Патент на изобретение №2399053

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПЕРСТНЕВИДНО-КЛЕТОЧНОГО РАКА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии. Для диагностики перстневидно-клеточного рака в эксперименте проводят оценку хемилюминесценции (ХЛ) цельной разведенной крови на 10 сутки после введения гомогената опухоли РС-1 лабораторному животному. Измеряют интенсивность I-го – I₁ и II-го – I₂ пиков, вычисляют модуль их разности (|I|). Если |I| выше 400 условных единиц ХЛ, то это свидетельствует о развитии перстневидно-клеточного рака в эксперименте. Способ упрощает диагностику перстневидно-клеточного рака в эксперименте. 2 табл.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в экспериментальной медицине для диагностики злокачественных опухолей.

Известен способ диагностики злокачественной опухоли в эксперименте, например перстневидно-клеточного рака (РС-I), при котором животное декапитируют, проводят гистологическое исследование опухоли. Материал фиксируют 10% раствором нейтрального формалина, заливают в парафин, приготавливают ультратонкие срезы и окрашивают гематоксилином и эозином. Затем под микроскопом наблюдают признаки перстневидно-клеточного рака, который представлен недифференцированными однотипными клетками с резко выраженной способностью образовывать муцино-мукоид (слизь), не способными формировать железистые структуры (Руководство по патологоанатомической диагностике опухолей человека / Под ред. Н.А.Краевского, А.В.Смольянинова, Д.С.Саркисова, 3-е издание. – М.: Медицина, 1982, 512 с., с.170-171).

Метод достаточно трудоемок, требует выведения животного из эксперимента, что не позволяет проводить динамические наблюдения, а также требует рутинных гистологических исследований и квалифицированного специалиста – морфолога.

Задачей данного изобретения является объективизация способа диагностики злокачественной опухоли в эксперименте.

Сущность предложенного изобретения состоит в том, что проводят оценку хемилюминесценции (ХЛ) цельной разведенной крови лабораторного животного, измеряют интенсивность I-го – I₁ и II-го – I₂ пиков и вычисляют модуль их разности – |I|, и если |I| выше 400 условных единиц (у.е.) ХЛ, то это свидетельствует о развитии перстневидно-клеточного рака.

Оценка кинетики ХЛ цельной разведенной крови позволяет определить интенсивность биохимических реакций, сопровождающих жизнедеятельность клеток крови в условии их кооперативного взаимодействия. Известно, что рост опухоли сопровождается изменением реактивности лейкоцитов периферической крови, которые вносят основной вклад в процесс ХЛ цельной крови.

Пример. Крысе линии Vistar моделировали опухолевый процесс, для чего под кожу левой задней конечности вводили гомогенат опухоли PC-I. На 10 сутки под эфирным наркозом у животного производили забор крови из хвостовой вены. Полученную кровь разводили в соотношении 60 мкл цельной гепаринизированной крови на 400 мкл р-ра Хенкса и 100 мкл люминола. Затем исследовали кинетику ХЛ на биохемилюминесцентном анализаторе БЛМ 3606М-01 в течение 6 часов.

При анализе полученной кинетики ХЛ вычисляли значения интенсивности ХЛ I-го – I₁=243 у.е. и II-го – I₂=1074 y.e. пиков. Затем рассчитывали |I|=I₁-I₂=831 у.е. Так как 831 у.е. больше 400 у.е., то можно говорить о развитии перстневидно-клеточного рака.

Далее животное декапитировали, опухоль забирали на гистологическое исследование. Методом микроскопии выявили наличие признаков опухоли РС-I: наличие однотипных диссоциированных опухолевых клеток со слабо выраженными признаками формирования альвеолярных структур, которые лежат хаотично, солидно, разделены слизью, что подтверждало данные исследования.

Способ апробирован на 5 крысах линии Vistar массой 180-200 г. Животным моделировали опухолевый процесс путем введения гомогената опухоли РС-I под кожу левой задней конечности. На 10 сутки у экспериментальных животных развивалась опухоль. У всех животных по описанной выше методике рассчитывали |I|, данные сведены в таблицу 1.

У всех крыс значение |I| было выше 400 у.е., а при гистологическом исследовании выявлялись признаки опухоли РС-I. Среднегрупповое значение |I| у животных с привитой опухолью на 10 сутки составило 475,8±745,1 у.е., а у интактных животных – 240,38±106,11 у.е. (таблица 2).

Таким образом, предложенный способ диагностики перстневидно-клеточного рака в эксперименте является простым, объективным, надежным и может быть широко использован в экспериментальной медицине для прижизненной диагностики данного онкологического процесса.

Таблица 1
крысы	|I| у животных с привитой опухолью на 10 сутки	|I| у интактных животных
1	800	67
2	1285	194
3	831	179
4	543	257
5	2420	396
6		332
7		319
8		179

Таблица 2
	Животные с привитой опухолью на 10 сутки (n=5)	Интактные животные (n=8)
Среднегрупповое значение |I| (M±m)	1175,8±745,1	240,38±106,11

Формула изобретения

Способ диагностики перстневидно-клеточного рака в эксперименте, отличающийся тем, что после введения гомогената опухоли РС-1 лабораторному животному проводят оценку хемилюминесценции (ХЛ) цельной разведенной крови на 10 сутки после введения гомогената, при этом измеряют интенсивность I-го – I₁ и II-го – I₂ пиков, вычисляют модуль их разности (|I|), и если |I| выше 400 условных единиц ХЛ, то это свидетельствует о развитии перстневидно-клеточного рака в эксперименте.