Патент на изобретение №2397764

(54) НОВОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ АЛЬФА-СИМПАТОМИМЕТИКОВ, ИМЕЮЩИХ 2-ИМИДАЗОЛИНОВУЮ СТРУКТУРУ

(57) Реферат:

Предложено антивирусное лекарственное средство, содержащее -симпатомиметики, имеющие 2-имидазолиновую структуру, и выбранное из группы, которая включает оксиметазолин и ксилометазолин (ранее эти вещества с сосудосуживающим действием использовали для снятия отека слизистых оболочек) для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения вирусных заболеваний. Вирусные заболевания, в частности, включают острый ринит, грипп, парагрипп, конъюнктивит, средний отит, синусит. Показано противовирусное действие веществ против вируса герпеса HVR 14, HVR 2, вируса гриппа А. 8 з.п. ф-лы, 2 ил., 6 табл.

Настоящее изобретение относится к применению -симпатомиметиков, имеющих 2-имидазолиновую структуру, для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения вирусных заболеваний.

-Симпатомиметики, имеющие 2-имидазолиновую структуру, используют для местного лечения припухлостей слизистой оболочки носа, например, при остром рините и аллергическом рините. -Симпатомиметики стимулируют -рецепторы в сосудах и, таким образом, имеют сильное сосудосуживающее действие. При местном применении в нос происходит значительное сужение сосудов на слизистой оболочке носа, которое затем приводит к снижению в слизистой секреции и снятию отека слизистых оболочек. Это улучшает прохождение воздуха и устраняет сопротивление носовому дыханию. Острый ринит, также известный как насморк, является острым воспалением носовой слизистой оболочки, вызванным вирусами. Описанное выше применение -симпатомиметиков, имеющих 2-имидазолиновую структуру, при остром рините для снятия отека со слизистой оболочки основано на их сосудосуживающем действии, описанном выше. Таким образом, их применение при лечении острого ринита не направлено против болезни острый ринит по сути, а вместо этого представляет собой только паллиативное лечение, которое направлено на (неспецифический) симптом припухлости слизистой оболочки, который также происходит при остром рините.

Неожиданно было найдено, что -симпатомиметики, имеющие 2-имидазолиновую структуру, имеют антивирусное действие и, таким образом, могут применяться для причинной профилактики и/или лечения вирусных болезней. Поэтому настоящее изобретение относится к применению симпатомиметиков, имеющих 2-имидазолиновую структуру, для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения вирусных заболеваний.

-Симпатомиметики, имеющие 2-имидазолиновую структуру, которые могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, все представляют собой активные ингредиенты, имеющие -симпатомиметическое действие, которые содержат концевое 2-замещенное имидазолиновое кольцо, такие как, например, нафазолин, трамазолин, тетризолин, феноксазолин, ксилометазолин или оксиметазолин. Лекарственное средство в соответствии с настоящим изобретением, которое предназначено для профилактики и/или лечения вирусных заболеваний, может включать один или больше -симпатомиметик(ов), имеющих 2-имидазолиновую структуру. Особое предпочтение отдается применению оксиметазолина и/или ксилометазолина, особенно предпочтительно оксиметазолина.

Для целей настоящего изобретения вирусные заболевания представляют собой все болезни, которые вызываются вирусами, такими как, например, герпес (вирус простого герпеса), пневмония (вирус Сендай), инклюзионная болезнь (цитомегаловирус), грипп (гриппозная и парагриппозная инфекции), инфекционный мононуклеоз/болезнь Пфейффера (вирус Эпштейна-Барра), СПИД (вирус иммунодефицита человека/ВИЧ), энтерит (ротавирусы, норовирусы, аденовирусы, энтеровирусы), гепатит (вирусы гепатита), менингит (вирусы Коксаки, ЕСНО-вирусы, среди других), энцефалит (арбовирусы, ЕСНО-вирусы, среди других), фолликулярный конъюнктивит (аденовирусы, вирусы герпеса, среди других), инфекции дыхательных путей (риновирусы, парагрипп, респираторно-синцитиальный вирус, аденовирусы, среди других), такие как острый ринит, средний отит, синусит, тонзиллит, фарингит, ларингит, бронхит. Вирусные заболевания, для профилактики и/или лечения которых предпочтительно используют -симпатомиметики, имеющие 2-имидазолиновую структуру, представляют собой острый ринит, грипп, парагрипп, конъюнктивит, средний отит и синусит.

