Патент на изобретение №2189597
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩЕЙ КОМПЛЕМЕНТАРНОЙ АКТИВНОСТИ СЫВОРОТКИ КРОВИ ПРИ ПЕРИТОНИТЕ
(57) Реферат: Изобретение относится к медицине. Способ осуществляют путем инкубации испытуемой сыворотки со стандартной взвесью клеток селезенки крысы. При этом в качестве контроля используют эту же сыворотку, но предварительно инактивированную при 56oС, и по наличию в пробе лизированных клеток селезенки определяют общую активность комплемента в процентах. Способ позволяет более точно определять общую активность комплемента сыворотки крови. Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для определения общей активности комплемента при перитоните. Известен способ определения общей комплементарной активности сыворотки крови по 50% гемолизу, который заключается в инкубации 300- и 120-кратного разведения исследуемой сыворотки со стандартной суспензией сенсибилизированных бараньих эритроцитов и последующим определением оптической плотности надосадочной жидкости на ФЭК. Активность комплемента выражают в гемолитических единицах. За одну 50% гемолитическую единицу комплемента принимают такое его количество, которое вызывает гемолиз 50% 0,5 мл стандартной суспензии сенсибилизированных эритроцитов при 37oС за 45 минут (Справочник. Лабораторные методы исследования в клинике/ Под ред. проф. В.В.Меньшикова. – М.: Медицина, 1987, с. 284-286). Недостатком известного способа является его низкая точность, которая связана с трудностями стабилизации тестируемой культуры клеток, зависящей от резистентности эритроцитов барана, их концентрации, количества антител, используемых для сенсибилизации, величины рН. Задача изобретения – разработка способа, позволяющего с более высокой точностью определять активность комплемента сыворотки крови. Поставленная задача достигается тем, что в известном способе, включающем инкубацию сыворотки крови с тестовой культурой клеток, существенным отличительным признаком является то, что с целью повышения точности способа, исследуемую сыворотку сравнивают с контрольной пробой, в качестве которой используют ту же сыворотку, предварительно инактивированную при 56oС, а в качестве тестовой культуры – стандартную взвесь клеток селезенки крысы. Способ осуществляют следующим образом. У беспородных белых крыс извлекают селезенку, гомогенизируют ее в забуференном физиологическом растворе, фильтруют через капроновый фильтр, подсчитывают количество ядросодержащих клеток с помощью камеры Горяева и готовят стандартную взвесь, содержащую 7500 клеток в 1 мкл. Затем взвесь клеток разливают по 0,1 мл в 2 пробирки. В первую пробирку вносят 0,1 мл свежей испытуемой сыворотки (опыт). Во вторую пробирку в качестве контроля добавляют 0,1 мл той же сыворотки, но предварительно инактивированной при 56oС 30 минут. Содержимое пробирок перемешивают и инкубируют 60 мин при 37oС. После инкубации пробирки встряхивают и подсчитывают количество ядросодержащих клеток. Общую активность комплемента (OAK) выражают в процентах, пропорциональных количеству погибших клеток по формуле  Пример 1. У белых крыс извлекали селезенку, путем гомогенизации в забуференном физиологическом растворе получали клеточную взвесь, фильтровали через капроновый фильтр и с помощью камеры Горяева доводили ее концентрацию до 7500 ядросодержащих клеток в 1 мкл. Затем взвесь клеток разливали по 0,1 мл в две пробирки и в первую пробирку добавляли равный объем свежей сыворотки крови больного разлитым перитонитом (опыт), во вторую – добавляли 0,1 мл этой же сыворотки, но предварительно инактивированной при 56oС 30 мин. После 60-минутной экспозиции при 37oС пробирки со смесью вынимали из термостата, встряхивали и подсчитывали количество ядросодержащих клеток в каждой пробирке. Количество клеток в опыте – 2050 в 1 мкл, количество клеток в контроле – 5000 в 1 мкл, общая активность комплемента по формуле ОАК=100-2050/5000  100 составила 59%.
Пример 2. У белых крыс извлекали селезенку, путем гомогенизации в забуференном физиологическом растворе получали клеточную взвесь, фильтровали через капроновый фильтр и с помощью камеры Горяева доводили ее концентрацию до 7500 ядросодержащих клеток в 1 мкл. Затем взвесь клеток разливали по 0,1 мл в две пробирки и в первую пробирку добавляли равный объем свежей сыворотки крови здорового донора (опыт), во вторую – добавляли 0,1 мл этой же сыворотки, но предварительно инактивированной при 56oС 30 мин. После 60-минутной экспозиции при 37oС пробирки со смесью вынимали из термостата, встряхивали и подсчитывали количество ядросодержащих клеток в каждой пробирке. Количество клеток в опыте – 6488 в 1 мкл, количество клеток в контроле – 7300 в 1 мкл, общая активность комплемента по формулеОАК=100-6488/7300 100 составила 11,1%.
С использованием прототипа и предложенного нами способа обследовано 83 больных острым перитонитом и 30 здоровых доноров (контрольная группа).
Показатели общей активности комплемента в сыворотках здоровых доноров и больных перитонитом при определении известным способом практически не разнились. Они составляли 30,2 7,4 ед. СН50 в контрольной группе, 35,08,6 ед. СН50 у больных перитонитом. При определении активности комплемента предлагаемым способом показатели в группе больных перитонитом более чем в 4 раза были выше, чем у здоровых лиц (59,51,1% против 10,60,2%).
Таким образом, результаты показали, что предложенный способ по сравнению с прототипом позволяет с более высокой точностью определять общую активность комплемента сыворотки крови и своевременно проводить обоснованную корригирующую терапию, что будет способствовать снижению летальности у больных перитонитом, снижению числа послеоперационных осложнений.
Формула изобретения
MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 12.01.2003
Номер и год публикации бюллетеня: 16-2004
Извещение опубликовано: 10.06.2004
|
||||||||||||||||||||||||||
