Патент на изобретение №2190424
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) АНТИГЕННЫЙ СОСТАВ ЧУМНОЙ ХИМИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ
(57) Реферат: Изобретение относится к медицине и предназначено для совершенствования средств вакцинопрофилактики чумы, а именно разработки чумной химической вакцины, и касается антигенного состава чумной химической вакцины. В качестве антигенного состава чумной химической вакцины предлагается использование капсульного антигена ФI фракции I Y.pestis, а также, дополнительно, Б-антигена, выделяемого из биомассы клеток Y.pseudotuberculosis. Б-антиген представляет собой крупномолекулярный антигенный комплекс, включающий полисахаридную, белковую и липидную компоненты. Преимущество изобретения заключается в том, что первичная иммунизация препаратом, включающим антигены ФI и Б, способна индуцировать развитие выраженной специфической невосприимчивости к чумной инфекции у белых мышей, морских свинок и обезьян павианов, гамадрилов, а также характеризуется умеренной постпрививочной реакцией для экспериментальных животных. 5 табл. Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для разработки средств специфической профилактики чумы. Известна вакцина чумная живая сухая на основе микробов штамма EV, иммунизаторное действие которой основано на приживлении и размножении в макроорганизме клеток вакцинного штамма. Вакцина, выпускаемая НИИ микробиологии МО РФ, г. Киров, в соответствии с регламентом производства 377-97 и фармакопейной статьей ФС 42-3877-99, представляет собой пористую массу серовато-белого или слегка желтоватого цвета, содержащую живую культуру вакцинного штамма чумного микроба EV линии НИИЭГ, высушенную методом лиофилизации в стабилизирующей среде. Общим существенным признаком с заявляемым антигенным составом является то, что вакцина предназначена для первичной иммунизации людей против чумы, а также для их ревакцинации через 1 год (в особых случаях через 6 мес.) после первичной прививки вакцины. Недостатками названной живой вакцины являются выраженная реактогенность, опасность поствакцинальных осложнений, сложность обеспечения точной дозировки, неэффективность в условиях проведения антибиотикопрофилактики. Известна чумная вакцина USP, представляющая собой взвесь инактивированных формальдегидом чумных бактерий, выращенных при температуре 37oС, в концентрации 2  109 микробов/мл. Вакцина USP, производимая фирмой “Cutter Biological”, Berkeley, США, по правительственной лицензии 8, включает помимо “убитых” микробов в растворе NaCl для инъекций, содержащих ФI-антиген, 0,04% формалина, следовые количества экстракта сердечной мышцы быка, дрожжевого экстракта, агара, пептонов и пептидов сои и казеина и 0,5% фенола в качестве консерванта.
Общими существенными признаками с заявляемым антигенным составом являются наличие в препарате ФI-антигена как одного из компонентов микробной клетки, а также то, что они предназначены для использования в составе вакцинных препаратов не только для ревакцинации, но и для первичной иммунизации против чумы без предшествующей грундиммунизации живой чумной вакциной.
Недостатком фракции I как протективной основы чумной химической вакцины является ее низкая эффективность при первичной иммунизации экспериментальных животных (морских свинок, обезьян павианов гамадрилов), исключающая возможность конструирования соответствующего вакцинного препарата для людей.
Общим существенным признаком с заявляемым антигенным составом является использование в качестве одного из иммуногенов ФI-антигена.
Задачей изобретения является создание антигенного состава чумной химической вакцины, предназначенной как для первичной иммунизации, так и для ревакцинации после иммунизации живой чумной вакциной.
Поставленная задача решается благодаря тому, что наряду с уже известным ФI-антигеном заявляемый антигенный состав препарата дополнительно содержит Б-антиген.
Препарат Б-антигена представляет собой слегка опалесцирующую жидкость. Б-антиген является крупномолекулярным антигенным комплексом, включающим полисахаридную, белковую и липидную составляющие, относительно прочно связанные между собой.
Предложенный препарат Б-антигена получают из культуральной жидкости глубинной аэрируемой культуры псевдотуберкулезного микроба штамма 681 (музей микробных культур НИИМ МО РФ), выращенной в жидкой питательной среде на основе ферментативного гидролизата мяса при температуре (37 1)oС в течение 27-36 ч, с использованием методов ультра-, микрофильтрации и высаливания сульфатом аммония.
Препарат Б-антигена способен вызывать формирование специфической невосприимчивости при первичной однократной иммунизации морских свинок в отношении как подкожного, так и аэрогенного способов заражения животных культурой капсулообразующих штаммов возбудителя чумы. Первичная иммунизация морских свинок Б-антигеном индуцирует защиту животных и при аэрогенном заражении вирулентной культурой бескапсульного штамма возбудителя чумы, что является важным достоинством, учитывая наличие циркулирующих в природе штаммов Y.pestis, не синтезирующих ФI-антиген. Учитывая вышеизложенное, использование для иммунизации сочетания двух антигенов (ФI и Б) позволяет считать реальным разработку такого вакцинного препарата, который был бы эффективен при первичной иммунизации и морских свинок, и белых мышей – лабораторных животных двух видов, принятых для оценки иммунобиологических свойств чумных вакцин.
