Патент на изобретение №2181489
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ГНОЙНО-СЕПТИЧЕСКИХ ОСЛОЖНЕНИЙ У ПАЦИЕНТОВ В ОСТРОМ ПЕРИОДЕ ПОЛИТРАВМЫ
(57) Реферат: Изобретение относится к области медицины, в частности к травматологии и хирургии. Способ позволяет повысить точность и объективность комплексного прогноза гнойно-септических осложнений. У пациентов в остром периоде политравмы проводят исследование нейтрофилов крови, при этом определяют общую бактерицидность нейтрофилов, активность внутриклеточного фермента щелочной фосфатазы, активность внутриклеточного фермента лактатдегидрогеназы, активность внутриклеточного фермента каталазы, концентрацию малонового диальдегида на 1-е, 2-е, 3-и, 5-е, 7-е и 10-е сутки после травмы и при увеличении концентрации малонового диальдегида в нейтрофилах на 39  6% на 3-и сутки после травмы относительно исходного уровня, полученного в 1-й день после травмы, снижении активности каталазы в нейтрофилах на 204% на 5-е сутки после травмы относительно исходного уровня и уменьшении бактерицидной активности нейтрофилов на 123%, увеличении активности щелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы соответственно на 509% и 858% на 7-е сутки после травмы относительно исходного уровня прогнозируют развитие гнойно-септических осложнений. 2 табл.
Предложенный способ относится к медицине, к клинической диагностике и может быть использован для прогнозирования гнойно-септических осложнений у больных в острый период политравмы. Нейтрофилы являются важным звеном неспецифической резистентности, высокоспециализированными клетками, практически завершившими дифференцировку, и предназначены для экстренной мобилизации при острых нарушениях гомеостаза. В связи с тем что полное замещение циркулирующего пула нейтрофилов крови происходит каждые 10-20 часов, функциональное состояние этих клеток является своеобразным маркером состояния барьерных функций, гомеостаза организма, поэтому динамическая оценка функционального состояния нейтрофилов может быть использована для прогноза риска развития гнойно-септических осложнений и эффективности лечебных мероприятий у больных с выраженными патофизиологическими изменениями, в частности, в течении острого периода политравмы (Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. – Казань. – 1993. – C. 11-13). Известен способ дифференциальной диагностики клинических форм бруцеллеза у людей, основанный на определении цитохимических показателей ферментативных реакций в нейтрофилах периферической крови. Недостатком данного метода является узкий спектр характеристик нейтрофильных гранулоцитов и применение его лишь у больных с бруцеллезом. (Патент 2103687, Б.И. 1998. 3 (2). C. 332). Наиболее близким к заявляемому является способ прогнозирования возможности генерализации инфекции при ожоговой болезни, включающий исследование свободнорадикального потенциала нейтрофилов крови. (Патент РФ 2134419, М. кл. G 01 N 33/49, 33/53. Б.И. 1999. 22 (2). C. 390). Недостатками этого метода являются изучения лишь одной из характеристик нейтрофилов, а именно показателей кислородзависимых механизмов образования свободных радикалов, но известно, что есть данные о снижении бактерицидности нейтрофилов при усилении их окислительного метаболизма – факт, неоднократно отмечающийся у больных с бактериальными инфекциями (Маянский А.Н., Галиулин А. Н. Реактивность нейтрофила. – Казань: Изд-во Казанского ун-та, 1984. – С. 54-60). Причиной таких изменений является избыточная продукция активированных форм кислорода стимулированными клетками, что приводит к повышению внутриклеточного свободнорадикального аутоокислительного процесса и тем самым снижает активность нейтрофилов (Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. – Казань:/ – 1993. – С. 115-116). Задача настоящего изобретения состоит в повышении точности и объективности комплексного прогноза гнойно-септических осложнений. Поставленная задача достигается тем, что определяют общую бактерицидность нейтрофилов, активность внутриклеточного фермента щелочной фосфатазы, активность внутриклеточной лактатдегидрогеназы, активность внутриклеточного фермента каталазы, концентрации малонового диальдегида на 1-е, 2-е, 3-и, 5-е, 7-е и 10-е сутки после травмы и при увеличении концентрации малонового диальдегида в нейтрофилах на 39 6% на 3-и сутки после травмы относительно исходного уровня, полученного в 1-й день после травмы, снижении активности каталазы в нейтрофилах на 204% на 5-е сутки после травмы относительно исходного уровня и уменьшении бактерицидной активности нейтрофилов на 123%, увеличении активности щелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы соответственно на 509% и 858% на 7-е сутки после травмы относительно исходного уровня прогнозируют развитие гнойно-септических осложнений.
