Патент на изобретение №2174400

(54) ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ БИФИДОБАКТЕРИИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к биотехнологии. Биопрепарат содержит биомассу штаммов Bifidobacterium bifidum 1 в количестве не менее 10⁷ микробных клеток и Bacillus subtilis 3Н в количестве 5 10⁸ – 5 10⁹ микробных клеток в одной дозе и стабилизатор. Препарат обладает высокой антагонистической активностью в отношении широкого круга патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, нормализует микроэкологию кишечника, сокращает сроки клинико-бактериологического выздоровления. 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к производству биопрепаратов-пробиотиков и применяется для лечения и профилактики дисбактериозов.

Известно, что клинические проявления дисбактериоза кишечника, как правило, отмечаются на фоне отсутствия или дефицита бифидобактерий, которые в норме являются основой микрофлоры кишечника людей всех возрастов. Именно бифидофлоре принадлежит ведущая роль в поддержании барьерных функций кишечника и в жизнедеятельности макроорганизма в целом [1]. Отсутствие или резкое снижение уровня бифидобактерий в кишечнике детей и взрослых является одним из патогенетических факторов длительных кишечных дисфункций и одной из причин, осложняющих течение ряда заболеваний.

Результаты многочисленных исследований научно обосновывают и практически подтверждают необходимость нормализации биоценоза и поддержания высокого количественного уровня бифидобактерий с помощью бифидосодержащих биопрепаратов лечебно-профилактического действия [2].

К настоящему времени арсенал биопрепаратов, предназначенных для восстановления бифидофлоры, включает: монопрепараты – бифидумбактерин, бифидумбактерин форте [3]; комплексные препараты, содержащие бифидобактерии и биологически активные ингредиенты – лизоцим, интерферон, иммуноглобулины, биологически активные пептиды, факторы роста бифидобактерий [4, 5], включающие дополнительно бактерии разных штаммов и видов из числа основных представителей нормального кишечного биоценоза бификол, бифилакт, бифацид [2, 3, 6].

В большинстве случаев возможна эффективная и безопасная деконтаминация кишечника от условно-патогенных бактерий при помощи нового отечественного препарата-пробиотика бактиспорина, основу которого составляют живые клетки антагонистически активного штамма Bacillus subtilis 3H [7]. Лечебное действие бактиспорина связано с широким спектром и высоким уровнем антагонистической активности по отношению к патогенным и условно-патогенным бактериям, в том числе к грибам рода Candida, и высокой ферментативной активностью, способствующей оздоровлению слизистой кишечника, что создает условия для бесконкурентной приживляемости бифидобактерий и восстановления аутофлоры. Однако сами бациллы, входящие в состав бактиспорина, обладают слабыми адгезивными свойствами и не колонизируют слизистую кишечника [8, 9].

Наиболее близким к изобретению является бифидумбактерин, представляющий собой микробную массу Bifidobacterium bifidium 1 [3]. Лечебно-профилактический эффект, оказываемый Bifidobacterium bifidium, связан с колонизацией слизистой кишечника, формированием защитной биопленки на ее поверхности и высокой активностью кислотообразования, что создает неблагоприятные условия для жизнедеятельности многих патогенных микробов. Действие бифидумбактерина направлено в основном на восполнение дефицита анаэробного компонента эубиоза.

Однако приживляемость бифидобактерий при применении препарата бифидумбактерин низкая, часто составляет менее 1% от введенного в организм количества жизнеспособных бактерий, что обусловлено нарушением состояния слизистой кишечника и ее колонизацией условно-патогенной микрофлорой. Отсюда недостаточная клиническая эффективность бифидобактерина и длительный курс его применения, составляющий 4-8 недель, нередко требующий повторных курсов [4].

Задачей, на решение которой направлено изобретение, является разработка препарата-пробиотика на основе бифидобактерий, обеспечивающего быстрое и полноценное восстановление бифидофлоры кишечника за счет комплексного воздействия на клетки слизистых оболочек кишечника и микробиоценоз.

Технический результат заключается в получении препарата-пробиотика бифидоспорина, содержащего живые клетки производственных штаммов Bifidobacterium bifidum 1 и Bacillus subtilis 3H.

Сущность изобретения заключается в следующем: биопрепарат бифидоспорин содержит живые клетки производственных штаммов Bifidobacterium bifidum в количестве не менее 10⁷ и Bacillus subtilis в количестве 510⁸ – 510⁹ микробных клеток в одной дозе и наполнитель, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Биомасса B.bifidum и B.subtilis – 95
Наполнитель – 5
В отличие от прототипа заявляемый препарат дополнительно содержит живые клетки антагонистически активного штамма Bacillus subtilis 3H в количестве 610⁸ – 510⁹ микробных клеток в одной дозе. Сочетание бифидобактерий и бацилл в составе единого препарата дает следующие преимущества. Препарат обладает высокой антагонистической активностью в отношению широкого круга патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, эффективно восполняет дефицит бифидофлоры и нормализует микроэкологию кишечника в целом, сокращает в 3-4 раза сроки клинико-бактериологического выздоровления и обеспечивает более стойкий и выраженный лечебно-профилактический эффект. Сочетание бацилл и бифидобактерий в составе единого препарата позволяет дополнительно получить экономический эффект в виде сокращения расхода биомассы бифидобактерий при сохранении объема конечной продукции. Это обусловлено бифидогенным действием бацилл, стимулирующим рост и жизнеспособность бифидобактерий.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Биомассы B. bifidum 1 с концентрацией живых бифидобактерий не менее 10⁷ в 1 мл и B. subtilis 3H с концентрацией живых микробных клеток не менее 10⁹ в 1 мл смешивают в соотношении 1:1 по объему. К полученной смеси добавляют стабилизатор, разливают по 2 мл в ампулы и лиофильно высушивают. В качестве защитной среды высушивания используют сахарозо-желатиновую среду и обезжиренное молоко в концентрациях, рекомендованных для лиофилизации препарата бифидумбактерина.