Лекарственное средство, включающее один или более -симпатомиметиков, может применяться превентивно, то есть профилактически. В этом случае вирусы, вызывающие болезнь, уничтожаются сразу после инфицирования, таким образом, чтобы болезнь не начиналась вообще. Лекарственное средство, включающее один или более -симпатомиметиков, аналогично также может применяться после начала болезни, то есть для уничтожения вирусов, когда они уже привели к болезни, и, таким образом, для лечения вирусного заболевания.

В зависимости от применения лекарственное средство, включающее один или более -симпатомиметик(ов), может применяться системно или локально (местное применение). Системное применение, как предполагается, означает все способы применения, которые приводят к тому, что активные ингредиенты абсорбируются телом после применения и распределяются по всему телу посредством кровотока. Это, в частности, пероральное и парентеральное применение, а также и другие типы применения, такие как, например, трансдермальное или легочное применение.

Местное применение, как предполагается, означает все способы применения, посредством которых лекарственные средства, включающие активный компонент(ы), наносятся непосредственно на поверхности тела или в полые органы, на или в которых они должны действовать. Особенно предпочтительным является применение на кожу, включая кожу, покрывающую отверстия тела, такую как, например, в ухе, или к слизистым оболочкам, например, в глазу, в носу, в области горла или в ректальной области.

Местное применение является предпочтительным. Поэтому, изобретение относится к применению -симпатомиметиков, имеющих 2-имидазолиновую структуру, для получения лекарственного средства для профилактики и/или обработки вирусных заболеваний, которые характеризуются тем, что лекарственное средство предназначается для местного применения.

Особое предпочтение отдается местному применению лекарственного средства согласно изобретению на слизистых оболочках. Поэтому изобретение также относится к применению -симпатомиметиков, имеющих 2-имидазолиновую структуру, для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или терапии вирусных заболеваний, которое характеризуются тем, что лекарственное средство предназначается для применения на слизистых оболочках.

Согласно предпочтительному воплощению изобретения лекарственное средство, включающее один или больше -симпатомиметик(ов), имеющих 2-имидазолиновую структуру, используется против вирусных заболеваний в области носа/горла, дыхательных путей, уха, на коже и/или глазу. Поэтому, кроме того, изобретение относится к применению -симпатомиметиков, имеющих 2-имидазолиновую структуру, для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или обработки вирусных заболеваний, которое характеризуются тем, что последнее представляет собой болезнь в области носа/горла, дыхательных путей, уха, кожи и/или глаза. Лекарственное средство предпочтительно применяется для профилактики и/или лечения вирусных заболеваний в области носа/горла, уха и/или глаза. Особое предпочтение отдается применению лекарственного средства для профилактики и/или лечения острого ринита, гриппа, парагриппа, конъюнктивита, среднего отита, синусита. Применение лекарственного средства для профилактики и/или лечения острого ринита и/или гриппа особенно предпочтительно.

