Патент на изобретение №2398761
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩИЕ АНКСИОЛИТИЧЕСКИМИ СВОЙСТВАМИ
(57) Реферат:
Изобретение относится к медицине, а именно к новым аминокислотным производным 3,4-диметоксифенилэтиламина 1-4, обладающим анксиолитической активностью и соответствующим общей формуле В формуле R представляет собой НХ представляет собой (СООН)2 (1-4); Y=1 (1,2); Y=3 (3); Y=0 (4). 1 з.п. ф-лы, 6 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологическим препаратам, предназначенным для лечения различных невротических и пограничных состояний, сопровождающихся повышенным уровнем тревожности. Оно представляет собой аминокислотные производные 3,4-диметоксидофамина, обладающие анксиолитической активностью. Препараты синтетического происхождения, ранее для этих целей не используемые, могут найти применение в лечении и/или профилактике тревожных состояний. В настоящее время на рынке нейротропных препаратов существует огромное число наименований лекарственных веществ, используемых для лечения аффективных расстройств, сопровождающихся страхом и беспокойством. Большинство этих препаратов являются производными бензодиазепина и имеют ряд побочных эффектов и противопоказаний. Синтезированные по изобретению препараты не являются такими производными и проявляют более выраженный анксиолитический эффект. Они могут существенно расширить ассортимент анксиолитических препаратов. Для синтеза была использована метилированная форма дофамина – 3,4-диметоксифенилэтиламин. Известно, что дофамин в чистом виде не проникает через гематоэнцефалический барьер. На сегодняшний день дофамин используют при сердечно-сосудистой недостаточности (при кардиогенном шоке), нефросклерозе, острой почечной недостаточности, отравлении барбитуратами (Громова Э.Г. Справочник по лекарственным средствам с рецептурой, СПб, 2002, с.190-191). Общеизвестно, что для лечения различных неврозов, невротических состояний, сопровождающихся тревогой и беспокойством, применяют хлозепид (элениум) – производное бензадиазепина. Однако его длительное использование может вызвать лекарственную зависимость, аллергические реакции, а также нарушение функций печени и почек. Кроме того, элениум нельзя назначать лицам, которым в процессе работы требуется точная координация движений, быстрая реакция (Машковский М.Д. Лекарственные средства, том 1, М., 2002, с.74-87). Также в настоящее время в медицинской практике используют мепротан (производное карбаминового эфира замещенного пропандиола), активность которого несколько ниже, чем у бензодиазепинов. И он имеет те же противопоказания и побочные эффекты, что и элениум (Машковский М.Д. Лекарственные средства, том 1, М., 2002, с.74-87). Среди атипичных бензодиазепинов определенный интерес представляет тофизопам (грандаксин). Данный препарат не вызывает сонливости и не оказывает миорелаксирующего и противосу дорожного действия. Отсутствие седативного эффекта позволяет использовать препарат днем. Однако есть данные о возможном развитии привыкания, аллергических реакций и диспептических расстройств. Водителям и лицам, работа которых требует быстрой умственной и физической реакции, грандаксин назначается с осторожностью (Машковский М.Д. Лекарственные средства, том 1, М., 2002, с.74-87). Этот фармакологический препарат авторами выбран за прототип. Задачей данного изобретения являлось создание препарата, обладающего выраженными анксиолитическими свойствами и не вызывающего привыкания и сонливости, а также с отсутствием у него нежелательных побочных реакций организма. Цель была достигнута с помощью синтетических препаратов на основе 3,4-диметоксифенилэтиламина (3,4-диметоксидофамина) и ряда аминокислот. Синтезировано и исследовано пять препаратов, из них наиболее активными являются оксалаты N-L-аланил-3,4-диметоксифенилэтиламина моногидрата (1) и N-L-тирозил-3,4-диметоксифенилэтиламина моногидрата (2). Были синтезированы следующие новые аминокислотные производные дофамина: N-L-аланил-3,4-диметоксифенилэтиламин (1), N-L-тирозил-3,4-диметоксифенилэтиламин (2), N-L-триптофанил-3,4-диметоксифенилэтиламин (3), N- Общая формула веществ:
где R:
HX: (COOH)2 (1, 2, 3,4), Y=1 (1,2); Y=3 (3); Y=0 (4, 5). Эти вещества получали взаимодействием активированных эфиров (n-нитрофенилового или TV-гидроксисукцинимидного) N-замещенной аминокислоты с хлоргидратом 3,4-диметоксифенилэтиламина в присутствии основания (триэтиламина) при температуре 17-21°С в течение 5-24 часов. Выделение и очистку продукта реакции, снятие защитных групп и перевод в соль (оксалат или хлоргидрат) проводили по известным стандартным методикам: путем промывания этилацетатных растворов водными растворами хлористого натрия, бикарбоната натрия, серной кислоты удаляли непрореагировавшие компоненты; проводили перекристаллизацию из подходящего растворителя. Защитные группы удаляли гидрированием на катализаторе палладий на активированном угле (Гершкович А.А., Кибирев В.К. Синтез пептидов. Реагенты и методы, Киев, 1987, 264 с.). Индивидуальность продуктов реакции подтверждали тонкослойной хроматографией в системе хлороформ-метанол (9:1). Характеристики полученных соединений приведены в таблице 1. Для синтезированных соединений были определены LD50 при остром введении. Расчет проводили с помощью метода Першина: LD50= Таким образом, при средней терапевтической дозе 1,0 мг/кг терапевтический индекс равен 153,0 (1, 2, 3, 4) и 760,0 (5), что свидетельствует о низкой токсичности соединений.
