Патент на изобретение №2177157
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К ФОРМИРОВАНИЮ ОПИАТНОЙ ЗАВИСИМОСТИ
(57) Реферат: Изобретение относится к медицине, в частности к наркологии. Способ обеспечивает повышение точности определения предрасположенности к формированию опиатной зависимости. Определяют in vitro концентрацию циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) при тестовой нагрузке морфином в сочетании с налоксоном в нативных и в нативных предварительно морфинизированных мононуклеарных клетках периферической крови, рассчитывают индекс предрасположенности путем деления значения концентрации цАМФ в нативных предварительно морфинизированных на ее значение в нативных мононуклеарных клетках и при значении индекса более 1,3 определяют высокую предрасположенность к формированию опиатной зависимости. Изобретение относится к области медицины, а именно к наркологии, и может быть использовано с целью выявления лиц с высоким риском развития зависимости для повышения эффективности профилактических мероприятий. Известен способ определения предрасположенности к формированию опиатной зависимости в экспериментальных условиях у крыс путем тестовой нагрузки морфином методом самовведения с последующим определением количества морфина, потребленного животным (в ж-ле: Бюллетень Экспериментальной Биологии и Медицины. 1992, сентябрь 6; 114(9)стр. 296-298). Недостатком этого способа является невозможность его использования у человека в связи с необходимостью искусственной морфинизации. Также известен способ определения предрасположенности к формированию опиатной зависимости путем определения концентрации циклического 3′, 5′ – аденозинмонофосфата в мононуклеарных клетках периферической крови при тестовой нагрузке морфином и морфином в сочетании с налоксоном in vitro с расчетом индекса предрасположенности (заявка на изобретение N 2000115607/14 (016964) RU). Высокую предрасположенность к формированию опиатной зависимости определяют при численном значении индекса не более 1,3. Достоверность определения составляет 82,1% случаев. Недостатком этого способа является недостаточно высокая точность определения. Техническим результатом предлагаемого решения является повышение точности объективного, прижизненного способа определения предрасположенности к формированию опиатной зависимости у человека. Этот результат достигается тем, что дополнительно определяют концентрацию циклического 3′, 5′ – аденозинмонофосфата в предварительно морфинизированных мононуклеарных клетках периферической крови, индекс предрасположенности рассчитывают путем деления значения концентрации циклического 3′, 5′-аденозинмонофосфата в предварительно морфинизированных мононуклеарных клетках периферической крови на ее значение в нативных мононуклеарных клетках периферической крови и при значении индекса более 1,3 определяют высокую предрасположенность к формированию опиатной зависимости. Не вытекает явным образом из известного уровня техники тот факт, что соотношение значений концентрации циклического 3′,5′-аденозинмонофосфата в присутствии морфина и налоксона в предварительно морфинизированных и нативных мононуклеарных клетках периферической крови является более точным критерием предрасположенности к формированию опиатной зависимости. Способ осуществляют следующим образом: Из крови донора, разбавленной равным объемом культуральной среды RPMI-1640 с EDTA, методом центрифугирования (400g  45 мин) в градиенте плотности выделяют суммарную фракцию мононуклеарных клеток периферической крови (МПК); собранные МПК промывают в избытке RPMI-1640 (400g15′). Часть МПК инкубируют 4,5 часа в среде, содержащей 0,5 мкМ морфина гидрохлорида, после чего промывают в избытке RPMI-1640 (400g15′). 5105 МПК (нативных и морфинизированных) инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре в конечном объеме 100 мкл RPMI-1640, содержащей 10 мкМ форсколина, 1 mM EDTA, 6 mM теофиллина, 50 нМ морфина гидрохлорида и 20 нМ налоксона. Реакцию останавливают внесением в пробу 1 мл охлажденного этанола. После переноса проб в пробирки для анализа и выпаривания этанола в токе азота определяют концентрацию цАМФ, например, с помощью коммерческого набора “Cyclic АМР 3H] assay system” (Amersham). Рассчитывают индекс предрасположенности путем деления концентрации цАМФ в мононуклеарных клетках периферической крови, предобработанных морфином, на концентрацию цАМФ в нативных. При значении индекса более 1,3 определяют высокую предрасположенность к формированию опиатной зависимости.
Пример 1.
In vitro в присутствии морфина и налоксона определяют концентрацию циклического 3′, 5′ – аденозинмонофосфата в нативных и предварительно морфинизированных мононуклеарных клетках периферической крови.
Группа 1. Донор А. Концентрация цАМФ в нативных МПК составляет 2,53 пмоля/106 клеток, в предварительно морфинизированных МПК – 0,91 пмоля/106 клеток. Коэффициент предрасположенности 0,91/2,53= 0,359, что меньше 1,3 и соответствует низкой предрасположенности к формированию опиатной зависимости. Среднее значение индекса предрасположенности по группе 0,37 0,15.
Группа 2. Донор В. Концентрация цАМФ в нативных МПК составляет 1,01 пмоля/106 клеток, в предварительно морфинизированных МПК – 2,51 пмоля/106 клеток. Коэффициент предрасположенности 2,51/1,01=2,4836, что больше 1,3 и соответствует высокой предрасположенности к формированию опиатной зависимости. Среднее значение индекса предрасположенности по группе 2,540,52.
Достоверность различий между группами составила P=0,01618. Предлагаемый способ применен у 28 доноров. Совпадение прогнозируемого и реального результатов имело место в 92,9% случаев.
Предлагаемый способ имеет преимущество перед известными, заключающееся в том, что он повышает точность безопасного объективного, без морфинизации организма (испытуемого) определения предрасположенности конкретного индивидуума к формированию опиатной зависимости.
Формула изобретения
MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 01.11.2004
Извещение опубликовано: 20.02.2006 БИ: 05/2006
|
||||||||||||||||||||||||||
