Патент на изобретение №2178302

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1-ГИДРОКСИ-2,3,4,5-ТЕТРАМЕТОКСИКСАНТОНА, ОБЛАДАЮЩЕГО ЖЕЛЧЕГОННЫМ И ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫМ ДЕЙСТВИЕМ

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине. Растительное сырье траву галении рогатой экстрагируют 70% этанолом трижды при отношении сырье: экстрагент 1: 10. Экстрагент контактируют с гексаном. Хроматографируют гексановое извлечение на колонке с силикагелем. Затем проводят упаривание, растворение гексаном при нагревании, фильтрование и перекристаллизацию из этанола. Изобретение позволяет повысить выход продукта. 3 табл.

Изобретение относится к области медицины и касается способа получения биологически активного соединения из растительного сырья, обладающего желчегонным и гепатопротекторным действием.

Известен способ получения 1-гидрокси-2,3,4,5- тетраметоксиксантона из всего растения вида Halenia asclepidea (HBK) О. Don. путем экстракции сухого измельченного сырья (422 г) гексаном, растворения осадка в CH₂Cl₂₂Cl₂ / пентаном объединенных фильтратов, фильтрации, выпаривания CH₂Cl₂

Недостатками указанных способов являются низкий выход целевого продукта, длительность и трудоемкость технологического процесса.

Задачей изобретения является повышение выхода целевого продукта из надземной части Halenia corniculata (L. ) Cornaz. с желчегонным и гепатозащитным действием и расширение сырьевой базы для получения холеретических средств.

Указанная задача решается следующим способом: растительное сырье экстрагируют 70% этанолом трижды при упаривании, концентрации объединенных экстрактов в вакууме до водного остатка (0,5 л), с последующей обработкой гексаном. Гексановое извлечение после хроматографии, упаривания, растворения гексаном при нагревании, фильтрования, перекристаллизации (дважды) из этанола позволяет получить готовый продукт. Выход составляет 0,17% от массы исходного сырья (табл. 1).

Нижеследующие примеры иллюстрируют заявляемый способ.

Пример 1: 100 г измельченного воздушно-сухого сырья травы Halenia corniculata (L. ) Cornaz. экстрагировали 60% этанолом три раза в соотношении сырья и растворителя 1: 8 (18-20^oC, по 72 часа). Объединенные экстракты концентрировали в вакууме до водного остатка (0,5 л), который обрабатывали в делительной воронке гексаном (8 х 150 мл). Хроматографический анализ гексанового извлечения травы Halenia corniculata (L. ) Cornaz. показал наличие -пироновых агликонов (система I; система II; бумага Fn – 16), которые локализованы в одном пятне. Гексановое извлечение упаривали на ротационном испарителе досуха и получили сухой остаток в количестве 25,6 г (2,56%). Полученную гексановую фракцию растворяли при нагревании в 100 мл гексана и оставляли для охлаждения до комнатной температуры. Выпавшие кристаллы отфильтровывали и дважды перекристаллизовывали из этанола. При этом было получено 0,15 г 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона.

Пример 2: 100 г измельченного воздушно-сухого сырья травы Halenia corniculata (L. ) Cornaz экстрагировали 70% этанолом три раза в соотношении сырья и растворителя 1: 10 (18-20^oC, по 72 часа). Объединенные экстракты концентрировали в вакууме до водного остатка (0,5 л), который обрабатывали в делительной воронке гексаном (8 х 150 мл). Хроматографический анализ гексанового извлечения травы Halenia corniculata (L. ) Cornaz показал наличие -пироновых агликонов (система I; система II; бумага Fn – 16), которые локализованы в одном пятне. Гексановое извлечение упаривали на ротационном испарителе досуха и получили сухой остаток в количестве 25,6 г (2,56%). Полученную гексановую фракцию растворяли при нагревании в 100 мл гексана и оставляли для охлаждения до комнатной температуры. Выпавшие кристаллы отфильтровывали и дважды перекристаллизовывали из этанола. При этом было получено 0,17 г 1 -гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона.

