Патент на изобретение №2183672

(54) ШТАММ ВИРУСА ГРИППА A/17/НОВАЯ КАЛЕДОНИЯ/99/145(H1N1) ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ

(57) Реферат:

Вакцинный штамм вируса гриппа А/17/Новая Каледония/99/145 (Н1N1) – реассортант, полученный путем скрещивания эпидемического вируса А/Новая Каледония/20/99 (H1N1) с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом А/Ленинград/134/47/57 (Н2N2) – донором аттенуации, безвредным для взрослых людей, свойства которого дают возможность гарантированно получать реассортантные вакцинные штаммы из вновь появляющихся эпидемических вирусов. Штамм А/17/Новая Каледония/99/145 (Н1N1) активно размножается в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре 33-34^oС, характеризуется температурочувствительностью и холодоадаптированностью. Реассортант унаследовал от эпидемического вируса два гена, кодирующих поверхностные белки (гемагглютинин и нейраминидазу), и шесть генов, кодирующих негликозилированные белки от донора аттенуации. Штамм А/17/Новая Каледония/99/145 (Н1N1) ареактогенен для взрослых людей при интраназальном введении. Таким образом, вакцинный штамм А/17/Новая Каледония/99/145 (Н1N1) по биологическим свойствам и показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым Фармакопейной статьей ФС 42-3569-98 к вакцинным штаммам для живой гриппозной вакцины для интраназального применения для взрослых. 1 табл.

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики эпидемического гриппа среди взрослых живой интраназальной гриппозной вакциной из штамма А/17/Новая Каледония/99/145 (H1N1). Известный вакцинный штамм А/17/Перт/95/29 (H1N1)-прототип [1] – утратил антигенную актуальность и вследствие этого не сможет вызвать защитную реакцию во время эпидемии гриппа, вызванной штаммом, аналогичным вирусу гриппа А/Новая Каледония/20/99 (H1N1).

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение вакцинного штамма актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса А/Новая Каледония/20/99 (H1N1).

Вакцинный штамм А/17/Новая Каледония/99/145 (H1N1) получен методом генетической реассортации эпидемического вируса А/Новая Каледония/20/99 (H1N1) с холодоадаптированным штаммом А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) – донором аттенуации – с последующей селекцией в присутствии антисыворотки к вирусу А/Ленинград/134/17/57 (H2N2). Донор аттенуации – холодоадаптированный температурочувствительный штамм вируса гриппа А/Ленинград/134/17/57 (H2N2), разрешенный для получения безвредных живых интраназальных вакцин для взрослых [2].

Методом рестрикционного анализа ДНК копий генов вакцинного и родительских штаммов установлено, что вакцинный штамм А/17/Новая Каледония/99/145 (H1N1) унаследовал 6 генов, кодирующих внутренние белки (РВ1, РВ2, PA, NP, M, NS) от донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) и 2 гена, кодирующих поверхностные белки – НА (гемагглютинин) и NA (нейраминидазу) – от эпидемического вируса А/Новая Каледония/20/99 (H1N1). Гемагглютинин в РТГА идентичен вирусу А/Новая Каледония/20/99 (H1N1), антисывороткой к которому полностью нейтрализуется. Штамм является температурочувствительным (разность в показателях инфекционной активности при 33^oС и 40^oС составляет 6.0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл) и холодоадаптированным (разность в показателях инфекционной активности при 33^oС и 25^oС – 2.0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл).

Таким образом, представленный вакцинный штамм А/17/Новая Каледония/99/145 (H1N1) характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакцинному штамму: антигенной специфичностью поверхностных белков эпидемического вируса А/Новая Каледония/20/99 (H1N1), структурой генома, оптимальной для реассортантных вакцинных штаммов, температурочувствительностью и холодоадаптированностью, что коррелирует с аттенуацией для человека, характерной для донора атгенуации.

Морфология штамма – полиморфная, типичная для вируса гриппа.

ХАРАКТЕРИСТИКА ШТАММА
Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 33-34^oС в течение 48 часов – 8,0-9,0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл.

Гемагглютинирующая активность -1:512-1:1024.

Штамм проявляет генетическую стабильность биологических признаков после 5 пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз).

Образец паспорта на вакцинный штамм А/17/Новая Каледония/99/145 (H1N1) прилагается.

ПАСПОРТ ШТАММА
1 Название штамма – А/17/Новая Каледоиия/99/145 (H1N1).

2. Серия – серия 1.