Новизна способа:1. Комплексное исследование нейтрофилов позволяет оценить функциональную активность клеток в динамике всего острого периода политравмы и определить категорию больных с высокой степенью развития гнойно-септических осложнений. 2. Количественное изменение этих показателей выбрано в результате большого количества исследований, является достоверным и объективно точным. Сущность способа заключается в следующем: забор крови производился из локтевой вены в пробирку с гепарином (20 Ед на 1 мл крови), полученную кровь разводят 0,15 М раствором хлористого натрия в соотношении 1:2. Разведенную кровь в количестве 2 мл наслаивают на двойной градиент плотности фиколл-верографина (р=1,06 и 1,12 г/мл). Центрифугируют 40 минут при 1000 g и 220oС. Образовавшееся кольцо, состоящее из нейтрофилов, между градиентом плотности фиколл-верографина 1,06 г/мл и 1,12 г/мл аккуратно отсасывают пастеровской пипеткой и помещают в стерильную пробирку. Для лизиса попавших в пробу эритроцитов в пробирку добавляют 2 мл дистиллированной воды, перемешивают, после чего добавляют 2 мл 0,30 М раствора NaCl. Суспензию отмывают трехкратно раствором 0,15 М NaCl при 400 g. Количество нейтрофилов доводят до 5  106 на 1 мл с помощью подсчета в камере Горяева разведением полученной пробы 0,15 М NaCl либо ее концентрацией с помощью цетрифугирования. Суспензия полученных нейтрофилов делилась на 2 пробы; первая в количестве 0,5 мл использовалась для определения бактерицидности нейтрофилов, вторая проба подвергалось физической обработке включающей в себя замораживание клеток при -20oС и последующем размораживании при 37oС, центрифугирование при 5000 g. Данные манипуляции применялись для лизиса клеток и возможности определения внутриклеточных ферментов и содержимого цитоплазмы с помощью стандартных биохимических методик.
Бактерицидность нейтрофильных гранулоцитов определяли путем их инкубации в среде 199 с живой культурой St.aureus штамм 209 в течение 1 часа при 37oС.
Для прогнозирования развития гнойно-септических осложнений у больных в острый период политравмы необходимо проводить динамическое исследование функциональной активности нейтрофилов периферической крови, включающее определение бактерицидности нейтрофилов, внутриклеточной активности ферментов (лактатдегидрогеназы, щелочной фосфатазы, каталазы), содержание малонового диальдегида на 1 (исходный уровень), 2, 3, 5, 7 и 10-е сутки после травмы.
Комплексная оценка функционального состояния нейтрофилов проводилась на основе следующих параметров:1. Определение общей бактерицидности нейтрофилов с использованием живой культуры St.aureus. Данный метод был применен нами для оценки общей фагоцитарной и бактерицидной функции нейтрофилов периферической крови для регистрации грубых нарушений данной функции. 2. Определение активности внутриклеточного фермента щелочной фосфатазы в суспензии лизированных нейтрофилов, так как увеличение концентрации данного фермента в нейтрофильных гранулоцитах наблюдается на фоне присоединения бактериальной инфекции. 3. Определение активности внутриклеточного фермента лактатдегидрогеназы в суспензии лизированных нейтрофилов проводили для оценки уровня гликолитических процессов. 4. Концентрацию малонового диальдегида определяли в суспензии лизированных нейтрофилов для определения уровня перекисного окисления липидов. 5. Выраженность антиперекисных защитных биохимических механизмов исследуемых клеток оценивали путем определения активности фермента каталазы. О высокой вероятности развития гнойно-септического осложнения свидетельствует: 1. Увеличение концентрации малонового диальдегида в нейтрофилах на 39 6% относительно исходного уровня на 3-и после травмы.