Содержание живых бифидобактерий в дозе препарата составляет 10⁷, бацилл – 2-310⁹ микробных клеток.

Пример 2.

Препарат бифидоспорин получают аналогично примеру 1, за исключением того, что смешивание биомасс B.bifidum и B.subtilis производят в соотношении 1:3, уменьшая таким образом объем вводимой в препарат биомассы B.bifidum 1 в два раза.

Содержание живых бифидобактерий в дозе препарата составляет 10⁷, бацилл – 310⁹ микробных клеток.

Пример 3.

Препарат бифидоспорин получают аналогично примеру 1, за исключением того, что смешивание биомасс B.bifidum 1 и B.subtilis 3H производят в соотношении 1: 7, объем биомассы B.bifidum 1 в препарате снижается при этом в 4 раза.

Содержание живых бифидобактерий в дозе препарата составляет 10⁷, бацилл – 4-610⁹ микробных клеток.

Пример 4.

Получение препарата бифидоспорин осуществляют, как описано в примере 1, за исключением того, что смешивание биомасс B.bifidum и B.subtilis производят в соотношении 3:1, уменьшая объем биомассы бацилл в содержимом препарата вдвое.

Содержание живых бифидобактерий в дозе препарата составляет 10⁷, бацилл – 0,7-110⁹ микробных клеток.

Пример 5.

Получение препарата бифидоспорин осуществляют, как описано в примере 1, за исключением того, что биомассы B.bifidum 1 и B.subtilis 3H смешивают в соотношении 1:2 и разливают по 1,5 мл для уменьшения объема бифидобактерий в 2 раза без изменения объема B.subtilis 3H.

Содержание живых бифидобактерий в дозе препарата составляет 10⁷, бацилл – 2-310⁹ микробных клеток.

Препараты по примерам 1-5 обладают регламентируемой для бифидобактерий кислотообразующей функцией (100-120)^oT и антагонистической активностью в отношении тестовых штаммов патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, сравнимой с антагонистической активностью бактиспорина.

Комплексный препарат сохраняет положительные свойства препаратов бактиспорин и бифидумбактерин, за исключением примера 4, титр бацилл, в котором на порядок ниже регламентируемого на бактиспорин.

Преимущество комплексного препарата перед прототипом бифидумбактерином заключается в том, что аналогичный уровень специфической активности бифидобактерий в составе комплексного препарата достигается при значительном сокращении расходуемой биомассы B.bifidum 1. Это обусловлено бифидогенным действием бацилл, стимулирующим ростовые свойства и жизнеспособность бифидобактерий.

Экономическая эффективность использования биомассы бифидобактерий для приготовления комплексного препарата по сравнению с бифидумбактерином представлена в табл. 1.

Пример 6.

Эффективность предлагаемого комплексного препарата для нормализации микробиоценоза кишечника оценена при лечении 15 больных с острыми кишечными инфекциями (ОКИ) и хроническими заболеваниями желудочно-кишечного тракта (затяжное течение ОКИ, сальмонеллез, хронический колит, энтероколит, ферментопатия, дисбактериоз кишечника на фоне хронического гастрита, холецистопанкреатита, хронического гепатита) с бактериально подтвержденным дефицитом бифидофлоры. Бифидоспорин назначали по 1 дозе два раза в день в течение 10 суток. Результаты исследования микрофлоры кишечника у больных до начала и через 7-10 дней после окончания лечения представлены в табл. 2.

Из таблицы видно, что дисбактериоз был обусловлен как снижением бифидофлоры, лактобацилл, кишечной палочки, так и увеличением содержания условно-патогенной микрофлоры (УПФ).

Терапевтическое действие комплексного препарата выражалось в быстром восстановлении количества бифидобактерий и в значительном снижении количества УПФ. Показана его абсолютная безвредность и хорошая переносимость.

Источники информации

2. Бифидобактерии и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве. М., 1986.

4. Средство для лечения и профилактики дисбактериоза. Патент РФ N 2071332, 6 A 61 K 35/74, 38/43, дата публ. 10.01.97.

6. Способ получения сухого бактерийного препарата “Бифацид”. Патент РФ N 2083666, 6 C 12 N 1/20, дата публ. 10.07.97.

7. Штамм бактерий Bacillus subtilis, несущий свойство антибиотикорезистентности, используемый для получения препарата Бактиспорин /патент РФ N 2067616, C 12 N 1/20, A 61 K 35/74, публ. 10.10.96.

Формула изобретения

Биопрепарат для лечения и профилактики дисбактериозов, содержащий биомассу Bifidobacterium bifidum 1 в количестве не менее 10⁷ микробных клеток в одной дозе и стабилизатор, отличающийся тем, что он дополнительно содержит биомассу Bacillus subtilis 3H в количестве 5 10⁸ – 5 10⁹ микробных клеток в одной дозе.

РИСУНКИ

PD4A – Изменение наименования обладателя патента Российской Федерации на изобретение

Номер и год публикации бюллетеня: 21-2004

(73) Новое наименование патентообладателя:

Федеральное государственное унитарное предприятие “Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам “Микроген”

Извещение опубликовано: 27.07.2004