилипанию на пластиковой поверхности иммунологических планшетов при двухчасовой инкубации при температуре 37^oС.

Показатель спонтанной адгезии (САД) рассчитывали по формуле:
САД-(Кк-Кнеадг)/Кк100%, где
Кк – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации;
Кнеадг – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации.

Показатель ФГА-, теофиллин- или тималин-модулированной адгезии (Мод адг) рассчитывали по формуле:
Мод адг=(Кк-Кмод)/Кк100%, где
Кк – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации;
Кмод – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации в присутствии модулятора адгезии.

Индекс чувствительности клеток рассчитывали по формуле:
И чувствительности= Мод адг/ САД, где
И чувствительности – индекс чувствительности;
САД – показатель спонтанной адгезии;
Мод адг – показатель модулированной адгезии.

Показатели спонтанной адгезии лимфоцитов составили 52,73%, ФГА-модулированной – 47,09%, тималин-модулированной – 44,27%, индекс чувствительности лимфоцитов к ФГА – 0,93 и тималину – 0,84. Как видно, сочетание высокого уровня спонтанной адгезии лимфоцитов (52,73%, что превышает значения 36,52,49) с низкими индексами чувствительности клеток к ФГА (0,93, что значительно ниже значений 1,460,08) и тималину (0,84, что также ниже значений 1,440,07), позволяет диагностировать у ребенка конституциональный вариант лимфатизма. Проведение дополнительных методов обследования позволило выявить тимомегалию III степени, гепатоспленомегалию, депрессию Т-звена иммунитета (по показателям иммунограммы), снижение уровня 17-ОКС, что свидетельствует о гипокортицизме и подтверждает диагноз конституциональной формы лимфатизма. Более того, низкий функциональный резерв адгезионной способности исследуемых клеток свидетельствует о сниженной иммунологической реактивности организма, клинически подтвержденной фактом неблагоприятного течения заболевания: развитие инфекционного токсикоза и бронхообструктивного синдрома, отсутствие положительной динамики состояния ребенка в ответ на стандартную терапию, что потребовало подключения интенсивных методов лечения, иммуно- и гормонотерапии.

Пример 2. Больная В., 1 год 6 месяцев (рост 78 см, вес 14,8 кг). Ребенок от 9 беременности, протекавшей на фоне гестоза, угрозы невынашивания, осложненной кандидозным кольпитом, вторых срочных родов. Масса при рождении 3600 г, длина 52 см, закричала сразу. На естественном вскармливании до 3 недель, в дальнейшем переведена на искусственное вскармливание адаптированными смесями; прикормы в виде овощного пюре и манной каши на основе козьего молока даны одновременно в возрасте 3 месяцев. Физическое развитие: рост средний, избыток массы 20%. Психомоторное развитие по возрасту. Госпитализирована в возрасте 1 года 6 месяцев в связи с острой очаговой правосторонней неосложненной пневмонией. Помимо наличия в клинической картине характерного для пневмонии бронхолегочного, интоксикационного синдромов и дыхательной недостаточности, у ребенка выявлены признаки лимфатизма: дигестивный тип конституции на фоне макросомии, бледность и гипергидроз кожи, пастозность мягких тканей и избыточное развитие подкожно-жировой клетчатки, недостаточное развитие мышечной ткани, гиперплазия небных миндалин I степени, полиадения в 7 группах лимфоузлов, печень пальпируется на 1,5 см ниже реберной дуги, пальпируется край селезенки. В период реконвалесценции от острого заболевания проведено исследование спонтанной, ФГА- и тималин-модулированной адгезии лимфоцитов с оценкой способности клеток к прилипанию на пластиковой поверхности иммунологических планшетов при двухчасовой инкубации при температуре 37^oС.

Показатель спонтанной алгезии (САД) рассчитывали по формуле:
САД=(Кк-Кнеадг)/Кк100%, где
Кк – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации;
Кнеадг – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации.

Показатель ФГА- и тималин-модулированной адгезии (Мод адг) рассчитывали по формуле:
Мод адг=(Кк-Кмод)/Кк100%, где
Кк – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации;
Кмод – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации в присутствии модулятора адгезии.

Индекс чувствительности клеток рассчитывали по формуле:
И чувствительности=Мод адг/САД, где
И чувствительности – индекс чувствительности;
САД – показатель спонтанной адгезии;
Мод адг – показатель модулированной адгезии.

Показатели спонтанной адгезии лимфоцитов составил 36,11%, ФГА-индуцированной – 43,34%, тималин-модулированной – 41,11%, индекс чувствительности к ФГА – 1,2 (что ниже значений 1,460,08) и тималину – 1,14 (ниже 1,440,07). Выявленный уровень спонтанной адгезии лимфоцитов (36,11%), лежащий в пределах 36,52,49, со сниженными индексами чувствительности к ФГА (1,2) и тималину (1,14), свидетельствуют о наличии у ребенка алиментарной формы лимфатизма. Дополнительное обследование позволило выявить тимомегалию I степени, незначительное увеличение правой доли печени (61 мм) и селезенки (68 мм по длиннику), отсутствие признаков иммунодепрессии по данным иммунологического обследования, нормальные уровни 17-ОКС, что в совокупности с данными анамнеза о перекорме ребенка и клинического обследования подтверждает диагноз алиментарного варианта лимфатизма.

