Патент на изобретение №2177616
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭНДОТОКСИНЕМИИ У ДЕТЕЙ С АТОПИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ
(57) Реферат: Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии. Способ осуществляют путем иммуноферментного анализа крови, при этом определяют содержание антител к к гликолипиду (ГЛП) и кишечной (E.coIi) и при их соотношении, равном I, 0  0, 2, констатируют наличие синдрома эндотоксинемии в стадии ремисии, а при 2,50,4 – в стадии обострения. Способ позволяет установить патогенетическую значимость эндотоксинемии при бронхиальной астме.
Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии. Целью изобретения является установление патогенетической значимости эндотоксина при бронхиальной астме у детей на основании маркеров эндотоксинемии определения титров антител к гликолипиду (ГЛП) и кишечной палочке (E.coli). Непрерывный рост частоты бронхиальной астмы у детей, нарастание тяжелых форм, приводящих к инвалидизации, резистентность к терапии требуют поиска новых механизмов в формировании данной патологии. Общепатологическим фактором, индуцирующим развитие различной патологии, в том числе и неинфекционной, является системная эндотоксинемия [3]. Эндотоксин – компонент клеточной стенки большинства грамотрицательных бактерий. В физиологических условиях организма эндотоксин находится в кишечнике, а его незначительная часть попадает в кровоток. Эндотоксин в организме способен изменять регуляцию антителогенеза, активировать В-лимфоциты, приводить к освобождению биологически активных веществ клеточную гипоксию, угнетение окислительно-восстановительных процессов и глубокие метаболические нарушения. В настоящее время изучена роль эндотоксина в формировании ОРВИ, респираторного дистресс-синдрома, заболеваний печени, почек, инфаркте миокарда и др. состояниях [2,3]. В литературе отсутствуют данные об эндотоксинемии и степени ее специфической компенсации при бронхиальной астме у детей. Показано только участие эндотоксина, присутствующего в домашней пыли, в модулировании остроты симптомов и легочной функции при данной патологии [4,5]. При этом эндотоксин рассматривается как неспецифический и “повоспалительный” фактор. Но до сих пор не найдены критерии установления факта участия эндотоксина при бронхиальной астме [4]. Специфическими маркерами ответной реакции организма на системную эндотоксинемию являются антитела к ГЛП. Помимо этого для оценки состояния антиэндотоксинового иммунитета важным является определение уровня антител к E.coli, как основному представителю бактерий кишечника. В доступной нам литературе не было найдено материалов по использованию определения антител к ГЛП и E. coli как установления факта участия эндотоксина в формировании бронхиальной астмы у детей. Концентрацию антител в сыворотке крови определяли твердо-фазным иммуноферментным методом [1]. Для этого плоскодонные планшеты сенсибилизировали антигенами в оптимальной дозировке (от 2,5 до 5 мкг/мл) в течение 24 ч при 4oС. Сенсибилизированные планшеты подвергали блокировке 0,5%-ным раствором альбумина в течение одного часа при температуре 37oC. После промывания забуферным физиологическим раствором (ЗФР) с 0,05%-ным раствором твин-80 в лунки вносили по 200 мкл исследуемой сыворотки в разведении 1:50 в том же ЗФР с твином. После инкубации при 37oC в течение часа и отмывки от несвязавшихся антител тем же растворителем связанные антитела выявляли коммерческим препаратом конъюгата белка А с пероксидазой хрена, используемого в тест-системах на ВИЧ-антитела. Хромогенную реакцию проводили с фенилендиамином с последующей остановкой 10%-ным раствором серной кислоты. Для определения концентрации выявляемых антител на том же планшете ставили реакции с разведениями аффинно-выделенных антител той же специфичности. Результаты выражали в микрограммах белка антител на миллилитр сыворотки крови. Обследовано 82 ребенка с атонической бронхиальной астмой в возрасте от 10 мес до 15 лет. Мальчики составили 67,1%, девочки – 32,9%. В возрастной структуре детей до 3 лет – 11%, от 3 до 7 лет 20,7%, от 7 до 15 лет – 68,3%. Тяжелое течение заболевания отмечалось у 15,8% детей, среднетяжелое у – 63,2%, легкое – у 21,0%. Контрольную группу составили 34 практически здоровых ребенка без аллергически измененной реактивностью и очагов хронической инфекции. Различия по полу и возрасту между сравниваемыми группами статистически незначимы. У детей с атопической бронхиальной астмой в периоде обострения отмечается достоверное повышение уровня антител к ГЛП до 23,3 1,6 мкг/мл, что в 2,5 раза превышает показатели контрольной группы – 9,1 1,7 мкг/мл (р<0,001), а также снижение количества антител к кишечной палочке до 9,5 0,5 мкг/мл, что в 1,6 раза ниже, чем у практически здоровых детей – 15,3 2,0 мкг/мл (р<0,001). Причем изучение индивидуальных значений показателей выявило, что повышение уровня антител к ГЛП отмечалось у 95,1% детей, а снижение антиэшерихиозных антител – у 87,8%.
В периоде ремиссии бронхиальной астмы выявлено снижение уровней антител к ГЛП (р<0,001) в 1,5 раза до 15,8 1,2 мкг/мл, а также повышение к кишечной палочке (р<0,001) в 1,6 раза до 15,1 1,2 мкг/мл.
Наряду с определением уровня антител к ГЛП и E.coli оценивали и их соотношение < Р. Так, у практически здоровых детей Р составляет 0,6. В периоде обострения атонической бронхиальной астмы происходит увеличение Р до 2,5, в периоде ремиссии – снижение до 1,0.