Само собой разумеется, что форма лекарственного средства должна в каждом случае подходить для способа применения. Подходящие формы для перорального применения могут представлять собой, например, таблетки, капсулы, драже, гранулы или жидкости, для парентеральных применений, например, растворы, эмульсии или суспензии, для местных форм применения, например, гели, мази, лосьоны, кремы, растворы, эмульсии, суспензии, порошки, суппозитории или аэрозоли. Формы применения, которые являются подходящими для специфического применения, их композиция и получение хорошо известны специалисту, квалифицированному в данной области техники, и не требуют дальнейшего объяснения в данном описании. Можно сослаться на соответствующие стандартные работы, например, Н.Sucker, P.Fuchs, P.Speiser, “Pharmazeutische Technologie” [Фармацевтическая Технология], Stuttgart 1978 или К.Н.Bauer, К.Н.Fromming, С.Fuhrer, Tharmazeutische Technologie” [Фармацевтическая Технология], Stuttgart 1986. Они включены в данное описание посредством ссылки и, таким образом, представляют собой часть описания.

-Симпатомиметики, имеющие 2-имидазольную структуру, могут применяться как основания или также как их соли присоединения кислоты с неорганическими кислотами, например такими, как серная кислота, сернистая кислота, дитионовая кислота, азотная кислота, галогеноводородные кислоты, такие как соляная кислота или бромисто-водородная кислота, фосфорные кислоты, такие как, например, ортофосфорная кислота, или сульфаминовая кислота, или с органическими кислотами, такими как, например, муравьиная кислота, уксусная кислота, пивалиновая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, пимелиновая кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, молочная кислота, винная кислота, яблочная кислота или лимонная кислота. Особое предпочтение отдается применению солей присоединения кислоты и, в свою очередь, в этом описании гидрохлоридов. Это применяется, в частности, если проводят применение водных растворов, которые являются предпочтительными.

В соответствии с предпочтительным воплощением настоящего изобретения проводят применение лекарственного средства, которое дополнительно включает одну или более солей цинка. Соли цинка, которые могут присутствовать, представляют собой, в принципе, все фармацевтически приемлемые соли цинка, предпочтительно хлорид цинка, лактат цинка, сульфат цинка, цитрат цинка, ацетат цинка, гистидинат цинка, оротат цинка, аспартат цинка и/или глюконат цинка. Лекарственное средство особенно предпочтительно включает глюконат цинка.

В соответствии с предпочтительным воплощением настоящего изобретения проводят применение лекарственного средства, которое характеризуется тем, что -симпатомиметик(и) находится(ятся) в водном растворителе. Водные растворы, например, особенно подходят для местного применения на слизистых оболочках, таких как, например, в области глаза, в области носа/горла или в ректальной области, и особенно предпочтительно используются в носу для лечения острого ринита.

Водные растворы могут включать вспомогательные вещества, такие как, например, буферы и консерванты. Подходящие буферы, в принципе, представляют собой все физиологически приемлемые вещества, которые являются подходящими для установления желаемого рН, такие как, например, цитратные соли, ацетатные соли, сукцинатные соли, гистидиновые соли, малатные соли, фосфатные соли или лактатные соли, и/или их соответствующие свободные кислоты или основания, так же как смеси их различных солей и/или кислот или оснований. Водные растворы, включающие -симпатомиметики, имеющие 2-имидазолиновую структуру, особенно предпочтительно включают фосфатный или цитратный буфер, в особенности, если в качестве активного ингредиента присутствует(ют) оксиметазолин и/или ксилометазолин. Согласно особенно предпочтительному воплощению изобретения лекарственное средство, которое включает один или более -симпатомиметик(ов) и предназначено для профилактики и/или лечения вирусных заболеваний, находится в форме водного раствора и включает, по крайней мере, один буфер, предпочтительно фосфатный или цитратный буфер.

Подходящие фосфатные буферы представляют собой растворы моно- и/или двунатриевые и калиевые соли фосфорной кислоты, такие как гидрофосфат динатрия или дигидрофосфат калия, и смеси солей натрия и калия, такие как например, смеси гидрофосфата динатрия и дигидрофосфата калия.

Подходящие цитратные буферы представляют собой смеси одной или более цитратной(ых) соли(ей) и/или ее свободной кислоты (например, такой как лимонная кислота, моногидрат лимонной кислоты, дигидрат цитрата тринатрия, моногидрат цитрата трикалия).

