Патент на изобретение №2398515
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ ДЛЯ МОРФОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ И УСТРОЙСТВО ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
(57) Реферат:
Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической лабораторной диагностике. Для морфологического исследования получают фацию биологической жидкости с использованием устройства, создающего радиальное магнитное поле с величиной магнитной индукции 0,06 Тл и градиентом поля 0,01 Тл/мм. Предварительно биологическую жидкость центрифугируют, надосадочную жидкость наносят в объеме 0,004 мл на предметное стекло. Стекло с каплей биологической жидкости устанавливают таким образом, чтобы центр высушиваемой капли проекционно соответствовал вершине конусовидного элемента устройства. Высушивают каплю биологической жидкости в течение не менее 12 часов. Устройство для подготовки биологической жидкости, включающее источник магнитного поля, выполнено в виде цилиндрической стальной платформы, в центре которой закреплен конусовидный элемент. При этом источник магнитного поля выполнен в виде кольцевого магнита, расположенного по краю платформы и создающего магнитное поле с величиной магнитной индукции 0,06 Тл и градиентом 0,01 Тл/мм. 2 н.п. ф-лы, 9 ил.
Изобретение относится к области медицины, а именно клинической лабораторной диагностике различных заболеваний, и может быть использовано для разработки новых методов исследования биологических жидкостей.
Недостатки прототипа: носит описательный характер, субъективен, малопригоден для последующего анализа с использованием высокотехнологичных и информативных методов исследования (использование сканирующей электронной микроскопии, рентгеноспектрального и рентгеноструктурного анализа, компьютерной обработки материала с применением морфометрических программ). Технический результат: объективизация учета результатов благодаря упорядочению структуры фации и возможности более эффективного использования высокотехнологичных методов исследования. Указанные задачи достигаются путем получения фации биологической жидкости в магнитном поле, которое создает специальное устройство. Применение постоянного радиального магнитного поля при драинге БЖ позволяет получить более упорядоченную структуру фаций, что дает возможность применять инструментальные и математические методы обработки информации. Способ и устройство для его осуществления изображены на схеме, где на фиг.1 дан общий вид устройства сбоку в разрезе; на фиг.2, 4, 6, 8 изображены фации желчи и внутрибрюшного экссудата, полученные по способу-прототипу; на фиг.3, 5, 7, 9 – фации желчи и внутрибрюшного экссудата, полученные с помощью устройства, создающего магнитное поле. Устройство состоит из цилиндрической стальной платформы 1, в центре которой закреплен конусовидный элемент 2. По краям стальной платформы 1 расположен кольцевой магнит 3. Способ осуществляют следующим образом: материал (БЖ – желчь, внутрибрюшной экссудат, сыворотка крови, лимфа, ликвор, секреты эндокринных и экзокринных желез, внутриклеточная и внеклеточная жидкость) забирают в пробирку типа Эппиндорф, центрифугируют со скоростью 8000 оборотов в минуту в течение 10 минут, затем супернатант (надосадочную жидкость) забирают автоматическим дозатором и наносят в объеме 0,004 мл на предварительно обезжиренное в смеси Никифорова предметное стекло. Для получения фации предметное стекло 4 с каплей биологической жидкости 5 устанавливают на устройство (Фиг.1), позволяющее получить радиальное магнитное поле, силовые линии которого направлены от центрального конусовидного элемента по радиусам к внешнему кольцевому магниту 3, установленному на цилиндрической стальной платформе 1. Необходимо, чтобы центр высушиваемой капли 5 проекционно соответствовал вершине конусовидного элемента 2. Величина магнитной индукции постоянного магнитного поля в предлагаемой системе в зоне локализации высушиваемой капли составляет 0.06 Тл. Градиент поля составляет 0.01 Тл/мм. Продолжительность периода высыхания капли составляет не менее 12 часов. Полученный образец фотографируют с использованием бинокулярной насадки, адаптированной для цифровой фотосъемки и соединенной с персональным компьютером. При анализе полученных изображений оценивают разделение фации БЖ на центральную, промежуточную и периферическую зоны, их ширину, однородность, расположение и форму кристаллов. Фации биологической жидкости, полученные при драинге в магнитном поле, имеют четкие границы разделения зон. Нет смешения элементов в краевой и периферической зонах. Анализ кристаллов центральной зоны свидетельствует об их четкой структуре, отсутствию нетипичных ответвлений, увеличении количества центров кристаллообразования. Примеры практического применения. Пример 1 Пациентка К., 67 лет. Диагноз: ЖКБ. Стеноз БДС 3ст. Механическая желтуха. Хронический калькулезный холецистит. 