Таким образом, анализ маркеров эндотоксинемии у детей с атонической бронхиальной астмой выявил, с одной стороны, рост (р<0,001) в приступном периоде уровня антител к ГЛП, а с другой стороны, снижение (р<0,001) количества антител к кишечной палочке. В период ремиссии отмечается достоверное снижение уровня антител к ГЛП и повышение содержания антиэшерихиозных антител. Причем количество антител к кишечной палочке достигает значений контрольной группы, а уровень антител к ГЛП остается достоверно выше, чем у практически здоровых детей.
Полученные данные подтверждают патогенетическую значимость эндотоксина при атопической форме бронхиальной астмы у детей. Возможным источником эндотоксина является E.Coli, что подтверждается снижением уровня антител к кишечной палочке в периоде обострения, вероятно, в связи с истощением механизмов компенсации. Учитывая достоверный рост (р<0,001) в периоде ремиссии антиэшерихиозных антител и достижение уровня показателей контрольной группы, можно предположить компенсаторный характер изменений.
Преимуществом и новизной данного способа является то, что установлена патогенетическая значимость эндотоксинемии при бронхиальной астме у детей на основании динамического изменения содержания его специфических маркеров – повышения концентрации антител к ГЛП и снижения – к E.coli.
Пример.
Больная 11 лет, находилась на стационарном лечении во 2-й детской клинической больнице с 28.04 по 18.05.98 г. (история болезни N 1381) с диагнозом: Бронхиальная астма, атопическая форма, период обострения, средней тяжести, поливалентная аллергия. ДЖВП по гипотоническому типу. Реактивный панкреатит. Дисбактериоз кишечника.
Жалобы при поступлении на приступы удушья, свистящее дыхание, приступообразный кашель. Больна с 2-х летнего возраста. Первые приступы бронхообструкции отмечались на фоне ОРВИ, в дальнейшем стали рецидивировать с частотой 2-3 раза в месяц длительностью 2-3 часа, ухудшение преимущественно в ночные часы. Приступы начинаются внезапно, на фоне нормальной температуры и самочувствия. Больной в периоде ремиссии проведено кожное тестирование и выявлена этиологическая значимость домашней пыли, D. pteronissinum, шерсти кошки.
Анамнез жизни: от IV беременности, протекавшей с токсикозом 1 половины, нефропатией II степени, анемией, роды II срочные, родилась в асфиксии, вес при рождении 4200 г, на грудном вскармливании находилась до 2-х месяцев, затем на искусственном. Наследственность отягощена – у отца псориаз, у матери – ревматизм. Перенесенные заболевания: коклюш, ОРВИ, рецидивирующие обструктивные бронхиты.
При поступлении общее состояние средней тяжести за счет дыхательной недостаточности. Одышка экспираторного характера с участием вспомогательной мускулатуры в акте дыхания, положение вынужденное с фиксацией верхнего плечевого пояса. Ребенок возбужден. Кожные покровы бледные, отмечается периорбитальный и периоральный цианоз. В зеве гиперемии нет. Лимфатические узлы не увеличены. В легких по всем полям выслушиваются сухие свистящие и разнокалиберные влажные хрипы, перкуторно над легкими коробочный звук. Тоны сердца ясные, ритмичные. Пульс 92 удара в минуту, ритмичный, удовлетворительного наполнения и напряжения. Живот мягкий, болезненный в правом подреберье, печень у края реберной дуги, билиарные симптомы слабо положительные. Стул оформлен, диурез не нарушен.
Назначено лечение: гипоаллергенная диета, гипоаллергенное окружение, сальбутамол, эуфилин, бромгексин, рибоксин, интал.
Гемограмма: L – 5,8 109/л, n – 4%, с – 62%, э – 5%, м – 5%, л – 26%.
Функция внешнего дыхания: PEF составил 280 л/мин (при норме – 371 л/мин), то есть составляет 75,4% от нормы.
Иммунограмма: CD3+ -60%, CD4+ -48%, CD8+ -17%, ИРИ – 2,8, CD19+ – 18,2%, CD56+ – 8,8%, IgA – 1,4 г/л, IgG – 8,4 г/л, IgM – 2,0 г/л, ЦИК – 0,058 ед, CH50 – 40,2%, НСТ сп – 17%, НСТ ст – 15, ФИ лат. – 48%, ФЧ лат. – 4, ФИ st – 35%, ФЧ st – 3,8, IgE – 480 ЕД.
Показатели антиэндотоксинового иммунитета:антитела к ГЛП в периоде обострения 21,1 мкг/мл, в периоде ремиссии 12,2 мкг/мл; антитела к E.coli в периоде обострения – 10,0 мкг/мл, в период ремиссии – 14,8 мкг/мл. Показатель соотношения Р в обострении – 2,1, в ремиссиии – 0,8. Таким образом, у ребенка отмечаются увеличение маркеров эндотоксинемии – количества антител к ГЛП со снижением в ремиссии в 1,7 раза и понижение содержания антител к E.coli с повышением в периоде ремиссии в 1,5 раз, что подтверждает участие эндотоксина в формировании бронхиальной астмы у детей. Источники информации 3. Хабриев Р.У. и др. Оценка состояния здоровья человека диагностической тест-системой “СОПС-ИФА” успехи теоретической медицины, Москва, 1995., – С. 10 – 11. Формула изобретения
0,2, констатируют наличие синдрома эндотоксинемии в стадии ремиссии, а при 2,50,4 – в стадии обострения.
MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 24.10.2002
Номер и год публикации бюллетеня: 13-2004
Извещение опубликовано: 10.05.2004
|
||||||||||||||||||||||||||