рН водного раствора находится в диапазоне от 4,0 до 8,0, предпочтение отдается рН от 5,5 до 7,0. Если водный раствор включает фосфатный буфер, он предпочтительно присутствует в концентрации 5-180 ммоль/л, предпочтительно 140-145 ммоль/л. Если присутствует цитратный буфер, он предпочтительно присутствует в концентрации 1-50 ммоль/л, предпочтительно 5-20 ммоль/л.

Подходящие консерванты представляют собой, например, фенол, м-крезол, метил- или пропил-парабен, хлорбутанол, тиомерсал или бензалконий хлорид, из которых бензалконий хлорид является предпочтительным, в особенности если водный раствор предназначен для местного применения на слизистых оболочках и при этом в особенности для использования в носу. Согласно дополнительному предпочтительному воплощению изобретения лекарственное средство, которое включает один или более -симпатомиметик(ов) и предназначено для профилактики и/или лечения вирусных заболеваний, находится в форме водного раствора и включает, по крайней мере, один консервант, предпочтительно бензалконий хлорид.

Если раствор еще не является изотоническим из-за осмотических свойств активного ингредиента и вспомогательных веществ, присутствующих дополнительно, изотонический агент, предпочтительно физиологически приемлемая соль, такая как, например, хлорид натрия или хлорид калия, или физиологически приемлемый полиол, такой как, например, глюкоза или глицерин, кроме того, может предпочтительно присутствовать в количестве, необходимом для изотонизации. Изотонический агент особенно предпочтительно представляет собой глицерин.

В зависимости от присутствующего -симпатомиметика, формы применения и определенного вирусного заболевания лекарственное средство может быть предназначено для применения от одного или более раз в неделю до одного или более раз в день. Согласно воплощению настоящего изобретения лекарственное средство предназначено для применения два раза, три раза или больше трех раз в день.

Примеры объясняют изобретение, не ограничивая его.

Пример

Антивирусная активность

Антивирусную активность -симпатомиметиков, имеющих 2-имидазолиновую структуру, исследуют в серии in-vitro экспериментов, например, с оксиметазолином против вирусных штаммов HRV2 и HRV14 (риновирус человека) и гриппа А. Исследования проводят на HeLa клетках, инфицированных с помощью HRV2 или HRV14, или MDCK клетках, инфицированных с помощью гриппа А. При этом влияние оксиметазолина на репликацию вируса/размножение вируса демонстрируют по уменьшению бляшкообразующих единиц (plaque reduction assay) (смотри Cooper, P.O., 1955: A method for producing plaques in agar suspensions of animal cells. Virologiy 1:397-409) и на инфективности вирусов (определение остаточной инфективности путем титрования вируса). Кроме того, свойства антивирусного действия были определены при помощи так называемого анализа ингибирования мощного цитопатического эффекта (CPE) (high-throughput cytopathic effect inhibitory assay) (Schmidtke M., Schnittler U., Jahn В., Dahse H. – M. and Stelzner A. 2001; A rapid assay for evaluation of antiviral activity against coxsackie virus B3, influenza virus A, and herpes simplex virus type 1. J Virol Methods 95:133-143).

Штаммы вирусов HRV2 и HRV14

Чтобы исключать цитотоксические эффекты, вызванные активным компонентом, сначала определяют концентрацию активного компонента, при которой не возникает никакого влияние на присутствующие клетки HeLa в условиях данного in vitro исследования, путем добавления серий разбавлений водных растворов активного компонента (см. Mosmann, Т., 1983: Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival:Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays. J.Immunol. Meth. 65:55-63). Концентрация активного компонента, при которой не возникают никакие эффекты, вызванные испытуемыми веществами, уменьшающими метаболизм клеток HeLa, находится между 0,005 и 0,003125% (мас./об.).

