Патент на изобретение №2183972

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЫСОКОАКТИВНОЙ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ К ВИРУСУ КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ СЫВОРОТКИ КРОВИ СВИНЕЙ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к способу получения высокоактивной специфичной к вирусу КЧС сыворотки путем усовершенствования схемы гипериммунизации свиней. Способ осуществляется путем вакцинации свиней вирус-вакциной “ЛК-ВНИИВВиМ” и дополнительной гипериммунизацией животных препаратом, содержащим очищенный вирус классической чумы свиней штамм “Ши-Мынь” с полным адьювантом Фрейнда (соотношение 1:1), внутрикожно в 40-45 точек. Способ обеспечивает стандартизацию, прост в использовании, не требует больших временных затрат, позволяет улучшить высокоактивные сыворотки свиней и может быть промышленно применен в научно-исследовательских институтах и производственных лабораториях. 1 табл.

Настоящее изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к способу получения диагностической высокоактивной специфичной к вирусу классической чумы свиней сыворотки крови, и может быть применен в научно-исследовательских институтах и производственных лабораториях.

Существует много способов получения гипериммунных сывороток, имеющих общие правила, которые учитывают в интересах стандартизации и воспроизводимости. Это характеристика вируса, его доза, способ введения, кратность введения и интервалы между ними, иммунный ответ на дозу антигена.

₁₂.

Ряд исследователей предлагает способы получения специфических сывороток на свиньях с использованием в качестве антигена вируссодержащую кровь и другой гомологичный материал для снижения образования изотканевых антител.

³ вирулентного вируса для оценки грунд-иммунитета. Затем в зависимости от принятой схемы двух-трехкратное внутривенное введение большого (200-400 см³) или малого (5 см³) объемов вируссодержащей крови (сыворотки) с 2-4 недельным интервалом. Тотальное обескровливание через 10-12 дней после последнего введения.

Однако, предложенные Кулеско И.И. и Соболевым Н.M., Притулиным П.И. и Конопаткиным А. А., Газатуллиным Х.Е. и Юсуповым Р.Х., Karasszon D. и Bodon L. , Юсуповым Р.Х. и Ильясовой Г.Х. способы получения специфичных к вирусу КЧС сывороток крови не исключают возможность “загрязнения” получаемых препаратов антителами к белкам крови, клеток органов свиней, в случае, если они являются донорами антигена. Это обстоятельство обусловливает необходимость истощения сывороток перед применением для метки маркерами (флуорохромами, ферментами), что удлиняет способ получения специфических сывороток крови.

Целью настоящего изобретения является разработка эффективного и безопасного способа получения высокоактивной специфичной к вирусу КЧС сыворотки крови свиней.

Данная цель достигается тем, что при получении сывороток крови свиней, вакцинированных вирус-вакциной ЛК-ВНИИВВиМ, животных гипериммунизируют препаратом, содержащим очищенный вирус КЧС штамм “Ши-Мынь” (депонирован во ВНИИВВиМ в 1969 г. за 291), внутрикожным способом введения в 40-45 точек. В отличии от прототипов это безопасно в эпизоотологическом отношении; не требует больших временных затрат; исключает возможность “загрязнения” получаемых препаратов антителами к белкам крови, клеток органов свиней; исключает этап истощения сывороток перед применением для метки маркерами (флуорохромами, ферментами) и позволяет получить высокоактивные сыворотки крови.

Пример конкретного выполнения
При гипериммунизации свиней используют инъектор “Шмель”. Схема гипериммунизации включает в себя следующие этапы:
1. Введение вирус-вакцины КЧС “ЛК-ВНИИВВиМ” в дозе 10^5,0 ИмД₅₀ в объеме 2 см³ внутримышечно.

2. Через 4 недели внутрикожное введение препарата, содержащего очищенный вирус КЧС штамм “Ши-Мынь” с активностью 10^9,0 ККИД_50/мл с полным адъювантом Фрейнда (соотношение 1 : 1), в 40-45 точек по 0,2 см³.

3. Через 4-5 недель повторное внутрикожное введение препарата, содержащего очищенный вирус КЧС штамм “Ши-Мынь” с активностью 10^9,0 ККИД_50/мл, в 40-45 точек по 0,2 см³.

4. Тотальное обескровливание через 2-3 недели после последнего введения.

Активность сывороток проверяют в реакции нейтрализации флуоресцирующих бляшек (РНФБ) и реакции непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ). Результаты проверки активности полученных гипериммунных сывороток представлены в таблице.

Из данных таблицы видно, что титр сывороток крови свиней, полученных предлагаемым способом, составлял в РНФБ 1:10240-25600, в РНИФ 1:640-2560. В полученных сыворотках крови не содержатся вирус КЧС, антитела к белкам крови и клеткам органов свиней.

Результаты исследований, представленные в таблице, свидетельствуют, что предлагаемым способом гипериммунизации свиней можно получить высокоактивные чистые специфичные к вирусу КЧС сыворотки крови свиней.

Предлагаемый способ обеспечивает стандартизацию, позволяет получить высокоактивные сыворотки крови свиней, прост в исполнении, не требует больших временных затрат, безопасен.

Формула изобретения

Способ получения высокоактивной специфичной к вирусу классической чумы свиней сыворотки крови путем гипериммунизации свиней, включающий грундиммунизацию свиньи вирус-вакциной классической чумы свиней с последующей гипериммунизацией и выделением сыворотки крови, отличающийся тем, что грундиммунизацию проводят вирус-вакциной “ЛК-ВНИИВВиМ”, а последующую гипериммунизацию проводят путем двукратного введения препарата, содержащего очищенный вирус классической чумы свиней штамм “Ши-Мынь” с активностью 10^9,0 ККИД_50/мл (см³) с полным адъювантом Фрейнда (см³) в объемном соотношении 1: 1, в 40-45 точек, и через 2-3 недели после второго введения выделяют сыворотку крови с активностью в РНФБ 1: 10240-25600, в РИФ 1: 640-2560.

РИСУНКИ

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 14.07.2002

Номер и год публикации бюллетеня: 16-2004

Извещение опубликовано: 10.06.2004