Патент на изобретение №2399661
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) ПРОБИОТИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ПРИРОСТА ЖИВОЙ МАССЫ ПОРОСЯТ-ОТЪЕМЫШЕЙ, И СПОСОБ ИХ КОРМЛЕНИЯ
(57) Реферат:
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к свиноводству, и может быть использовано при составлении кормовых рационов для молодняка свиней. Пробиотический препарат предназначен для увеличения прироста живой массы поросят-отъемышей на основе штамма В. subtilis ТПИ 13-07.06.21-ДЕП/ВГНКИ и штамма В. licheniformis ТПИ 11-07.06.22-ДЕП/ВГЖИ, депонированных во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ ВГНКИ). Препарат представляет собой смесь культуральных жидкостей, содержащих продукты микробного синтеза данных штаммов, с концентрацией микробных клеток 5 млрд м.к./см3, в объемном соотношении указанных штаммов 1:1. В смесь культуральных жидкостей внесено равное по массе количество смеси отрубей и гороховой муки, взятых в соотношении 1:1. Препарат высушивают до влажности (5±1)%. Использование препарата позволяет повысить прирост живой массы поросят-отъемышей. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к животноводству, а именно к свиноводству, и может быть использовано при составлении кормовых рационов для молодняка свиней. Свиноводство всегда считалось не только экономически выгодной, но и высокодоходной отраслью, что в значительной степени определяется важными биологическими особенностями организма свиней, которые выгодно отличаются от основных характеристик сельскохозяйственных животных других видов. Здоровые свиньи обладают высокой конверсией корма и скоростью роста. При нарушении пищеварения в результате некачественного кормления животные быстро теряют в весе, т.к. ухудшается всасывание полезных веществ и различных компонентов корма, а вследствие этого изменяется микробный биосинтез желудочно-кишечного тракта, особенно у молодняка свиней в период отъема. В желудке свиней происходит в основном ферментативное расщепление пищи. Однако важную роль в пищеварении свиней играют нормальная микрофлора желудочно-кишечного тракта. Бактерии рода Bacillus являются представителями нормального микробиоценоза желудочно-кишечного тракта свиней и при их недостатке или отсутствии могут развиваться дисбактериозы. Отъем – это наиболее критическая стадия в жизни свиньи с момента ее рождения до убоя. В период отъема поросята остаются без материнского молока и должны выживать на том корме, который им предлагается. Корм для поросят-отъемышей должен быть свежим, содержать молочный протеин или рыбную муку в комбинации с источниками растительного белка. Пробиотики в питании свиней – это микробиологические кормовые добавки, содержащие живые культуры полезных бактерий, которые благотворно влияют на животное, восстанавливая микробиологический баланс в кишечнике. Известен способ кормления свиней, включающий введение в основной рацион кормовой добавки из отходов производства микробиологических препаратов, отличающийся тем, что в качестве кормовой добавки используют фугат – технологический продукт – отход, образующийся при производстве пробиотика из бацилл “Биоспорин”, содержащего бактериальные культуры Bacillus subtilis ВКПМВ-2335, Bacillus licheniformis ВКПМВ-2336 (RU C2 2236147, 20.09.2004). Использование фугата в качестве кормовой добавки в животноводстве способствует стабилизации нормальной микрофлоры кишечника, вытеснению патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, обеспечивает защиту от большой группы вирусов за счет стимуляции местного иммунитета, но недостаточно способствует приросту массы тела сельскохозяйственных животных. Известен также способ кормления свиней, включающий введение в рацион кормовой добавки, содержащей глауконит и пробиотик «Биоспорин». (RU 2319391 C2, 20.03.2008). Использование глауконита в качестве кормовой добавки способствует повышению защитных сил и естественной резистентности организма свиней, но недостаточно способствует приросту живой массы, кроме того, производится кормовая добавка из сырья, добываемого в определенном месте (Кунашакском районе Челябинской области), что оказывает влияние на ее доступность и стоимость. Наиболее близким является способ кормления поросят, включающий введение в комбикорм сухой пивной дробины, отличающийся тем, что перед введением в комбикорм сухую пивную дробину обогащают пробиотиком «Пробиоцел» с содержанием Bacillus subtilis 8130 не менее 2,5·107 КОЕ в 1 г дробины и вносят обогащенную дробину в комбикорм поросятам с 60- до 108-дневного возраста 2 раза в день в количестве 6% от массы комбикорма (RU 2284703 C1, 21.03.2005). Однако недостатком является трудность приготовления препарата, так как свежая пивная дробина – скоропортящийся продукт, поэтому она может быть использована только вблизи места производства. Наиболее удобна для транспортирования сухая пивная дробина, однако ее кормовая ценность снижается после высушивания до 20-25%. Технический результат данного изобретения заключается в повышении прироста живой массы поросят-отъемышей за счет использования нового пробиотического препарата на основе штамма Bacillus subtilis ТПИ 13-07.06.21-ДЕП/ВГНКИ и штамма Bacillus licheniformis ТПИ 11-07.06.22-ДЕП/ВГНКИ, депонированных во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ ВГНКИ). Препарат представляет собой смесь культуральных жидкостей штаммов, содержащих продукты микробного синтеза данных штаммов с концентрацией микробных клеток 5 млрд м.