Инфицирование клеток HeLa при помощи HRV 14 выполняют с использованием средней инфекционной дозы (M.O.I., множественность заражения) в 0,0004. Для инфицирования клеток HeLa при помощи HRV 2 выбирают такую вирусную дозу, которая приводит к полному СРЕ у необработанных контрольных вирусных группах спустя 72 часа после инфицирования. Исследуемые вещества добавляют на инфицированные клетки в разбавлениях (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32) ранее определенной нецитотоксичной концентрации вещества 0,003125% (мас./об.). Антивирусную активность измеряют при помощи теста по уменьшению бляшкообразующих единиц и/или анализа ингибирования мощного цитопатического эффекта (СРЕ). Остаточную инфективность (TCID₅₀/мл) определяют при помощи вирусного титрования. Результаты для HRV14 показаны в таблицах 1 и 2.

В табл.1. результаты с помощью примера для оксиметазолина показывают антивирусное действие -симпатомиметиков, имеющих 2-имидазолиновую структуру (здесь против штамма вируса HRV14).

Результаты для HRV2 показаны в Таблице 3.

В табл.3 результаты с помощью примера для оксиметазолина показывают антивирусное действие -симпатомиметиков, имеющих 2-имидазолиновую структуру (здесь против штамма вируса HRV 2).

Вирус гриппа А

Аналогично процессу, описанному для двух риновирусов (HRV2, HRV14), сначала определяют концентрацию активного компонента, при которой не возникает никакого влияния на применяемые клетки MDCK в условиях данного in vitro исследования, путем добавления серий разбавлений водных растворов активного компонента. Концентрация активного компонента, при которой не возникают никакие эффекты, вызванные испытуемыми веществами, уменьшающими метаболизм клеток MDCK, составляет 0,005% (мас./об.). Исследуемые вещества добавляют на инфицированные клетки в разбавлениях (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32) ранее определенной нецитотоксичной концентрации вещества 0,005% (мас./об.). Антивирусную активность определяют количественно при помощи анализа ингибирования мощного цитопатического эффекта (СРЕ). Результаты показаны в Таблице 4.

В табл.4 результаты с помощью примера для оксиметазолина показывают антивирусное действие -симпатомиметиков против штамма вируса гриппа А (анализ СРЕ).

Испытания противовирусной активности ксилометазолина (XMZ) в отношении HRV14 и HRV39

Анализ противовирусной активности проводили в отношении HRV14 и HRV39. Для этого соответствующими вирусами инфицировали чувствительные к вирусу клетки HeLa. Для анализа подавления бляшкообразования инфицирование вирусом HRV14 проводили при использовании средней дозы 0,00057 (MOI, множественность заражения). Эта величина соответствует 1,2×10² ПОЕ/мл (порообразующих единиц/мл). В случае HRV39 оказалось, что в связи с тем, что титр вируса является нестабильным, инфицирующая доза (MOI) составляла от 0,00056 (1,29×10² ПОЕ/мл) до 0,00079 (1,83×10² ПОЕ/мл). При подготовке испытаний для определения остаточной инфекционности (ОСИД₅₀) использовали продуцирование вируса при инфицировании указанных клеток более высокими дозами (HRV14: MOI от 0,03 (7,6×10³ ПОЕ/мл), HRV39: MOI от 0,052 (1,2×10⁴ ПОЕ/мл)). Добавление анализируемых соединений к инфицированным клеткам проводили с использованием токсичных и нетоксичных для клеток концентраций (с интервалами log₂: 20, 10, 5, 1, 0,1 нг/мл).

Количественный анализ противовирусной активности в отношении HRV проводили методом подавления бляшкообразования, подсчитывая количество вирусных бляшек (ПОЕ/мл) с помощью систем обработки фотографий, и анализом продуцирования вируса титрованием для определения остаточной инфекционности (log₁₀ OCИД₅₀/мл). Для оценки эксперимента в каждом случае использовали 2 параллельных пробы из 3 независимых испытаний, включая соответствующие разведения. При этом вирус-положительные и отрицательные контроли подвергали противовирусным испытаниям в обычных условиях культивирования.

