Патент на изобретение №2177284
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ХИРУРГИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ ГЛУБОКИХ ДЕФЕКТОВ РОГОВИЦЫ
(57) Реферат: Изобретение относится к медицине, офтальмологии, а именно к способам хирургического лечения глубоких дефектов роговицы, в том числе ожоговой болезни роговицы с угрозой перфорации. Глубокий дефект роговицы заполняют коллагеновым гелем с включенными в него культивированными аллогенными постнатальными или эмбриональными фибробластами. Затем дефект закрывают мягкой контактной линзой с нанесенными на внутреннюю поверхность ее аллогенными постнатальными или эмбриональными эпителиальными клетками. Способ обеспечивает восстановление стромы и эпителия роговицы с небольшим количеством рубцовой ткани. 3 з.п. ф-лы. Изобретение относится к области медицины – офтальмологии – и предназначено для лечения больных с глубокими дефектами роговицы, в том числе послеожоговыми язвами роговицы с угрозой перфорации. Хирургическое лечение больных с дефектами конъюнктивы и роговицы ожоговой этиологии остается актуальной проблемой в офтальмотравматологии. Нередко применение даже самых современных методов консервативного и хирургического лечения не спасает больного от функциональной и анатомической гибели пораженного глаза. Неблагоприятные исходы свидетельствуют как о тяжести повреждения, не совместимого с жизненными функциями глаза, так и об относительной неадекватности применяемых консервативных и хирургических методов лечения. Наиболее близким способом того же назначения является способ, при котором осуществляют заполнение глубокого дефекта роговицы коллагеновым гелем (US 5522888A, 18.05.95). Раствор содержит измельченное вещество ткани природного геля, введенное в трехмерную полимерную сетку гидрогеля, и служит для стимулирования роста клеток эпителия и восстановления стромы роговицы глаза. Данный материал способен в процессе заживления покрываться эпителием роговицы. Коллагеновый гель играет роль матрикса для собственных фибробластов, которые, мигрируя в гель, постепенно закрывают дефект. Однако при этом способе коллагеновый гель не оказывает специфического стимулирующего воздействия на репаративные процессы, глубокое угнетение которых происходит при послеожоговых и трофических глубоких дефектах роговицы. Предлагаемый способ основан на применении выращенных в культуре аллогенных фибробластов, включенных в трехмерный коллагеновый гель, представляющий собой эквивалент дермы и культивированных аллогенных (постнатальных или эмбриональных) или ксеногенных эпителиальных клеток, нанесенных на внутреннюю поверхность мягкой контактной линзы в виде многослойного пласта. Основным преимуществом предлагаемого способа является его многофакторное воздействие на деструктивный процесс: 1 – коллагеновый гель, обладая неспецифическим стимулирующим действием на регенерацию роговичной ткани, играет роль трехмерного каркаса для миграции собственных фибробластов и эпителиальных клеток в дефект стромы и эпителия, выполняет протекторную функцию в защите подлежащих собственных тканей от негативного воздействия факторов внешней среды; 2- внесенные в коллагеновый гель культивированные аллогенные фибробласты оказывают специфическое стимулирующее воздействие на регенерацию роговичной ткани посредством секреции факторов роста, цитокинов и др. во внешнюю среду, принимают активное участие в синтезе собственной базальной мембраны эпителия; 3-нанесенные на внутреннюю поверхность фиксирующей мягкой контактной линзы в виде многослойного пласта культивированные аллогенные эпителиальные клетки оказывают специфическое стимулирующее воздействие на эпителизацию роговичного дефекта посредством секреции биологически активных веществ (факторов роста, цитокинов и др.) во внешнюю среду, принимают активное участие в синтезе собственной базальной мембраны эпителия. В офтальмологии предлагаемый способ был впервые применен нами на экспериментальных животных. Эксперимент проведен на стандартной модели тяжелого щелочного ожога роговицы. Экспериментальный ожог глаз 10 кроликов наносили под кеталаровым наркозом путем накладывания на роговицу пропитанного 10%-ным раствором NaOH круга фильтровальной бумаги диаметром 7 мм, время экспозиции 40 секунд. Мягкую контактную линзу с нанесенными на внутреннюю ее поверхность культивированными аллогенными эпителиальными клетками получали следующим способом. Культивирование аллогенных эпителиальных клеток кератиноцитов производили стандартным способом в среде DMEM:F12 при добавлении эпидермального фактора роста (10 нг/мл), инсулина (5 мкг/мл), изопротеринола (10М) при температуре 37 oС в атмосфере 5% CO2 На 2 сутки после нанесения экспериментального ожога культивированные фибробласты в коллагеновом геле после предварительной некрэктомии были уложены в дефект роговицы. Сверху на трансплантат и роговицу укладывали мягкую контактную линзу с нанесенным на ее внутреннюю поверхность многослойным пластом эпителиальных клеток. Гисто-морфологические исследования, проведенные на 2, 7, 14, 30 сутки свидетельствуют о временном приживлении трансплантата и постепенном замещении коллагенового геля и аллогенных фибробластов собственными кератоцитами. Восстановление эпителия происходит за счет эпителизации по поверхности трансплантата с сохранением эпителиального покрова в процессе замещения