Между совокупностью существенных признаков заявляемого объекта и достигаемым техническим результатом существует причинно-следственная связь, а именно: первичная однократная иммунизация морских свинок комбинацией двух антигенов (ФI и Б), в основном, за счет последнего из них вызывает формирование специфической невосприимчивости животных к заражению культурами капсулообразующего (ФI+) и бескапсульного (ФI–) штаммов возбудителя чумы. Иммунизация морских свинок препаратами только ФI-антигена (прототип) или вакцины USP (аналог), проведенная в аналогичных условиях, не обеспечивает выраженной защиты животных от чумной инфекции.
Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами.
Пример 1. Получение антигенов ФI и Б.
Для получения препарата Б-антигена использовали штамм 681 Y.pseudotuberculosis, I серотип, депонированный в музее микробных культур НИИМ МО РФ. Глубинное выращивание проводили в ферментере МД-300, “Marubishi”, Япония, в среде на основе ферментативного гидролизата мяса с использованием в качестве источника углеводного питания галактозы. Культивирование вели при температуре (371)oС в течение 30 ч при постоянном аэрировании и перемешивании. Культуральную жидкость отделяли от клеток центрифугированием, затем ее концентрировали ультрафильтрацией (порог – 10000 Д), стерилизовали микрофильтрацией (диаметр пор – 0,2 мкм). Б-антиген из концентрата культуральной жидкости выделяли с помощью высаливания сульфатом аммония. Препарат ресуспендированного в забуференном фосфатами физиологическом растворе и отдиализованного против него же Б-антигена имел в реакции двойной диффузии в геле по Оухтерлони 32 АЕ с антисывороткой к Б-антигену и содержал 0,4 мг/мл сухого вещества.
Пример 2. Протективные свойства заявляемого антигенного состава препарата для экспериментальных животных, зараженных культурой возбудителя чумы.
В табл. 1 представлены результаты изучения защитных свойств заявляемого антигенного состава препарата – ФI и Б и препаратов сравнения для экспериментальных животных, зараженных подкожным и аэрогенным способами вирулентной культурой возбудителя чумы, штамм 1300, через 21 сутки после однократной подкожной иммунизации депонированными в неполном адъюванте Фрейнда антигенными препаратами.
Как видно из табл.1, препарат Б-антигена в указанной дозе вызывал, в отличие от ФI-антигена, развитие выраженной специфической невосприимчивости у морских свинок как к подкожному, так и к аэрогенному заражению культурой возбудителя чумы – выжило соответственно 100% и 80% иммунизированных животных. Совместное введение двух антигенов (ФI и Б) защитило всех взятых в опыт животных при обоих способах инфицирования.
В табл. 2 представлены результаты подкожного заражения культурой возбудителя чумы морских свинок и белых мышей, иммунизированных заявляемым антигенным составом препарата (антигены ФI и Б в весовом соотношении 1,0:0,7) в нарастающих с 4-кратным шагом дозах, а также отдельными антигенами в аналогичных дозах. Для белых мышей Б-антиген оказался непротективным, значения показателя ЛД50 после иммунизации ФI-антигеном и заявляемым препаратом составили 2,0:1,20 мкг и 0,7:1,97 мкг соответственно.
Последний из указанных препаратов индуцировал выраженную защиту морских свинок и, как это видно из табл. 2, в основном, за счет Б-антигена. Следует отметить, что каждый из двух антигенов заявляемого препарата стимулирует иммуногенность другого как для морских свинок, так и для белых мышей (р<0,05).
Однократная подкожная иммунизация обезьян павианов гамадрилов заявляемым препаратом (табл. 3) защитила 2 из 4 животных, аэрогенно зараженных возбудителем чумы в дозе 60 ЛД50, в то время как иммунизация препаратом сравнения (ФI-антиген) не предотвратила гибели от первично легочной чумы ни одной из двух обезьян. Пример 3. Реактогенные свойства заявляемого антигенного состава препарата для экспериментальных животных. Реактогенные свойства заявляемого антигенного состава изучали, оценивая его “острую” (табл.4) и “хроническую” (табл.5) токсичность при введении морским свинкам – лабораторным животным, наиболее чувствительным к воздействию Б-антигена. Как видно из данных, представленных в табл. 4, гибели животных от интракордиального введения заявляемого препарата в испытанных дозах не отмечали; снижения массы тела также зафиксировано не было. При оценке “хронической” токсичности препарата (табл.5) достоверного снижения массы тела морских свинок не зарегистрировано (препарат вводили в дозе, эквивалентной предлагаемой для человека в пересчете на 1 кг массы тела).Формула изобретения
РИСУНКИ
PC4A Государственная регистрация перехода исключительного права без заключения договора
(73) Патентообладатель(и):
(73) Патентообладатель:
Дата и номер государственной регистрации перехода исключительного права: 08.06.2010 № РП0000819
Извещение опубликовано: 20.07.2010 БИ: 20/2010
|
||||||||||||||||||||||||||