Пример 3. Больной М., 1 год (рост 82 см, вес 12,6 кг). Ребенок от 2 беременности, протекавшей на фоне гестоза, угрозы невынашивания, первых срочных родов. Масса при рождении 4000 г, длина 58 см, закричал сразу. На естественном вскармливании до 3 месяцев, в дальнейшем переведен на искусственное вскармливание адаптированными смесями; прикормы даны по возрасту. Физическое развитие: рост выше среднего, масса соответствует росту. Психомоторное развитие по возрасту. Редко болеет простудными заболеваниями. Госпитализирован в возрасте 1 года в связи с острой очаговой левосторонней пневмонией. Помимо наличия в клинической картине характерного для пневмонии бронхолегочного, интоксикационного синдромов и дыхательной недостаточности, у ребенка выявлены признаки лимфатизма: мышечный тип конституции на фоне макросомии, слабую выраженность полиадении (пальпация семи групп лимфоузлов), гипертрофия ткани небных миндалин 2 степени (по данным осмотра ЛОР-врача) на фоне соответствия весо-ростовых показателей, нормальной окраски кожных покровов, равномерного распределения подкожной основы, удовлетворительного тургора тканей, достаточного развития мышечной ткани. После реконвалесценции от острого заболевания проведено исследование спонтанной, ФГА- и тималин-модулированной адгезии лимфоцитов с оценкой способности клеток к прилипанию на пластиковой поверхности иммунологических планшетов при двухчасовой инкубации при температуре 37^oС.

Показатель спонтанной адгезии (САД) рассчитывали по формуле:
САД=(Кк-Кнеадг)/Кк100%, где
Кк – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации;
Кнеадг – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации.

Показатель ФГА-, теофиллин- или тималин-модулированной адгезии (Мод адг) рассчитывали по формуле:
Мод адг=(Кк-Кмод)/Кк100%, где
Кк – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации;
Кмод – количество клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации в присутствии модулятора адгезии.

Индекс чувствительности клеток рассчитывали по формуле:
И чувствительности = Мод адг/ САД, где
И чувствительности – индекс чувствительности;
САД – показатель спонтанной адгезии;
Мод адг – показатель модулированной адгезии.

Показатели спонтанной адгезии лимфоцитов составили 27,27%, ФГА-модулированной – 41,85%, тималин-модулированной – 41,09%, индекс чувствительности клеток к ФГА – 1,53 и тималину – 1,51.

Как видно, сочетание низкого уровня спонтанной адгезии лимфоцитов (27,27%, что ниже значений 36,52,49) с сохранением чувствительности клеток к ФГА (индекс 1,53 лежит в пределах 1,460,08) и тималину (индекс 1,51 находится в пределах 1,440,07) позволяет диагностировать у ребенка акселерационный вариант лимфатизма. С помощью дополнительных методов исследования выявлена тимомегалия I степени (по данным рентгенологического обследования), незначительное увеличение правой доли печени (72 мм по данным УЗИ) без нарушения ее функции (по данным биохимического анализа крови), нормальные показатели величины селезенки и иммунного статуса (по показателям иммунограммы I уровня), что подтвердило диагноз акселерационной формы лимфатизма. Дальнейшее наблюдение ребенка не показало прогрессирования и распространения полиадении, увеличения тимуса или печени, а продолжающиеся высокие росто-весовые прибавки в течение последующих 3 лет на фоне слабо выраженного синдрома гиперплазии лимфоидной ткани уточнило наличие акселерационного варианта лимфатизма.

Таким образом, заявленный способ является объективным и информативным и, характеризуя адгезионный потенциал клеток и, следовательно, иммунологическую реактивность организма детей с иммунопатологическим предрасположением, диагностирует вариант лимфатизма у ребенка раннего возраста.

Формула изобретения

Способ диагностики клинико-патогенетического варианта лимфатизма у детей раннего возраста, включающий определение его по клиническим признакам, отличающийся тем, что вариант лимфатизма устанавливают по показателям спонтанной адгезии лимфоцитов и индекса их чувствительности к модуляторам адгезии – ФГА и тималину, диагноз конституционального варианта лимфатизма устанавливают при наличии спонтанной адгезии лимфоцитов, превышающей 36,52,49, и индексов чувствительности клеток к ФГА и тималину ниже 1,460,08 и 1,440,07 соответственно, диагноз алиментарного варианта лимфатизма устанавливают при уровне спонтанной адгезии лимфоцитов в пределах 36,52,49 и индексах чувствительности клеток к ФГА и тималину ниже 1,460,08 и 1,440,07 соответственно, диагноз акселерационного лимфатизма устанавливают при показателях спонтанной адгезии лимфоцитов ниже 36,52,49 и индексах чувствительности клеток к ФГА и тималину в пределах 1,460,08 и 1,440,07 соответственно.

РИСУНКИ

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 01.07.2002

Извещение опубликовано: 10.10.2006 БИ: 28/2006