14.05.2008 г – оперирована: MAS-холецистэктомия, трансдуоденальная папиллосфинктеротомия, холедохостомия по Холстеду. Во время операции получена холедохеальная желчь. Желчь поместили в пробирку и центрифугировали в течение 10 минут с частотой 8000 оборотов в минуту. После центрифугирования надосадочную жидкость набрали дозатором и нанесли на предметное стекло в виде капли объемом 4 мкл. Предметное стекло предварительно было установлено на предлагаемое устройство. Одновременно приготовлена фация желчи методом стандартной клиновидной дегидратации (способ-прототип). Препараты изучали под микроскопом через 12 часов после их приготовления. Вид полученных фаций желчи представлен на фиг.2, 3. Препарат, полученный с помощью устройства (фиг.3), имеет четкую структурную организацию. Видны зоны и структурные компоненты, характерные для морфологической картины биологической жидкости после клиновидной дегидратации, причем они более упорядочены в сравнении с фацией, полученной обычным способом-прототипом (рис.2). Краевая зона фаций (увеличение ×4) представлена на фиг.4, 5. На кристаллограмме, полученной стандартным способом-прототипом, промежуточная зона не имеет четких границ, элементы центральной зоны прослеживаются до периферии включительно (фиг.4). В фации, полученной в радиальном магнитном поле (фиг.5), взаимопроникновения элементов различных зон не выявлено. Для каждой из зон характерна четкая структура и равномерная толщина зоны по всей окружности. Пример 2 Пациентка Ж., 64 лет. Диагноз: Рак желудка T4N2M2 с врастанием в головку поджелудочной железы. Механическая желтуха. 09.09.2008 г. – оперирована: Лапаротомия, наложение обходных холецистоеюно- и гастроеюноанастомозов по Roux. Интраоперационно при наложении обходного холецистоеюноанастомоза пункционным способом получена пузырная «белая» желчь. Получены фации желчи методом стандартной клиновидной дегидратации (способ-прототип) (фиг.6) и с использованием радиального магнитного поля (фиг.7). Центральная зона фации, полученной в магнитном поле, имеет большее число центров кристаллообразования, отличающихся аналогичной структурой и ориентацией ответвлений, тогда как фация, полученная обычным способом-прототипом, имеет «разорванную» структуру и лишь один центр кристаллообразования. Пример 3 Пациент С, 54 года. Диагноз: ЖКБ. Острый флегмонозный калькулезный холецистит. Стеноз БДС 2 ст. Транзиторная механическая желтуха. 26.10.2008 – оперирован: MAS-холецистэктомия, бужирование БДС, холедохостомия по Холстеду. Интраоперационно получен внутрибрюшной экссудат. Получены фации экссудата методом стандартной клиновидной дегидратации (способ-прототип) (фиг.8) и с использованием радиального магнитного поля (фиг.9). Элементы центральной зоны фации, полученной стандартным способом-прототипом, хаотично рассеяны, дендритные структуры маловыражены. Радиальные трещины распространены по всей фации. В центральной зоне фации, полученной в магнитном поле, трещины не выражены, имеются четко структурированные центры кристаллообразования, дендритные элементы ориентированы по направлению друг к другу. Способ прошел апробацию в хирургическом отделении ГКБ Положительный эффект заявляемого способа состоит в следующем: способ информативен при низкой себестоимости и трудоемкости, позволяет получить упорядоченную фацию биологической жидкости, что повышает объективность анализа за счет его проведения высокотехнологичными методами.
Формула изобретения
1. Способ подготовки биологической жидкости для морфологического исследования путем высушивания капли биологической жидкости и получения фации с последующим ее фотографированием, отличающийся тем, что фацию биологической жидкости получают с использованием устройства, создающего радиальное магнитное поле с величиной магнитной индукции 0,06 Тл и градиентом поля 0,01 Тл/мм, для чего биологическую жидкость центрифугируют, затем надосадочную жидкость наносят в объеме 0,004 мл на предметное стекло, далее стекло с каплей биологической жидкости устанавливают таким образом, чтобы центр высушиваемой капли проекционно соответствовал вершине конусовидного элемента устройства, и высушивают в течение не менее 12 ч. 2. Устройство для подготовки биологической жидкости для морфологического исследования путем высушивания, включающее источник магнитного поля, отличающееся тем, что оно выполнено в виде цилиндрической стальной платформы, в центре которой закреплен конусовидный элемент, и имеет возможность установки на нем предметного стекла с каплей высушиваемой биологической жидкости, центр которой проекционно соответствует вершине конусовидного элемента, при этом источник магнитного поля выполнен в виде кольцевого магнита, расположенного по краю платформы и создающего магнитное поле с величиной магнитной индукции 0,06 Тл и градиентом 0,01 Тл/мм.
РИСУНКИ
|
||||||||||||||||||||||||||
96/165 «Формообразование кристаллических структур биологических жидкостей при различных видах патологии», 1998 г.) – прототип. Способ заключается в том, что на обезжиренное предметное стекло наносят каплю биологической жидкости в объеме 4-20 мкл. Капля высушивается при температуре 20-25°С, относительной влажности 65-70% и при минимальной подвижности окружающего воздуха. Продолжительность периода высыхания составляет 18-24 часа. В процессе дегидратации происходит разделение органических и неорганических компонентов капли. В результате в краевой зоне формируется зона органических веществ, а в центральной – зона минеральных веществ. В результате формируется сухая пленка (фация) со специфическими структурами, представляющими собой индивидуальные биологические параметры, отражающие молекулярные взаимоотношения в БЖ, а значит, и протекающие в ней патофизиологические процессы (Шабалин В.Н., Шатохина С.Н. Морфология биологических жидкостей человека. / – М.: Хризостом, 2001. – с.304.). Анализ структурообразующих элементов дегидратированной капли проводится с помощью стереомикроскопа и фиксируется посредством микрофотосъемки. Однако до настоящего времени анализ проводится преимущественно с использованием описательных характеристик (Рыжкова О.А. Клинико-диагностическое значение морфологической картины сыворотки крови у больных туберкулезом легких. Автореферат на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. / Москва, 2008. – С.29).
