Патент на изобретение №2176084
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИНДРОМА ГОРЛИНА-ГОЛЬТЦА
(57) Реферат: Изобретение относится к медицине и может быть использовано при диагностике множественных базалиом, связанных с синдромом Горлина-Гольтца. Способ включает HLA-типирование антигенов 1-го и 2-го классов, и при выявлении антигенов А10, В14 и отсутствии DR1 диагностируют синдром Горлина-Гольтца. Технический результат: способ обеспечивает раннюю дифференциальную диагностику заболевания, прогнозирование течения и подбор рациональных методов лечения, предотвращающих рецидивы. Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при диагностике множественных базалиом, связанных с синдромом Горлина-Гольтца. Известен способ иммуногенотипирования (HLA-типирование) у больных с солитарными и множественными базалиомами (Писклакова Т.П., Ильин И.И., Питеркина Л. В. Анализ ассоциаций антигенов системы HLA с базалиомами кожи. / Вестник дерматол., 1991, N 8, с. 10-12). Было обследовано 86 лиц славянской национальности, не состоящих в родстве, в том числе 42 с солитарными, 44 – с множественными базалиомами (МБ). Контрольную группу составляли 701 донор славянской национальности. Выявляли 8 антигенов локуса A и 15 – локуса B. Установили, что течение опухолевого процесса при множественных базалиомах детерминировано системой HLA, т.е. зависит от набора антигенов HLA, что может служить критерием в дифференциальной диагностике этого заболевания и выборе метода лечения. Было установлено, что у больных множественными базалиомами существует статистически достоверная положительная ассоциация между антигеном B14 и множественными базалиомами. Недостатком этого способа является то, что он не позволяет выделить в структуре множественных базалиом опухоли, связанные с синдромом Горлина-Гольтца (СГГ). Наиболее близким является способ диагностики синдрома Горлина-Гольтца путем клинических и иммуногенетических исследований с проведением HLA-типирования антигенов 1-го класса (Молочков В.А., Горохов Н.Г. Синдром Горлина-Гольтца /Вестник дерматол. и венерологии, 1993, N 5 с. 67-70). Недостатком этого способа является то, что исследуемый материал не давал полную достоверную информацию о наборе антигенов HLA у больного, поскольку в иммунофенотипе не учитывались антигены HLA 2-го класса, которые обеспечивают взаимодействие между всеми субпопуляциями иммунокомпетентных клеток организма с помощью кофактора CD4. Поставленная задача – устранение указанных недостатков за счет дифференциальной диагностики больных множественными базалиомами с учетом выявленных у них иммунологических особенностей в системе HLA. Для этого в способе диагностики синдрома Горлина-Гольтца, включающем HLA-типирование антигенов 1-го класса, предложено дополнительно проводить HLA-типирование антигенов 2-го класса и при выявлении антигенов A10, B14 и отсутствии DR1 диагностировать синдром Горлина-Гольтца. Клиника и течение МБ существенно отличаются от клиники и течения МБ, связанных с СГГ. Поскольку патоморфологическая картина при этих заболеваниях практически совпадает, дифференциальная диагностика между ними должна основываться на комплексной оценке анамнестических, клинических и иммуногенетических данных. Выявление СГГ в структуре МБ позволяет прогнозировать течение опухолевого процесса, выбрать рациональные методы лечения, а также предотвратить рецидивы заболевания. Способ осуществляется следующим образом. Взвесь лимфоцитов готовили обычным методом, центрифугировали на градиенте плотности фикола-верографина 1,076 – 1,078, доводя концентрацию лимфоцитов до 1000 – 2000 в 1 мл. В полученной взвеси примесь гранулоцитов не превышала 5-10% моноцитов, жизнеспособность клеток была не ниже 98-100%. В лунки камеры Терасаки, где под слоем вазелинового масла находились по 0,001 мл различных образцов стандартных тестовых анти-HLA-сывороток, добавляли 0,001 мл приготовленной взвеси исследуемых лимфоцитов. Смесь инкубировали при температуре 220oC в течение 30 минут при определении HLA 1 класса и при температуре 370oС – HLA 2 класса. По истечении указанного времени в каждую лунку вносили по 0,005 мл кроличьего комплемента (смесь сывороток 70 – 100 кроликов), после чего микрокамеры инкубировали при температуре 220 – 240oC в течение 60 минут при определении HLA 1 класса и 120 минут – антигенов 2 класса. По окончании инкубации к клеткам добавляли 0,0025 мл 5% водного раствора эозина и 0,0025 мл 40% формалина (pH 6,8-7,4) для фиксации клеток. Учет реакции проводили микроскопированием. Интенсивность цитотоксической реакции определялась числом погибших лимфоцитов и оценивалась по специальной 8-балльной шкале. Результаты учитывали в баллах по международной