Патент на изобретение №2182171
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ РОДОКОККОВ
(57) Реферат: Изобретение относится к микробиологии, медицине и ветеринарии, в частности к бактериологии микроорганизмов рода родококкус. Модифицированную среду Сотона обогащают дополнительным источником углерода и азота. В качестве пленкообразующего вещества и дополнительного источника углерода включают жидкий парафин (н-алканы с количеством атомов углерода в цепи от С.12 до С. 17). В качестве дополнительного источника азота – аммоний азотнокислый. Такое изменение среды позволило повысить как скорость роста, так и высеваемость родококков из проб объектов внешней среды и биоматериалов от людей и животных. 2 табл. Изобретение относится к микробиологии, ветеринарии и может быть использовано в медицине, в частности для высевания проб объектов внешней среды, клинического и патологического материалов на выделение и выращивание родококков. В практике бактериологических лабораторий для выделения и выращивания родококков используют различные по минеральному составу жидкие синтетические и агаризованные среды: Мюнца, нитритный агар по Виноградскому, Бушнелла – Хааса, Фрея и Хагана и т.д. (1). Все перечисленные среды мало отличаются по химическому составу, физическим свойствам и поэтому эффективность их использования практически одинаковая. Известно, что родококки способны усваивать различные углеродистые субстраты, содержащие в цепи от С.9 до 0.23 атомов углерода Поэтому лучшие результаты были получены в случаях добавления в среду Мюнца и в нитритный агар по Виноградскому н-алканов (С.12-23). Имеются сообщения (2,3) о том, что на перечисленных средах с добавлением н-алканов значительно лучше выделяются большинство родококков из проб, взятых с объектов внешней среды (почва, вода, продукты растительного и животного происхождения и т.д.). Однако все они оказались мало эффективными для выделения родококков из клинического материала от больных людей и патологического материала, полученного от животных, что и является их недостатком. Наиболее близким по технической сущности к заявляемому изобретению является среда Сотона, содержащая в качестве источника углерода глицерин, а в качестве источника азота – аммоний лимоннокислый двухзамещенный L-аспарагин, обычно используемый в микробиологии туберкулеза. Данная среда была модифицирована (4,5) дополнительным внесением в ее состав двухзамещенного лимоннокислого аммония, сернокислого цинка, а железо лимоннокислое аммиачное заменили сернокислым железом. Состав среды прототипа, г/л: 1. L-аспарагин – 5,0 2. Лимонная кислота – 4,0 3. Аммоний лимоннокислый двухзамещенный – 2,0 4. Калий фосфорнокислый двухзамещенный – 5,0 5. Магний сернокислый – 0,5 6. Железо сернокислое – 0,05 7. Цинк сернокислый – 0,1 8. Глицерин – 50,0 9. Вода дистиллированная – До одного литра Реакция (рН) среды доводится до 7,3-7,4 25%-ным раствором аммиака и автоклавируется при давлении один атм в течение 15 мин. Недостатком данной среды является низкий процент высеваемости и малая скорость роста родококков из мокроты людей и патологического материала от животных. Целью изобретения является повышение эффективности использования питательной среды для выделения и выращивания родококков за счет изменения химического состава и физических свойств среды. Поставленная цель достигается тем, что в модифицированную среду Сотона в качестве дополнительного источника углерода вносится жидкий парафин с содержанием атомов углерода от С.12 до С.17 и в качестве источника азота – аммоний азотнокислый в следующих количествах, г/л: 1. L-аспарагин – 5,0 2. Лимонная кислота – 4,0 3. Аммоний лимоннокислый двухзамещенный – 2,0 4. Калий фосфорнокислый двухзамещенный – 5,0 5. Магний сернокислый – 0,5 6. Железо сернокислое – 0,05 7. Цинк сернокислый – 0,1 8. Глицерин – 50,0 9. Аммоний