Пример 3: 100 г измельченного воздушно-сухого сырья травы Halenia corniculata (L. ) Cornaz. экстрагировали 80% этанолом три раза в соотношении сырья и растворителя 1: 12 (18-20^oC, по 72 часа). Объединенные экстракты концентрировали в вакууме до водного остатка (0,5 л), который обрабатывали в делительной воронке гексаном (8 х 150 мл). Хроматографический анализ гексанового извлечения травы Halenia corniculata (L. ) Comaz. показал наличие -пироновых агликонов (система I; система II; бумага Fn – 16), которые локализованы в одном пятне. Гексановое извлечение упаривали на ротационном испарителе досуха и получили сухой остаток в количестве 25,6 г (2,56%). Полученную гексановую фракцию растворяли при нагревании в 100 мл гексана и оставляли для охлаждения до комнатной температуры. Выпавшие кристаллы отфильтровывали и дважды перекристаллизовывали из этанола. При этом было получено 0,16 г 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона.

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ВЫДЕЛЕННОГО 1-ГИДРОКСИ-2,3,4,5-ТЕТРАМЕТОКСИКСАНТОНА
Желчегонная активность 1-гидрокси-2.3.4.5-тетраметоксиксантона.

₅₀ 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона проведено по методике, описанной Ивановым Ю. И. , Погорелюк О. Н. [Иванов Ю. И. , Погорелюк О. Н. Статистическая обработка результатов медико-биологических исследований на микрокалькуляторах по программам. – М. : Медицина, 1990. -224 с. ).

В результате проведенных экспериментов установлено, что ксантон 1 в дозе 5 мг/кг оказывает умеренное повышение холеретической реакции у крыс. Так, скорость секреции желчи через час после его введения возрастала на 19%, через 2 часа – на 14% и сохранялась повышенной в течение опыта. Общее количество выделенной желчи превышало контроль на 14% (табл. 2). На фоне этого в сецернируемой желчи крыс повышалась концентрация общих холатов на 21%, билирубина – на 23%. С увеличением дозы ксантона возрастала холеретическая реакция у крыс. В частности, при дозе 10 мг/кг скорость секреции желчи через после его введения возрастала на 44%, через 2 часа на 33%, а через 3-4 часа – на 16-20% по сравнению с контролем (табл. 2). Одновременно возрастало общее количество выделенной желчи на 28%, повышалась концентрация общих холатов на 11% и экскреция холестерина. При увеличении дозы ксантона 1 до 30 и 50 мг/кг было отмечено дальнейшее возрастание холеретической реакции у крыс и повышение в желчи концентрации общих желчных кислот. Так, скорость секреции желчи у крыс возрастала через час после введения ксантона 1 в дозе 30 мг/кг на 47% и сохранялась примерно на одинаковом уровне в течение всего эксперимента (табл. 2). При этом повышались общее количество выделенной желчи на 38% и концентрация общих желчных кислот в сецернируемой желчи на 18%. Ксантон 1 в дозе 50 мг/кг повышал скорость секреции желчи у крыс через час после его введения на 32%, через 2 часа – на 59%, через 3 часа – на 79%, через 4 часа – на 43% (табл. 2). Одновременно увеличивалось общее количество выделенной желчи более чем в 1,5 раза по сравнению с контролем. На этом фоне концентрация общих холатов превышала контроль на 30%, а также ускорялись секреция билирубина и экскреция холестерина по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы.

На основании полученных данных, 1-гидрокси-2,3,4,5- тетраметоксиксантон проявляет выраженное желчегонное действие.

Установлено, что ЕД₅₀ 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона соответствует 5 0,6 мг/кг массы.

Гепатозащитное действие 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона.

Изучение гепатопротекторного действия 1-гидрокси-2,3,4,5- тетраметоксиксантона проведено на 82 белых крысах обоего пола массой 180-200 г по методу Левшина Б. И. [Левшин Б. И. Экспериментальная фармакотерапия препаратами селена и тиазолидина токсического поражения печени: Автореф. диссертации д-ра мед. наук. – Харьков, 1973. – 29 c. ] . Экспериментальный токсический гепатит вызывали подкожным введением крысам 50%-ного масляного (V/V) раствора тетрахлорметана в объеме 0,4 мл на 100 г веса, 1 раз в сутки, в течение четырех дней. Водный раствор ксантона 1 вводили внутрижелудочно в дозе 10 мг/кг массы, начиная со второго дня опыта, один раз в сутки в течение всего эксперимента. Животным контрольной группы вводили в эквиобъемном количестве дистиллированную воду. Оценку функционального состояния печени крыс с токсическим гепатитом проводили на 7, 14, 21 и 28 сутки опыта по биохимическим показателям сыворотки крови. Кроме того, оценивали интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) (содержание малонового диальдегида МДА в крови) и антитоксическую функцию печени по бромсульфофталеиновому тесту. Определение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ) проводили по Райтману и Френкелю, содержание общего белка по биуретовой реакции, холестерина,

