Патент на изобретение №2184968

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПРИВЫЧНОГО НЕВЫНАШИВАНИЯ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству. Способ обеспечивает повышение точности прогноза привычного невынашивания на прегравидарном этапе. Проводят исследование иммуногенетического профиля лейкоцитов периферической крови в супружеской паре, при этом на основе показателей HLA-антигенов I, II классов определяют дискриминантную функцию F по формуле: F (x) = 0,78A1 + 0,74A9 + 0,77A11 + 1,71A28 – 0,94A29 – 0,95B21 + 5,04B39 – 1,54B57 – 1,87B65 – 0,22Dr5 + 1,39Dr7 – 0,83MA9 + 0,56MA10 – 1,12MA28 + 1,73MA29 – 0,74MB5 + 0,56MB7 + 0,71MB8 +1,11MB12 + 1,62MB14 – 0,65MB27 – 0,61MB53 – 0,83MDr2 – 1,60MDr3 – 0,51MDr5 – 0,67MDr7 – 0,46, где А1, А9, А11, А28, А29 – гены А локуса жены, МА9, МА10, МА28, МА29 – гены А локуса мужа, В21, В39, В57, В65 – гены В локуса жены, МВ5, МВ7, МВ8, МВ12, МВ14, МВ27, МВ53 – гены В локуса мужа, Dr5, Dr7 – гены Dr локуса жены, MDr2, MDr3, MDr5, MDr7 – гены Dr локуса мужа, N – норма, если F (x) > 0, P – патология, если F (x) < 0. Полученная функция обеспечивает чувствительность решающего правила прогноза 79,4%, специфичность 81%, эффективность 80,7%.

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования привычного невынашивания у женщин группы высокого риска по перинатальной патологии, что позволит формировать группы риска на прегравидарном этапе, с проведением у женщины при беременности иммуноцитотерапии аллогенными лимфоцитами отца будущего ребенка.

Актуальность
В последние годы иммунологическая концепция привычного прерывания беременности не вызывает ни у кого сомнения. В ее основе лежит представление о прерывании беременности как иммунологической реакции отторжения материнским организмом фетоплацентарного комплекса (реакция “хозяин против трансплантата”) за счет слабого распознавания лимфоцитами женщины антигенных детерминант мужа и отсутствия достаточного стимула к формированию общих и локальных факторов иммуносупрессии в супружеских парах, где есть общие пары-антигены по системе HLA. Привычное невынашивание ассоциируется с реакциями лейкоцитарной сенсибилизации и развитием иммунологического конфликта, который проявляется усилением иммунного ответа матери на фетоплацентарный комплекс, несущий HLA-антигены отца, что подтверждается повышенной концентрацией антиплацентарных, лимфоцитотоксических антител, циркулирующих иммунных комплексов [1,2,8,9,10,11,12].

Аналог
Аналогом предлагаемого метода является описанный в литературе метод прогнозирования привычного невынашивания путем определения кариотипа супругов.

Частота транслокаций у супругов с нарушением репродуктивной функции составляет 2-10%, т. е. значительно выше, чем в общей популяции (0,2%) [Кулаженко В.П и др., 1977 г.]. А по данным Н.А. Каретниковой (1980 г.) показано, что у супругов с привычным невынашиванием частота хромосомных вариантов в среднем составляет 21,7%, т.е. значительно выше, чем в популяции.

Прототип
Прототипом предлагаемого изобретения является метод прогнозирования у женщины самопроизвольных абортов с помощью предварительного типирования HLA-антигенов лимфоцитов супругов [4]. Так, по данным Ю.М. Зарецкой, достоверно чаще при привычном невынашивании встречались HLA-антигены А9, В5 [4], тогда как в работе И.А. Гусевой (1995 г.) не были выявлены антигенные маркеры привычного невынашивания.

Иммуногенетический подход к роли HLA-антигенов не ограничивается только поиском антигенных маркеров патологии [1,2]. Актуальным остается наличие общих пар антигенов системы HLA, особенно DR-локуса в качестве одной из причин, приводящих к невынашиванию [1,2].

Таким образом, вопрос о роли HLA-антигенов является актуальным и требует дальнейшего углубленного изучения.

Прогноз невынашивания только на основе обнаружения возможных антигенов маркеров невынашивания (А9, В5) и наличия у супругов общих пар антигенов не может быть высоко достоверным, так как их частота достаточно высока как в норме, так и при патологии, к тому же описанные методы не позволяют дифференцировать привычное невынашивание неясной этиологии от других осложнений беременности.