азотнокислый – 0,2 10. Вода дистиллированная – До одного литра pH среды доводится до 7.3-7,4 25%-ным раствором аммиака 11. Н-алканы (жидкий парафин) – 20 мл Среда автоклавируется при давлении один атм в течение 15 мин. Сопоставительный анализ с прототипом позволяет сделать вывод что заявляемый состав среды отличается от известной введением новых компонентов, а именно – аммония азотнокислого и жидкого парафина с содержанием атомов углерода от С.12 до С.17. Таким образом, заявляемое техническое решение соответствует критерии “новизна”. Анализы известных составов сред, используемых для выделения и выращивания микробактерий и родококков, известны, например н-алканы. Однако их применение в средах Мюнца или в нитритном агаре по Виноградскому в сочетании с другими компонентами не обеспечивает средам такие свойства, которые они проявляет в заявляемом решении, а именно значительное обогащение азотом и углеродом жидкой среды с одновременным покрытием поверхности слоем жидкого парафина и, как следствие, – длительное сохранение стабильности концентрации растворенных компонентов (слой жидкого парафина препятствует испарению воды) в процессе термостатирования. Таким образом, данный состав компонентов придает среде новые свойства, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого решения критерию “существенные отличия”. Для экспериментальной проверки заявляемого состава среды были подготовлены 5 серий в различных вариантах, отличающихся количественным содержанием добавляемых компонентов. Для приготовления среды заявляемого варианта расчетное количество каждого компонента (кроме н-алканов) растворяли в дистиллированной воде. После доведения рН до 7,3-7,4 25%-ным раствором аммиака по 300 мл отфильтрованной среды разливали по колбам емкостью один литр. Затем в каждую из них добавляли по 6 мл жидкого парафина и автоклавировали при давлении один атм в течение 15 мин. Готовые серии сред засевали лабораторными штаммами родококков разных видов (одномоментно, из одного разведения взвеси бакмассы). В таблице 1 представлены результаты исследований по определению скорости роста и количества бакмассы на средах различных вариантов. Из таблицы 1 следует, что на предлагаемой среде ( 5) родококки лабораторных штаммов растут значительно быстрее и дают 2-3 раза больше бакмассы, чем на всех остальных вариантах сред. Аналогичные результаты были получены при посевах 291 пробы, взятых из объектов внешней среды и биоматериалов. Эти результаты отражены в таблице 2. Как видно из таблицы 2, на среде предлагаемого варианта были выделены от 7,9 до 23,4% больше родококков, чем на остальных. Использование заявляемой среды в микробиологии, ветеринарии и медицине позволит: – за короткое время получить обильную бакмассу; – ускорить постановку диагноза; – повысить высеваемость родококков; – ускорить сроки термостатирования высеянных культур. Источники информации 1. Квасников Е.Л., Клюшникова Т.М. Микроорганизмы – деструкторы нефти в водных бассейнах. Киев: Наук. думка, 1981, 131 с. 3. Теппер Е. 3. Микроорганизмы рода Nocarolia и разложение гумуса. М.: Наука, 1976, 198 с. 4. Василев В.Н. Микобактериозы и микозы легких. – София: Медицина и физкультура, 1971, 362 с. Формула изобретения
L-аспарагин – 5,0 Лимонная кислота – 4,0 Аммоний лимоннокислый двухзамещенный – 2,0 Калий фосфорнокислый двухзамещенный – 5,0 Магний сернокислый – 0,5 Железо сернокислое – 0,05 Цинк сернокислый – 0,1 Глицерин – 50,0 Аммоний азотнокислый – 0,2 Н-алканы (С. 12 – С. 17) – 20,0 Вода дистиллированная – До 1л РИСУНКИ
MH4A/MZ4A – Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение на основании заявления, поданного патентообладателем в Патентное ведомство
Дата прекращения действия патента: 17.06.2002
Номер и год публикации бюллетеня: 34-2002
Извещение опубликовано: 10.12.2002
|
||||||||||||||||||||||||||