В дальнейшем проводили оценку анксиолитического и противосудорожного действия синтезированных соединений. В результате оценки анксиолитического действия веществ обнаружено, что при внутрибрюшинном (в/б) введении в разных дозах препараты проявляют биологическую активность. Так, соединение 1 (1,0 мг/кг, в/б, однократно), 2 (0,1 мг/кг, в/б, хронически), 3 (1,0 мг/кг, в/б, хронически), 4 (1,0 мг/кг, в/б, хронически), 5 (10,0 мг/кг, в/б, однократно) увеличивают время пребывания животных в открытых рукавах лабиринта по сравнению и с контрольными животными, получавшими физиологический раствор, и с препаратом сравнения грандаксином (0,04 мг/кг), что подтверждает наличие у веществ 1, 2, 3, 4, 5 анксиолитического эффекта, превышающего эффект грандаксина (таблица 3, таблица 4). Оценка уровня тревожности животных на фоне введения исследуемых соединений и грандаксина (препарат сравнения) проводилась по выраженности горизонтальной, вертикальной и исследовательской активности, а также эмоциональной реакции у крыс в тесте «открытое поле», когда животных после введения препарата помещают в центр освещенной площадки на 3 минуты и автоматически с помощью программно-аппаратного комплекса фиксируют параметры, характеризующие поведение крысы. Установлено, что вещество 1 (1,0 мг/кг, в/б, однократно), 2 (0,1 мг/кг, в/б, хронически), 3 (1,0 мг/кг, в/б, хронически), 4 (1,0 мг/кг, в/б, хронически), 5 (10,0 мг/кг, в/б, однократно) достоверно уменьшают горизонтальную, вертикальную активность и выраженность эмоциональной составляющей по сравнению с грандаксином (0,04 мг/кг), что свидетельствует о более выраженном снижении уровня тревожности у крыс по сравнению с протопипом (таблица 5, таблица 6). Примеры выполнения изобретения. Пример I. Синтез оксалата N,L-тирозил-3,4-диметоксифенилэтиламина (2). a) Смесь 3,07 г (7,04 мМ) n-нитрофенилового эфира N-бензилоксикарбонил-О-бензил-L-тирозина, 1,53 г (7,01 мМ) хлоргидрата 3,4-диметокисфенилэтиламина и 0,99 мл триэтиламина в 10 мл диметилформамида перемешивали в течение 5 часов при температуре 18-20°С и оставляли на ночь при той же температуре. Массу разбавляли этилацетатом (100 мл) и водой (20 мл), слои разделяли и органический слой промывали последовательно насыщенным раствором хлористого натрия (2×20 мл), 1М раствором кислоты серной (3×20 мл), насыщенным раствором хлористого натрия (2×20 мл), насыщенным раствором натрия бикарбоната (3×20 мл), насыщенным раствором хлористого натрия (3×20 мл), высушивали натрия сульфатом и упаривали. Остаток обрабатывали этанолом, кристаллы отфильтровывали, промывали этанолом и высушивали. После перекристаллизации из этанола получали 2,6 г (77,4% от теоретического) N-(N-бензилоксикарбонил-O-бензил-L-тирозил)-3,4-диметоксифенилэтиламина, Т.пл. 160-162°С. Продукт индивидуален в системе хлороформ-метанол (9:1). b) К суспензии 1,7 г (3,56 мМ) N-(N-бензилоксикарбонил-О-бензил-L-тирозил)-3,4-диметоксифенилэтиламина в 25 мл этанола добавляли 0,2 г катализатора (палладий на активированном угле) и при перемешивании пропускали ток водорода в течение 7 часов. Катализатор отфильтровывали, к раствору добавляли 0,46 г дигидрата щавелевой кислоты и растворитель отгоняли в вакууме. Остаток дважды перекристаллизовывали из ацетонитрила. Выход 0,72 г (57,7% от теоретического). Продукт индивидуален в системе хлороформ-метанол (9:1). Т.пл. и элементный анализ представлены в таблице 2. Аналогично примеру I получены соединения 1, 3, 4, 5. Пример II. Доклинические исследования проводили в соответствии с Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (под ред. Фисенко В.