трансплантата. В итоге происходит закрытие роговичного дефекта и предупреждение грозного осложнения ожога роговицы-перфорации. Обнадеживающие результаты позволили нам применить способ в клинической практике. Техническим результатом предлагаемого изобретения является полноценное восстановление дефекта как стромы, так и эпителиального дефекта с получением наиболее приближенной к нормальной структуре ткани роговицы. Технический результат достигается тем, что осуществляется одновременная стимуляция регенерации как стромы, так и эпителия роговицы с помощью аллогенных фибробластов в коллагеновом геле и эпителиальных клеток на мягкой контактной линзе. Способ осуществляется следующим образом. Трансплантаты фибробластов и эпителиальных клеток на контактной линзе готовят предварительно по вышеизложенной методике. После местной анестезии лезвием и скарификатором производится удаление некротически измененной роговичной ткани. В дефект роговицы укладывается соответствующий по объему дефекта роговицы трансплантат культивированных фибробластов в трехмерном коллагеновом геле, трансплантат фиксируется в ложе мягкой контактной линзой с предварительно нанесенным на внутреннюю поверхность многослойным пластом аллогенных (кератиноцитов) или ксеногенных эпителиальных клеток. Конкретные примеры выполнения способа: Пример N 1. Кролик N1. Модель тяжелого химического ожога роговицы обоих глаз щелочью по стандартной методике. На 2 сутки после ожога под кеталаровым наркозом произведена некрэктомия на обоих глазах. На опытном глазу дефект роговицы заполнен коллагенновым гелем с включенными в него культивированными человеческими фибробластами, а трансплантат фиксирован мягкой контактной линзой с предварительно нанесенным на внутреннюю поверхность многослойным пластом аллогенных кератиноцитов. На контрольном глазу роговица закрыта мягкой контактной линзой диаметром 18 мм без аллогенных кератиноцитов. На обоих глазах произведена некровавая блефарорафия. На 7 сутки при осмотре на обоих глазах отмечено формирование десцеметоцеле, однако на опытном глазу диаметр десцеметоцеле в 2 раза меньше, чем на контрольном. Произведена повторная трансплантация фибробластов в геле и кератиноцитов на контактной линзе на опытном глазу. На контрольном глазу оставлена мягкая контактная линза. На 18 сутки после начала лечения на опытном глазу отмечено полное восстановление дефекта стромы и полная эпителизация роговицы. На контрольном глазу до последнего дня наблюдения (30 сутки) имела место персистирующая эрозия и сохранялся дефект стромы. Пример N 2. Больная Б. 10 дней назад перенесла химический щелочной ожог роговицы 3-4 степени. Консервативное лечение по месту жительства неэффективно. При поступлении роговица матового цвета с глубоким дефектом в центре диаметром до 6 мм. Конъюнктива гиперемирована, васкуляризирована. Произведена операция на травмированном глазу по предлагаемому способу: некрэктомия, трансплантация аллогенных культивированных фибробластов в трехмерном коллагеновом геле с концентрацией 100 тыс клеток в 1 мл геля с фиксацией трансплантата мягкой контактной линзой диаметром 14 мм с многослойным пластом культивированных аллогенных кератиноцитов на внутренней поверхности. На 5 сутки после операции отмечено уменьшение диаметра дефекта роговицы до 3 мм. Произведена повторная трансплантация фибробластов в геле и кератиноцитов на контактной линзе. В послеоперационном периоде к 12 суткам после начала лечения наступило закрытие дефекта стромы и полная эпителизация роговицы. Выписана с остротой зрения 0.2 на травмированном глазу. Пример N 3. Больной Т. 22 дня назад перенес термо-химический ожог роговицы 3 степени. Консервативное лечение по месту жительства без положительного эффекта. При поступлении определяется глубокий дефект роговицы диаметром 3 мм, роговица отечная, по периферии отек эпителия. Глубжележащие структуры не видны. Произведена операция по предлагаемому способу. На 10 сутки после начала лечения отмечено полное закрытие дефекта стромы и полная эпителизация роговицы. Всего предлагаемым способом оперировано 10 кроликов и 4 больных с тяжелыми ожогами роговицы. Во всех случаях получена активизация репаративных процессов, быстрое закрытие дефектов стромы и эпителия роговицы с формированием бельма 2-3 категории. Основным преимуществом предлагаемого способа является его многофункциональное действие на деструктивный процесс: стимуляция аллогенными фибробластами регенерации посредством секреции факторов роста, цитокинов и др. во внешнюю среду, активное участие их в синтезе собственной базальной мембраны, формирование коллагеновым гелем каркаса для миграции собственных фибробластов в дефект стромы, защита коллагеновым гелем подлежащих собственных тканей от негативного воздействия факторов внешней среды, многослойный пласт аллогенных эпителиальных клеток, обладая гистотипическими свойствами, стимулируют регенерацию собственного эпителия роговицы с быстрым закрытием эпителиального дефекта. В качестве эпителиальных клеток могут быть использованы также ксеногенные клетки, так как стимуляция собственного эпителия реципиента происходит независимо от источника эпителиального донорского трансплантата. Преимуществом способа является формирование помутнения роговицы меньшей интенсивности, чем при использовании других способов лечения. Формула изобретения
|
||||||||||||||||||||||||||
