Патент на изобретение №2178176

Published by on




РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ



ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(19) RU (11) 2178176 (13) C2
(51) МПК 7
G01N33/53
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

Статус: по данным на 17.05.2011 – прекратил действие

(21), (22) Заявка: 97114285/14, 05.08.1997

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

05.08.1997

(43) Дата публикации заявки: 27.06.1999

(45) Опубликовано: 10.01.2002

(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске:
ФЕДОСЕЕВ Г.Б., УСЛОНЦЕВ Б.М. Бронхиальная астма и бронхообструктивные синдромы. – Клин. мед., 1992, № 5-6, с. 5-9. RU 2050002 C1, 10.12.1995. SU 1605166 C1, 07.11.1990. SU 1728806 C1, 23.04.1992.

(71) Заявитель(и):

Павленко Валентина Ивановна,
Ушаков Валерий Федорович

(72) Автор(ы):

Павленко В.И.,
Ушаков В.Ф.

(73) Патентообладатель(и):

Павленко Валентина Ивановна,
Ушаков Валерий Федорович

(54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ОБСТРУКТИВНОГО БРОНХИТА И БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ СМЕШАННОГО ГЕНЕЗА


(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии. Способ осуществляется путем исследования крови больных хроническим обструктивным бронхитом и бронхиальной астмой смешанной формы. Показатели крови оценивают по цитограмме гранулоцитосвязывающих лимфоцитов и при преимущественном выявлении в мазках эозинофильно-лимфоцитарных розеток диагностируют бронхиальную астму, а нейтрофильно-лимфоцитарных розеток – хронический обструктивный бронхит. Способ позволяет получить достоверные данные в течение 4 ч, не требует особой стерильности, дефицитных реактивов, дорогостоящих приборов и прост в исполнении, экономичен. 1 табл.


Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики хронического обструктивного бронхита и бронхиальной астмы смешанной формы.

Цель изобретения – ускорение и повышение точности способа.

Поставленная цель достигается применением способа, предложенного в заявке 93039022/14 (038236) с датой поступления 27.07.93 г. , по которому получено решение о выдаче патента на изобретение от 29.03.96 г.

Несмотря на значительные успехи в диагностике бронхиальной астмы и выделение различных этиологических и патогенетических ее вариантов, клиническая практика нередко свидетельствует о случаях гипердиагностики (2). Достаточно труден дифференциальный диагноз бронхиальной астмы и хронического обструктивного бронхита, особенно, при развитии вторичного хронического бронхита при бронхиальной астме или при присоединении бронхообструктивного синдрома при длительном течении хронического бронхита (3).

В последние годы бронхиальную астму, с морфологической точки зрения, рассматривают как эозинофильное воспалительное заболевание бронхиального дерева (4). Однако эозинофилия в крови у больных БА отмечается только в 34-60% случаев (1). А определение эозинофилов в бронхоальвеолярном смыве не всегда выполнимо вследствие противопоказаний к бронхоскопии.

В связи с этим целью предлагаемого изобретения является разработка способа дифференциальной диагностики хронического обструктивного бронхита и бронхиальной астмы смешанной формы.

Способ осуществляется следующим образом.

У обследуемого берут кровь из вены (3 мл) в пробирку с гепарином, на 1 мл крови 25 единиц гепарина. Кровь разводят раствором Хенкса в соотношении 1: 1. На дно сухой пробирки наливают 3 мл градиента плотности p= 1,077 г/мл. Для контроля жизнеспособности клетки окрашивали трипановым синим. Процент окрашенных клеток не превышал 3-4. Наслаивают разбавленную кровь на градиент плотности, не допуская перемешивания сред. Центрифугируют 40 минут при 1500 оборотах в минуту. После центрифугирования убирают надосадочную жидкость пипеткой и собирают верхнее кольцо, состоявшее из лимфоцитов в сухую пробирку. Нижний слой плазмы, содержащий гранулоциты, собирают в другую пробирку. Добавляют раствор Хенкса до 5 мл, ресуспендируют и отмывают при 1500 оборотах в минуту 10 минут. Убирают надосадочную жидкость до 0,1 мл. Добавляют раствор Хенкса, чтобы получилась суспензия лимфоцитов в объеме 1 мл, гранулоцитов – 0,7 мл. Ресуспендируют. Подсчитывают клетки в камере Горяева и доводят до нужной концентрации (лимфоциты – 4,5109/л, гранулоциты -3,0109/л). Переносят лимфоциты в бакпечатку, гранулоциты на покровное стекло и инкубируют 1 час при температуре 37oС в термостате. После инкубирования убирают надосадочную жидкость с гранулоцитов и добавляют к гранулоцитам лимфоциты. Инкубируют при температуре 37oС 1 час в термостате. Затем добавляют 1 каплю глютарового альдегида 3% и выдерживают в течение 5 минут при комнатной температуре по Маю-Грюнвальду. Высушивают при комнатной температуре. С помощью светового микроскопа определяют количество свободнолежащих лимфоцитов и розеткообразующих. Для повышения точности результатов подсчет ведут на 300 клеток в 3-х полях зрения с дальнейшем построением цитограммы.

Полученные результаты, характеризующие характер заболевания, представлены в цитограмме гранулоцитосвязывающих лимфоцитов (ЛСГ), таблица. Как видно из таблицы, у больных БА в период обострения достоверно (p<0,001), в сравнении с контрольной группой доноров, увеличены показатели ЛСГ-1, свидетельствующие о воспалительном процессе и достоверно (p<0,001) снижены показатели ЛСГ-2, указывающие на наличие иммунодефицита.

При качественном анализе гранулоцитов, образующих розетки с лимфоцитами, нами было установлено, что у всех обследованных больных с БА смешанного варианта в 100% розеткообразование происходит преимущественно за счет эозинофилов.

При этом у 2 из 10 больных БА выявлена эозинофилия в крови и у 6 больных – в бронхиальном смыве.

Полученные нами данные указывают на повышенную активность эозинофилов в процессе розеткообразования с лимфоцитами при БА, в отличие от ХОБ, при котором в процессе розеткообразования с лимфоцитами участвуют преимущественно сегментоядерные нейтрофилы.

Разработанный способ диагностики позволяет получить более достоверные данные в течение 4-х часов, по сравнению с существующими: эозинофилия в общем анализе крови была выявлена у 2 из 10 обследованных больных, а в бронхиальном смыве – у 6 из 10 больных. Способ не требует особой стерильности, дефицитных реактивов, дорогостоящих приборов и прост в исполнении, экономичен.

Источники информации
1. Адо А. Д. , Маянский А. Н. Иммунология. – 1986. – 1. – М. , 1986, – с. 20-27.

2. Федосеев Г. Б. Механизмы обструкции бронхов. – Санкт-Петербург, 1995, – с. 118-119.

Формула изобретения


Способ дифференциальной диагностики хронического обструктивного бронхита и бронхиальной астмы смешанного генеза путем исследования крови, отличающийся тем, что показатели крови оценивают по цитограмме гранулоцитосвязывающих лимфоцитов и при преимущественном выявлении в мазках эозинофильно-лимфоцитарных розеток диагностируют бронхиальную астму, а нейтрофильно-лимфоцитарных розеток – хронический обструктивный бронхит.

РИСУНКИ

Рисунок 1


MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 06.08.1999

Номер и год публикации бюллетеня: 10-2003

Извещение опубликовано: 10.04.2003


Categories: BD_2178000-2178999