П. М., 2000, 398 с.). Все животные была разделены на группы, по 10 особей в каждой. Исследуемые вещества вводили внутрибрюшинно в дозах 0,1 мг/кг, 1,0 мг/кг и 10,0 мг/кг. Контрольная группа животных получала физиологический раствор в эквивалентном объеме. Препарат сравнения грандаксин вводили внутрибрюшинно в дозе 0,04 мг/кг. Все препараты вводили однократно и хронически в течение 10 дней. Тестирование проводили в первой половине дня (10-13 ч.). Определение острой токсичности Для определения острой токсичности фармакологические соединения испытывали в следующих дозах: 50,0, 100,0, 200,0, 500,0, 700,0, 1000,0 мг/кг. Препараты вводились внутрибрюшинно в объеме 0,1-0,5 мл со скоростью 0,1 мл/сек. Оценка физиологического состояния животных проводилась в течение 48 часов. По окончании времени тестирования определяли процент погибших животных. Обработку полученных результатов проводили при помощи расчетного метода Першина по формуле: ЛД50= Тест приподнятый «крестообразный» лабиринт Уровень тревожности у животных определяли с использованием общепринятого теста приподнятого «крестообразного» лабиринта (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, под ред. Фисенко В.П. М., 2000, с.126-130). Лабиринт состоял из двух открытых и двух закрытых рукавов, расположенных крестообразно и приподнятых над полом на 50 см. Ширина рукавов составляла 10 см при длине 45 см, высота стенок в закрытых рукавах составляла 45 см. Сверху все рукава были открыты. В месте перпендикулярного пересечения рукавов находилась площадка размером 10×10 см, на которую сажали тестируемую крысу. Поведение животных регистрировали в течение 5 мин и оценивали следующие параметры: время нахождения в открытых и закрытых рукавах, число заходов в открытые и закрытые рукава. Тест «Открытое поле» Помещение животного в новую обстановку (ярко освещенная площадка, которая значительно больше, чем клетка, в которой живет крыса) приводит к возникновению изменений в характере поведения (Буреш Я. и соавт. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. М., 1991, 339 с.). Поведение животных в тесте “открытое поле” изучали по модифицированной методике Е.С.Петрова и соавторов (1982). “Открытое поле” представляло собой квадратную площадку размером 80 см × 80 см и боковыми стенками высотой 36 см. Пол площадки был разделен на 16 равных квадратов размером 19,5 см × 19,5 см. Площадка равномерно освещалась источником света. Животное помещали в центр “открытого поля” на 3 мин. Контроль изменений в поведении животного осуществлялся автоматически с помощью программно-аппаратного комплекса “Биологическая установка “открытое поле” (Государственный Электротехнический Университет им. Д.И.Ульянова, Санкт-Петербург). Регистрировали следующие параметры: двигательную горизонтальную активность (“перемещение”) и двигательную вертикальную активность (“вставание”); исследовательскую активность (исследование крысой круглых сквозных отверстий, расположенных на полу); груминговые реакции (вычесывание, вылизывание, умывание и др.); эмоциональные реакции (дефекация и уринация). Результаты испытаний синтезированных аминокислотных производных дофамина представлены в таблицах 1, 2, 3, 4, 5, 6. Таблица 1. Полученные экспериментальные данные позволяют сделать вывод о низкой токсичности соединений 1, 2, 3, 4, 5. Таблица 3. Из испытаний соединений 1, 2, 3, 4, 5 и препарата сравнения видно, что при однократном введении наиболее выраженный анксиолитический эффект оказывают вещества 1 и 5. Таблица 4. Результаты испытаний веществ 1, 2, 3, 4, 5 и прототипа свидетельствуют о том, что в хроническом эксперименте более выраженным противотревожным действием обладают соединения 2, 3, 4. Таблица 5. Из испытаний соединений 1, 2, 3, 4, 5 и препарата сравнения видно, что преимуществом при однократном введении обладают вещества 1, 3, 4, 5. Таблица 6. Экспериментальные данные свидетельствуют о том, что при хроническом введении преимуществом обладают вещества 2, 3, 4, 5.
Формула изобретения
1. Аминокислотные производные 3,4-диметоксифенилэтиламина 1-4 общей формулы 2. Аминокислотные производные по п.1, характеризующиеся тем, что обладают анксиолитической активностью.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
-аланил-3,4-диметоксифенилэтиламин (4) и N-глицил-3,4-диметоксифенилэтиламин (5). Они были выделены: 1 и 2 в виде оксалатов моногидратов, 3 в виде оксалата тригидрата, 4 в виде оксалата и 5 в виде хлоргидрата. Структура полученных соединений представлена ниже.
(a+b)·(m-n)/200.
0,05