системе. Результаты учитывали с помощью люминесцентного микроскопа: Готовили маточный красящий раствор: в 1 мл этанола 96o растворяли 15 мг акридина оранжевого и 50 мг этидиума бромида, после чего объем раствора доводили до 50 мл дистиллированной водой. Хранили раствор при температуре -200oС. Перед проведением микролимфоцитотоксического теста из маточного раствора готовили рабочий красящий раствор путем добавления к 1 мл раствора Хенкса 1 мкл маточного красящего раствора. При проведении микролимфоцитотоксического теста по окончании времени инкубации с комплементом микрокамеру резко встряхивали рукой для удаления вазелинового масла. Затем в каждую лунку микрокамеры вносили по 1 мкл рабочего красящего раствора и выдерживали в течение 5 минут при комнатной температуре. По истечении времени инкубации определяли соотношение “живых” и “мертвых” клеток в каждой лунке, учитывая, что “мертвые” клетки окрашиваются в красный цвет, а “живые” – в зеленый. Интерпретация результатов: 1 (-) – 10% мертвых клеток – отрицательная реакция; 2 (+) – 11 – 20% мертвых клеток – сомнительно-положительная реакция; 4 (++) – 21 – 40% мертвых клеток – слабо-положительная реакция; 6 (+++) – 41 – 80% мертвых клеток – положительная реакция; 8 (++++) – 81 – 100% мертвых клеток – выраженно-положительная реакция. Был обследован 21 пациент с подозрением на синдром Горлина-Гольца. Все больные относились к смешанной Российской популяции и не состояли в родстве между собой. Контрольную группу составили 312 доноров смешанной Российской популяции при определении антигенов системы HLA 1 класса и 75 доноров при определении антигенов системы HLA 2 класса. Определение антигенов системы HLA 1 и 2 класса авторы проводили в общепринятом двухступенчатом микролимфоцитотоксическом тесте, основанном на способности HLA-сывороток цитотоксически действовать на лимфоциты, имеющие соответствующие антигены в присутствии комплемента (NIH – National Institute Helth, 1972). Верифицировали антигены системы HLA: локус A – 8 антигенов, B – 17 антигенов, локус DR – 9 антигенов. Было установлено, что течение опухолевого процесса при синдроме Горлина-Гольтца и множественных базалиомах кожи детерминировано системой HLA. СГГ достоверно ассоциируется с HLA A10 и B14 при отсутствии DR1. Пример 1. Больная Г. , 45 лет. Обратилась к дерматоонкологу в августе 1996 года. Больна 10 лет. На коже лица и туловища имелись 12 безболезненных опухолевых образований размером от 0,4 до 2,5 см в диаметре, с четкими границами, шелушением в центре и валиком из отдельных мелких блестящих роговых узелков по периферии. Регионарные лимфатические узлы не были увеличены. Гистологический диагноз: солидно-аденоидные базалиомы. Пациентка наблюдается стоматологом по поводу кист в костях верхней и нижней челюстей, окулистом по поводу слепоты, обусловленной атрофией зрительного нерва и глаукомы. В соответствии с предлагаемым способом больной произведено HLA-типирование, обнаружены антигены A1, 10, B14, B40, DR2, DR4. Согласно заявляемому способу, выявление антигенов HLA A10, B14 и отсутствие антигена DR1 соответствует синдрому Горлина-Гольтца. На основании клиники и течения заболевания больной был поставлен диагноз: синдром Горлина-Гольтца. В связи с выявленной патологией было откорректировано лечение. Пример 2. Больной Д., 61 год. Обратился к дерматоонкологу в марте 1997 года. Болен 2 года. На коже лица и туловища имелись 5 безболезненных опухолевых образований размером от 0,5 до 1,2 см в диаметре, с четкими границами, шелушением в центре и валиком из отдельных мелких блестящих роговых узелков по периферии. Регионарные лимфатические узлы не были увеличены. Гистологический диагноз: солидные базалиомы. В соответствии с предлагаемым способом больному произведено HLA-типирование, обнаружены антигены A9, B14, B17, DR5, DR6. Согласно заявляемому способу, выявление антигена HLA B14 и отсутствие антигенов A10 и DR1 не соответствует диагнозу синдрома Горлина-Гольтца. На основании клиники и течения заболевания больному был поставлен диагноз: множественные базилиомы кожи. Приведенные клинические наблюдения подтверждают, что у больных с синдромом Горлина-Гольтца имелись характерные иммуногенетические признаки: присутствие антигенов HLA A10, B14 и отсутствие антигена HLA DR1. Предлагаемый способ может быть использован для ранней и дифференциальной диагностики синдрома Горлина-Гольтца, прогнозирования течения заболевания, что обеспечивает подбор рациональных методов лечения, предотвращающих рецидивы. Формула изобретения
MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 10.08.2002
Номер и год публикации бюллетеня: 13-2004
Извещение опубликовано: 10.05.2004
|
||||||||||||||||||||||||||