Сущность изобретения
Цель изобретения заключается в разработке способа прогнозирования привычного невынашивания беременности на прегравидарном этапе.

Данный способ позволяет выявить группу риска, а значит, и предпринять соответствующие этиопатогенетические мероприятия.

Способ основан на иммуногенетическом исследовании супружеской пары.

Способ осуществляют следующим образом. Проводят забор 5 мл венозной крови натощак утром у каждого из супругов. Однократный забор крови позволяет одномоментно у супругов определить от 140 до 210 антигенов лейкоцитов по системе HLA в зависимости от панели сывороток [7].

Лимфоциты выделяют в градиенте плотности фиколл-верографина. Для типирования HLA-антигенов I класса используют мононуклеары, полученные из периферической крови с помощью градиентного центрифугирования на фиколл-градиенте. Для определения HLA-антигенов II класса исследуют лимфоциты, обогащенные В-клетками, т.к. этот класс антигенов лучше представлен на антигенпрезентирующих клетках, включая и В-лимфоциты. Лимфоциты, используемые в реакциях серологического типирования, должны быть жизнеспособны. После выделения лимфоцитов на фиколл-верографиновом градиенте проводят стандартный NIH-микролимфоцитотоксический тест для определения HLA-антигенов локусов А, В, Cw, DR.

Реакция учитывается под микроскопом по проценту лизиса клеток: негативная реакция (лизировано менее 10% клеток), сомнительная (лизировано от 11 до 20% клеток), слабо позитивная (лизировано от 21 до 50% клеток), позитивная (лизировано от 51 до 80% клеток), сильно позитивная (лизировано 81 % и более клеток). В нашем случае одномоментно из 5 мл периферической крови каждого из супругов определяют 102 антигена по системе HLA.

В итоге после проведения реакции определяют фенотип человека, состоящий из 8 антигенов, по два аллеля на каждом локусе: А, В, Cw, DR. Из всей панели определяемых генов в качестве наиболее информативных выделены 26 генов: А1, А9, А11, А28, А29, В21, В39, В57 и др. На основании математической обработки полученных данных (фенотип супругов с привычным невынашиванием) методом дискриминантного анализа выведено решающее правило прогноза, по которому определяют дискриминантную функцию F по формуле:
F(x) = R1A1 + R2A9 + R3A11 + R4A28 + R5A29 + R6B21 + R7B39 + R8B57 + R9B65 + R10Dr5 + R11Dr7 + R12MA9 + R13MA10 + R14MA28 + R15MA29 + R16MB5 + R17MB7 + R18MB8 + R19MB12 + R20MB14 + R21MB27 + R22MB53 + R23MDr2 + R24MDr3 + R25MDr5 + R26MDr7 + const;
где A1, A9, A11, A28, A29 – гены А локуса жены;
МА9, МА10, МА28, МА29 – гены А локуса мужа;
В21, В39, В57, В65 – гены В локуса жены;
МВ5, МВ7, МВ8, MB 12, MB 14, МВ27, МВ53 – гены В локуса мужа;
Dr5, Dr7 – гены Dr локуса жены;
MDr2, MDr3, MDr5, MDr7 – гены Dr локуса мужа;
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, R17, R18, R19, R20, R21, R22, R23, R24, R26 – коэффициенты, равные соответственно: 0,78; 0,74; 0,77; 1,71; – 0,94; – 0,95; 5,04; – 1,53; – 1,87; – 0,22; 1,39; -0,83; 0,56; 1,12; 1,73; -0,74; 0,56; 0,71; 1,11; 1,62; – 0,65; – 0,61; – 0,83; -1,60; -0,51; 0,67;
const = – 0,46;
и при F менее 0 делают заключение об отсутствии риска невынашивания беременности, а при значении F более 0 прогнозируют возможное невынашивание беременности у данной пары.

Чувствительность метода прогнозирования составляет 79,4%, специфичность 81%, эффективность 80,7%.