Результаты доза-зависимого противовирусного действия в отношении HRV14 приводятся в таблице 1 и на фиг.1, а в отношении HRV39 в таблице 2, а также на фиг.2. Кроме того, приводится процент подавления роста (%), вычисленный по результатам испытаний подавления бляшкообразования и титр вируса (log₁₀ ОСИД₅₀), определенный по результатам вирусного титрования.

Таблица 1 Противовирусная активность КМЗ в отношении HRV14 (MOI 0,0057/0,03). Противовирусную активность (* относительное подавление роста %, колонка 3) определяли по количеству бляшек (ПОЕ/мл), и остаточную инфекционность определяли по результатам вирусного титрования (титр вируса, ОСИД₅₀, колонка 4) каждый раз в 2 параллельных пробах и 3 экспериментах при сравнении с положительным вирусным контролем (инфицированные клетки культивировали только в среде MEM). Данные приведены на фиг.1 графически.

*относительное подавление (%) противовирусной активности по данным трех независимых экспериментов.

на фиг.1 Противовирусная активность КМЗ в отношении HRV14 на основе данных, приведенных в таблице 1, приводится графически в виде столбиков доза-зависимое противовирусное действие КМЗ в отношении культуры клеток, инфицированных HRV14.

* относительное ингибирование (%) по данным трех независимых экспериментов.

Таблица 2 Противовирусная активность КМЗ в отношении HRV39 (ПОЕ/ОСИД₅₀). Противовирусную активность (* относительное подавление роста %, колонка 3 (VI), колонка 4 (V2), колонка 5 (V3) и *колонка 6 (VI, V2, V3)) определяли по количеству бляшек (ПОЕ/мл) и остаточную инфекционность определяли по результатам вирусного титрования (титр вируса, ОСИД₅₀, колонка 4) каждый раз в 2 параллельных пробах и 3 экспериментах при сравнении с положительным вирусным контролем (инфицированные клетки культивировали только в среде MEM). Данные приведены на фиг.2 графически.

* относительное подавление (%) противовирусной активности по данным трех независимых экспериментов.

Фиг.2: на основе данных, приведенных в таблице 2, приводится графически в виде столбиков доза-зависимое противовирусное действие КМЗ в отношении культуры клеток, инфицированных HRV14.

* относительное подавление (%) противовирусной активности по данным трех независимых экспериментов.

Формула изобретения

1. Антивирусное лекарственное средство, содержащее -симпатомиметики, имеющие 2-имидазолиновую структуру, и выбранное из группы, которая включает оксиметазолин и ксилометазолин для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения вирусных заболеваний.

2. Антивирусное лекарственное средство по п.1, отличающееся тем, что лекарственное средство предназначено для местного применения.

3. Антивирусное лекарственное средство по п.2, отличающееся тем, что лекарственное средство предназначено для применения на слизистых оболочках.

4. Антивирусное лекарственное средство по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что вирусное заболевание представляет собой заболевание в области носа/горла, дыхательных путей, уха, кожи и/или глаза.

5. Антивирусное лекарственное средство по п.4, отличающееся тем, что вирусное заболевание представляет собой заболевание в области носа/горла, уха и/или глаза.

6. Антивирусное лекарственное средство по п.5, отличающееся тем, что вирусное заболевание представляет собой острый ринит, грипп, парагрипп, конъюнктивит, средний отит, синусит.

7. Антивирусное лекарственное средство по п.1, отличающееся тем, что -симпатомиметик(-и) находится(-ятся) в водном растворителе.

8. Антивирусное лекарственное средство по п.7, отличающееся тем, что водный раствор включает по крайней мере один буфер, предпочтительно фосфатный или нитратный.

9. Антивирусное лекарственное средство по п.7 и/или 8, отличающееся тем, что водный раствор включает по крайней мере один консервант, предпочтительно бензалконий хлорид.

РИСУНКИ