к./см3 в объемном соотношении 1:1, в которую внесена равная по массе смесь отрубей и гороховой муки, взятых в соотношении 1:1, препарат высушен до влажности (5±1)%. Указанный технический результат обеспечивается также описываемым способом кормления поросят-отъемышей, включающим введение в рацион вышеуказанного пробиотического препарата из расчета 5-7,5 г на 1 голову. Обычно данный пробиотический препарат вводят поросятам-отъемышам в составе полнорационного комбикорма. Для приготовления пробиотика используют штаммы В. subtilis ТПИ 13-07.06.21-ДЕП/ВГНКИ и B. licheniformis ТПИ 11-07.06.22-ДЕП/ВГНКИ, депонированные во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ ВГНКИ), (А.П.Лиморенко, П.Г.Васильев, А.В Вишняков, Т.Н.Грязнева “Изучение влияния посевной дозы на основные показатели нативной культуры при глубинном выращивании B. subtilis ТПИ 13 и B. licheniformis ТПИ 11 в питательных средах на основе солянокислого гидролизата соевой муки”, журнал Ветеринарная медицина, 2007, B. subtilis ТПИ 13 – грамположительные аэробные спорообразующие палочки, продуцирующие каталазу. На МПА и сусло-агаре с добавлением 50 мкг/мл канамицина образуют матовые колонии телесного или сероватого цвета. В мазках из колоний, выросших через 24-48 ч на картофельном агаре, обнаруживаются палочки размером 2,6×0,7 мкм, содержащие центрально расположенные споры овальной формы. Колонии старых культур могут приобретать черную окраску. Имеют плазмидную и хромосомную устойчивость к канамицину (50 мкг/мл). На МПБ культура образует пленку. Мочевину не гидролизует. Дает положительную реакцию Фогес-Проскауэра. Растет в присутствии 7% NaCl. Гидролизует крахмал и казеин, разжижает желатину. Ферментирует глюкозу, арабинозу, ксилозу, маннит с образованием кислоты без газа. Не нуждается для роста в аминокислотах и витаминах. Не патогенен. Чувствителен к видоспецифическим бактериофагам. Коагулазной и лецитиназной активностью не обладает. Антагонистическая активность (зоны угнетения роста тест-культур) составляет в отношении S. sonnei – 13±1 мм; S. typhimurimn – 14±2 мм; S. aureus – 23±2 мм; С. albicans – 20±2 мм. Bacillus licheniformis ТПИ 11 – грамположительные спорообразующие факультативные аэробные палочки. Подвижны. На МПА, сусло-агаре образуют матовые колонии бежевого цвета с грубой поверхностью. В мазках из колоний, выросших на МПА, через 18 ч обнаруживаются палочки размером 2,5×0,6 мкм, содержащие споры овальной формы, которые располагаются центрально. На МПБ культура образует каталазу. Мочевину не гидролизует. Дает положительную реакцию Фогес-Проскауэра. Растет в присутствии 7% NaCl. Гидролизует крахмал и казеин, медленно разжижает желатину. Ферментирует глюкозу, лактозу и маннит с образованием кислоты, редуцирует нитраты, в анаэробных условиях образуя из них газ. Обладает коагулазной и летициназной активностью. Чувствителен к видоспецифическим бактериофагам. Не патогенен. Угнетает рост тест-штаммов S. sonnei – 16±2 мм; S. typhimurimn – 12±2 мм; S. aureus – 26±2 мм; С. albicans – 25±2 мм. Пробиотик получают следующим образом. Первой технологической стадией приготовления является выращивание исходных культур бацилл В. subtilis ТПИ 13 и B. licheniformis ТПИ 11 в пробирках на скошенном агаре. Далее посевной материал выращивают на плотной питательной среде Гаузе, в биологических матрацах объемом 20 дм3 при температуре (37±1)°C в течение 5-7 суток. Ежедневно, начиная с 3 суток культивирования, определяют типичность (гетерогенность) роста и уровень спорообразования бацилл путем микроскопического анализа мазков из биомассы бацилл, окрашенных по Цилю-Нильсену. Через 6-7 суток культивирования В. subtilis ТПИ 13 и B. licheniformis ТПИ 11 оценивают завершенность спорообразования. Второй технологической стадией приготовления является перенос культур бацилл в биореактор КМ-0,1, где происходит приготовление посевного материала в жидких средах ПС-
Принятые для КМ-0,1 параметры культивирования (коэффициент аэрации 0,7 дм3/мин, продолжительность культивирования 24 ч – для B. subtilis ТПИ 13 и 0,4 дм /мин и 26 ч – для B. licheniformis ТПИ 11 соответственно, а также число оборотов мешалки – 500 об/мин) являются достаточными для обеспечения полноценного роста и спорообразования бацилл. Приготовленные посевные культуры B. subtilis ТПИ 13 и B. lichemiformis ТПИ 11 должны иметь следующие показатели: – содержание клеток по счету в камере Горяева – не менее 15 млрд/см3; – содержание живых клеток по методу БК – не менее 10 млрд/см3; – содержание зрелых спор – не менее 80%. Следующая стадия технологического процесса – культивирование бацилл в биореакторах БИОР-0,1. Посевной материал вносят в биореактор из расчета 1 млн живых спор на 1,0 см3 питательной среды. Параметры и режимы глубинного культивирования бацилл представлены в таблице 2.