2. Снижение активности каталазы в нейтрофилах на 204% относительно исходного уровня на 5-е сутки после травмы.
3. На 7-е сутки после травмы – уменьшение бактерицидной активности нейтрофилов на 123%, увеличение активности щелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы, соответственно, на 509% и 858% относительно исходного уровня.
Пример 1.
Больной К. 48 лет (истор. болезни 1134) поступил в отделение реанимации МСЧ ГНКЦ ОЗШ 3.02.99, с диагнозом: политравма, перелом 3-9 ребер справа по задней подмышечной линии. Перелом локтевой и лучевой костей слева, перелом левой м/берцовой кости. Сотрясение головного мозга, тупая травма передней брюшной стенки. Состояние тяжелое, шок 2-3 степени. При поступлении проведены неотложные мероприятия, иммобилизация поврежденных верхних и нижних конечностей гипсовыми повязками, диагностическая лапароскопия. Остеосинтез проведен 11.02.99. Продолжительность пребывания в отделении реанимации – 14 дней, в стационаре 96 дней.
Осложнения: Диффузный двухсторонний эндобронхит, остеомиелит левой м/берцовой кости. Проводилась антибактериальная терапия.
Заключение: увеличение концентрации малонового диальдегида на 38% на 3-и сутки, снижение активности каталазы на 20% на 5-е сутки, снижение бактерицидной активности на 12% и увеличение активности щелочной фосфатазы на 49% и активности лактатдегидрогеназы на 85% на 7-е сутки позволяет сделать вывод о высокой вероятности развития гнойно-септического осложнения у данного больного, что и было зарегистрировано на 9-е сутки пребывания в стационаре.
Пример 2.
Больной Н. 28 лет (истор. болезни 1187) поступил в отделение реанимации 1.03.99 г. , с диагнозом политравма. Перелом лонной и седалищной костей с обеих сторон. Перелом крестцовой кости справа. Отрыв мочевого пузыря. Состояние тяжелое, шок 2 степени. При поступлении проведены неотложные мероприятия – лапаротомия. 01.03. проведена операция – остеосинтез правого крестцово-подвздошного сочленения и костей таза. Продолжительность пребывания в отделении реанимации – 6, в стационаре – 36 койко-дней. Выписан в удовлетворительном состоянии. Проводилась антибактериальная терапия.
Заключение: В данном случае концентрация малонового диальдегида увеличилась на 13% на 3-и сутки наблюдения и в дальнейшем его значения не превышали 20%, снижение активности каталазы на 5-е сутки составило 3%, бактерицидная активность увеличилась на 3% к 7-м суткам, активность щелочной фосфатазы увеличилась на 6%, активность лактатдегидрогеназы увеличилась на 26% на 7-е сутки относительно исходных значений. Опираясь на полученные данные, можно сделать заключение, что развитие гнойно-септического осложнения маловероятно.
Таким образом, предлагаемый способ комплексной оценки функционального состояния нейтрофилов крови является ценным диагностическим критерием для прогнозирования гнойно-септических осложнений у больных в острый период политравмы. Это достигается широким спектром исследования характеристик нейтрофильных гранулоцитов. Данный метод информативен, доступен позволяет динамически отслеживать изменения в нейтрофилах крови и прогнозировать с высокой вероятностью возможные гнойно-септические осложнения.
Формула изобретения
6% на 3-и сутки после травмы относительно исходного уровня, полученного в 1-й день после травмы, снижении активности каталазы в нейтрофилах на 204% на 5-е сутки после травмы относительно исходного уровня и уменьшение бактерицидной активности нейтрофилов на 123%, увеличении активности щелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы соответственно на 509% и 858% на 7-е сутки поле травмы относительно исходного уровня прогнозируют развитие гнойно-септических осложнений.
РИСУНКИ
MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 17.08.2002
Номер и год публикации бюллетеня: 16-2004
Извещение опубликовано: 10.06.2004
|
||||||||||||||||||||||||||