Пример 1. Сильверстова О. Е. , 30 лет, наблюдалась в ГКБ 35 с 1996 г. после самопроизвольного выкидыша в 7-8 недель, последующего бесплодия II в течение 2 лет. При обследовании хромосомной патологии не выявлено, из инфекций – хламидии, гормоны крови в норме, экстрагенитальной патологии не выявлено, у жены HLA- А1, А24; В 15, В 18; Cw4, у мужа HLA-А3, А25; В7, В 18; Cw3, Cw5. Согласно правилу прогноза, F = 1,59 – женщина из группы “патология”. После исключения антифосфолипидного синдрома (коагулологическими методами) и санации хламидиоза (неовир, ровамицин), на прегравидарном этапе и при беременности 5-6, 8 недель была проведена иммуноцитотерапия аллогенными лимфоцитами отца будущего ребенка в составе комплексной сохраняющей терапии. Беременность завершилась срочными родами в 38-39 недель рождением ребенка без признаков внутриутробной инфекции.

Пример 2. Пастухова Т.Л., 26 лет, наблюдалась в ГКБ 35 с привычным невынашиванием с 1997 г. При обследовании хромосомной патологии не выявлено, гормоны крови в норме, по тестам функциональной диагностики – цикл овуляторный, из инфекций выявлен хламидиоз, персистирующая герпетическая инфекция (проведена санация неовиром, ровамицином), ВА не обнаружен в коагулологических тестах, у жены HLA- А1,А2; В35,В41; Cw2,Cw4, у мужа HLA- A3,A11; B35, B41; Cw2, Cw3. Согласно правилу прогноза, F = 0,32, а значит, женщина – из группы “патология”. При беременности иммуноцитотерапия проводилась в сроках 5, 7-8, 11-12 недель, а так же в 18 недель после выявления снижения уровня ТБГ, плацентарного лактогена с целью профилактического лечения формирующейся плацентарной недостаточности. Беременность завершилась самостоятельными самопроизвольными родами в 39 недель беременности, ребенком без признаков внутриутробной инфекции и признаков перинатального повреждения ЦНС.

Пример 3. Семенова В.Ю., 27 лет, обследовалась в ГКБ 35 после антенатальной гибели плода в 25 недель в 1997 г. При обследовании: хромосомный набор 46хх, 46ху; хламидиоз санирован в 1996 году; гиперандрогения яичникового генеза; из экстрагенитальной патологии отмечался хронический компенсированный тонзиллит. HLA-антигены: жена – HLA-A2, А24; В7, В 12; Cw4, Cw6; Dr1, Dr2; муж: HLA-A1,A3; B51, B27; Cw3, Cw5; Dr1, Dr-. Согласно правилу прогноза, F = -1,1, что соответствует группе “норма”. В дальнейшем при обследовании у женщины был выявлен антифосфолипидный синдром. Во время беременности женщина получала глюкокортикоиды для коррекции гиперандрогении и в качестве этиотропной терапии антифосфолипидного синдрома. Беременность закончилась срочными родами живым плодом в сроке 38-39 недель.

Источники информации:

4. Зарецкая Ю.М. Клиническая иммуногенетика. – М. Мед., 1986.-С.207.

Формула изобретения

Способ прогнозирования привычного невынашивания беременности путем исследования иммуногенетического профиля лейкоцитов периферической крови в супружеской паре, отличающийся тем, что на основе показателей HLA-антигенов I, II классов определяют дискриминантную функцию F по формуле
F (x) = 0,78A1 + 0,74A9 + 0,77A11 + 1,71A28 – 0,94A29 – 0,95B21 + 5,04B39 – 1,54B57 – 1,87B65 – 0,22Dr5 + 1,39Dr7 – 0,83MA9 + 0,56MA10 – 1,12MA28 + 1,73MA29 – 0,74MB5 + 0,56MB7 + 0,71MB8 + 1,11MB12 + 1,62MB14 – 0,65MB27 – 0,61MB53 – 0,83MDr2 – 1,60MDr3 – 0,51MDr5 – 0,67MDr7 – 0,46,
где А1, А9, А11, А28, А29 – гены А локуса жены,
МА9, МА10, МА28, МА29 – гены А локуса мужа,
В21, В39, В57, В65 – гены В локуса жены,
МВ5, МВ7, МВ8, МВ12, МВ14, МВ27, МВ53 – гены В локуса мужа,
Dr5, Dr7 – гены Dr локуса жены,
MDr2, MDr3, MDr5, MDr7 – гены Dr локуса мужа,
и при значении F > 0 прогнозируют привычное невынашивание беременности, а при F < 0 делают заключение об отсутствии угрозы невынашивания беременности.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 22.11.2002

Номер и год публикации бюллетеня: 16-2004

Извещение опубликовано: 10.06.2004