Основанием для окончания культивирования является накопление биомассы в культуральной жидкости не менее 5 млрд м.к/см3. Следующая стадия производства – приготовление в гомогенизаторе смеси культуральных жидкостей B. subtilis ТПИ 13 и B. lichemiformis ТПИ 11, содержащих продукты микробного синтеза бацилл и биомассу бацилл с концентрацей микробных клеток 5 млрд м.к./см3 в объемном соотношении штаммов 1:1. Затем в гомогенизатор вносится равная по массе смесь пшеничных отрубей (ГОСТ 7169-66) и гороховой муки, взятых в соотношении 1:1. Гороховая мука играет роль источника незаменимых аминокислот. Перемешивание проводится при частоте вращения мешалки 1000 об/мин. Полученная масса высушивается контактно-сорбционным методом в сушильной установке ЭВЗ с кипящим слоем в течении 3 ч при температуре 40°C и 3 ч – при температуре 60°C до влажности (5±1)%. Фасовка пробиотика осуществляется в пакеты из полимерных материалов по 50 г. Изобретение поясняется следующими примерами: Пример 1. Получение пробиотика 1. Выращивание культур B. subtilis ТПИ 13 и B. licheniformis ТПИ 11 в пробирках на скошенном агаре. 2. Выращивание посевного материала на плотной питательной среде Гаузе в биологических матрицах объемом 20 дм3 при температуре (37±1)°C в течение 5-7 суток. 3. Выращивание посевного материала в биореакторе КМ-0,1 в жидких средах ПС- 4. Культивирование бацилл в биореакторах БИОР-0,1 (коэффициент аэрации 0,7 дм3/мин, продолжительность культивирования 24 ч – для B. subtilis ТПИ 13 и 0,4 дм3/мин и 28 ч – для B. licheniformis ТПИ 11 соответственно, число оборотов мешалки – 530 об/мин для В. subtilis ТПИ 13 и 320 об/мин для B. licheniformis ТПИ 11). Посевной материал вносят в биореактор из расчета 1 млн живых спор на 1,0 см3 питательной среды. 5. Приготовление в гомогенизаторе смеси культуральных жидкостей B. subtilis ТПИ 13 и B. lichemiformis ТПИ 11, содержащих продукты микробного синтеза бацилл и биомассу бацилл в соотношении концентраций микробных клеток 1:1. Затем в гомогенизатор вносится равная по массе смесь пшеничных отрубей (ГОСТ 7169-66) и гороховой муки, взятых в соотношении 1:1. Перемешивание проводится при частоте вращения мешалки 1000 об/мин. 6. Высушивание полученной массы контактно-сорбционным методом в сушильной установке ЭВЗ с кипящим слоем в течение 3 ч при температуре 40°C и 3 ч – при температуре 60°C до влажности (5±1)%. Пример 2 Для кормления поросят-отъемышей пробиотик вводят в рацион из расчетa 5-7,5 г на 1 животное, что обеспечивает эффективное увеличение приростов живой массы у поросят-отъемышей и подтверждается следующим примером. При использовании пробиотика для откармливаемых свиней опытных групп был получен дополнительный прирост живой массы 9,2 кг в среднем на 1 голову (таблица 3).
Прирост общей живой массы показан на чертеже. Установлено, что в первой опытной группе поросят-отъемышей прирост по сравнению с контролем составляет 9,2 кг, а во второй группе – 11,1 кг. Таким образом, эффективность использования комбикормов и интенсивность откорма поросят-отъемышей была значительно повышена при использовании пробиотика.
Формула изобретения
1. Пробиотический препарат, предназначенный для увеличения прироста живой массы поросят-отъемышей, на основе штамма В. subtilis ТПИ 13-07.06.21-ДЕП/ВГНКИ и штамма В. licheniformis ТПИ 11-07.06.22-ДЕП/ВГНКИ, депонированных во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ ВГНКИ), представляющий собой смесь культуральных жидкостей, содержащих продукты микробного синтеза данных штаммов, с концентрацией микробных клеток 5 млрд.м.к/см3, в объемном соотношении указанных штаммов 1:1, в которую внесено равное по массе количество смеси отрубей и гороховой муки, взятых в соотношении 1:1, высушенный до влажности (5±1)%. 2. Способ кормления поросят-отъемышей, включающий введение в рацион пробиотического препарата по п.1 из расчета 5-7,5 г на 1 голову. 3. Способ по п.2, отличающийся тем, что пробиотический препарат вводят поросятам-отъемышам в составе полнорационного комбикорма.
РИСУНКИ
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1, с.9).