3. Метод получения – рекомбинация; характеристика родительских вирусов:
а) эпидемический вирус – А/Новая Каледония/20/99 (H1N1);
б) донор аттенуации – А/Ленинград/134/17/57 (H2N2).

4. Количество пассажей – 5 в процессе рекомбинации.

5. Характеристика штамма до лиофилизации:
а) оптимальные условия репродукции – 33^oС, 48 часов;
б) гемагглютинирующая активность -1:1024;
в) инфекционная активность – 8.5 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;
г) чувствительность к ингибиторам – ингибиторорезистентный;
д) разность в показателях инфекционной активности при 33^oС и 40^oС – 6.0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;
е) разность в показателях инфекционной активности при 33^oС и 25^oС – 2.0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;
ж) структура генома рекомбинанта:
– гены от эпидемического вируса – НА, NA,
– гены от донора аттенуации – PA, PB1, РВ2, NP, M, NS
6. Характеристика штамма после лиофилизации:
а) дата лиофилизации – 28 февраля 2000 года;
б) объем материала в ампуле -1 мл;
в) количество доз в серии – 3;
г) инфекционная активность – 7.5 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;
д) гемагглютинирующая активность -1:256.

7. Рекомендуемое разведение при вакцинации -1:3.

8. Антигенная специфичность
а) гемагглютинина – идентичен вирусу А/Новая Каледония/20/99 (H1N1) по данным РТГА с крысиной антисывороткой;
б) нейраминидазы – идентична вирусу А/Новая Каледония/20/99 (H1N1) по данным ПЦР-рестрикционного анализа ДНК-копий генов.

9. Безвредность для мышей при подкожном и внутрибрюшинном введении – безвреден.

10. Бактериологический контроль лиофилизированного материала: дата проведения – 16 марта 2000 года, результат – стерилен.

11. Контроль на отсутствие посторонних вирусов – посторонние вирусы отсутствуют.

ШТАММ ВИРУСА ГРИППА А/17/НОВАЯ КАЛЕДОНИЯ/99/145 (H1N1) АРЕАКТОГЕНЕН ДЛЯ ВЗРОСЛОГО КОНТИНГЕНТА
Пример. При вакцинации 50 взрослых лиц интраназально распылителем РДЖ-4М рекомбинантным вакцинным штаммом А/17/Новая Каледония/99/145 (H1N1) с инфекционной активностью 8,5 lg ЭИД₅₀/0,2 мл в разведении 1:3 в объеме 0,5 мл сильных температурных реакций с повышением температуры свыше 38,5^oС, средних реакций с повышением температуры в диапазоне 37,6-38,5^oС и слабых температурных реакций до 37,5^oС не наблюдалось.

В контрольной группе из 42 лиц, получивших плацебо, сильных температурных реакций с повышением температуры свыше 38,5^oС и средних реакций с повышением температуры в диапазоне 37,6-38,5^oС не наблюдалось. Слабые температурные реакции до 37,5^oС наблюдались у двух человек (4,76%) (таблица).

Таким образом, вакцинный штамм А/17/Новая Каледония/99/145 (H1N1) по показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым Фармакопейной статьей ФС 42-3569-98 к вакцинным штаммам для живой гриппозной вакцины для интраназального применения для взрослых.

ЛИТЕРАТУРА
1. Киселева И. В. , Александрова Г.И., Руденко Л.Г., Климов А.И. Штамм вируса гриппа А/17/Перт/95/29 (H1N1) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых. Патент РФ N2144955 от 27.01.00. Опубл. БИ 2000.- N3.

2. Александрова Г.И., Климов А.И. Живая вакцина против гриппа. – СПб.: Наука.-1994.-151 с.

Формула изобретения

Штамм вируса гриппа А/17/Новая Каледония/99/145(Н1N1) ГИСК 396/7 (Государственный институт стандартизации и контроля им. Л.А. Тарасевича), используемый для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых.

РИСУНКИ

QB4A Регистрация лицензионного договора на использование изобретения

Лицензиар(ы): Государственное учреждение “Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины” Российской академии медицинских наук

Вид лицензии*: ИЛ

Лицензиат(ы): Федеральное государственное унитарное предприятие “Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам “Микроген” Министерства здравоохранения Российской Федерации

Договор № РД0027211 зарегистрирован 01.10.2007

Извещение опубликовано: 10.11.2007 БИ: 31/2007

* ИЛ – исключительная лицензия НИЛ – неисключительная лицензия