Оценка показателей функции печени крыс с токсическим гепатитом показала, что ксантон 1 оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние. В ранние сроки эксперимента у животных, получавших ксантон 1, наблюдалось умеренное снижение проявлений основных синдромов патогенеза гепатита – цитолиза и холестаза, а также замедлялось накопление МДА в сыворотке крови. Так, на 7 сутки опыта достоверно снижался уровень активности АлАТ, что свидетельствовало об уменьшении выраженности синдрома цитолиза (табл. 3). На 14 сутки опыта активности АлАТ и АсАТ снижались на 22 и 23%. Далее на протяжении всего эксперимента продолжалось снижение активности АсАТ и АлАТ. При этом отмечено достоверное снижение активности АлАТ почти в 1,5 раза. Из табл. 3 следует, что у животных данной группы достоверно снижалось накопление в крови продуктов пероксидации липидов. Содержание МДА у животных, получавших ксантон 1, снижалось на 16%. Отчетливо замедлялось накопление МДА в сыворотке крови с 14 суток эксперимента. О степени выраженности холестаза судили на основании комплексной оценки содержания холестерина и -липопротеидов в сыворотке крови. На 7 сутки наблюдали снижение показателей холестаза, а на 14 сутки опыта – достоверную разницу в уровнях содержания холестерина и -липопротеидов по сравнению с контролем. При этом наблюдалось выраженное снижение этих показателей соответственно на 23 и 26%.

Изменения тимоловой пробы, свидетельствующие о снижении диспротеинемии, удалось отметить на 7 сутки эксперимента, причем в последующие сроки наблюдений эффект при использовании ксантона 1 нарастал (табл. 3). Косвенным подтверждением уменьшения диспротеинемии является тенденция к повышению содержания общего белка в крови с 14 суток. Применение ксантона 1 способствовало достоверному повышению с 7 суток экскреторной функции печени по данным бромсульфофталеиновой пробы. Коэффициент ретенции бромсульфофталеина снижался на 18% с 7 суток (табл. 3). При этом указанный эффект нарастал в последующие сроки наблюдения.

На основании вышеизложенного следует, что при экспериментальном (тетрахлорметановом) повреждении печени, 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон проявляет гепатопротекторный эффект. Фармакотерапевтический эффект его реализуется преимущественно на уровне стабилизации мембранных структур гепатоцитов и подавления свободнорадикального окисления фосфолипидов мембран клеток. При этом, как следствие, восстанавливаются липидный и белковый обмены, детоксицирующая функция печени, уменьшаются признаки синдромов цитолиза и холестаза.

Таким образом, 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон обладает гепатопротекторным действием.

Определение острой токсичности 1-гидрокси-2.3.4.5-тетраметоксиксантона.

Острую токсичность 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона при внутрибрюшинном однократном введении по методу Кербера определяли на белых мышах с массой 18-20 г обоего пола. В течение 15 суток регистрировали внешний вид, поведение и гибель животных. Величину ЛД₅₀

Установлено, что ЛД₅₀ 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона соответствует 8368 162 мг/кг массы. По классификации токсических веществ К. К. Сидорова [1973] данный ксантон является относительно безвредным веществом.

Формула изобретения

Способ получения 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона, обладающего желчегонным и гепатопротекторным действием путем экстракции гексаном, хроматографии и упаривания, отличающийся тем, что предварительно трижды экстрагируют сухое растительное сырье – надземную часть галении рогатой 70% этанолом при отношении сырье: экстрагент 1: 10 с последующим контактированием экстракта с гексаном, хроматографированием на колонке силикагеля и упариванием, растворением в гексане, фильтрованием и перекристаллизацией из этанола.

РИСУНКИ

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 28.10.2006

Извещение опубликовано: 20.01.2008 БИ: 02/2008