Патент на изобретение №2395229
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ГИПЕРПАРАТИРЕОЗА
(57) Реферат:
Изобретение относится к медицине, эндокринологии, биологии, физиологии. Для экспресс-диагностики гиперпаратиреоза в зоны проекции паращитовидных желез локально в области над верхними и нижними полюсами щитовидной железы, симметрично помещают четыре стеклянные пластины, на которые предварительно в виде дорожки наносят 1% водный раствор аспарагиновой аминокислоты объемом 0,01-0,03 мл на каждую пластину. Выдерживают пластины на протяжении 3-5 минут, далее высушивают в термостате при Т=+18-20°С в течение 2-3 минут. Затем исследуют в поляризованном свете с кварцевым компенсатором. При наличии в препаратах кристаллов-агрегаций из радиально-лучевых сферолитов диагностируют гиперпаратиреоз. Способ прост в исполнении, экономичен, повышает информативность диагностики гиперпаратиреоза. 9 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, биологии, физиологии, и может быть использовано для диагностики гиперфункции паращитовидных желез – гиперпаратиреоза (ГПТ). Паращитовидные железы – основные регуляторы обмена кальция и фосфора, осуществляемого с помощью синтезируемого ими гормона- паратгормона (ПТГ). Основными мишенями ПТГ являются кости, почки, известно его влияние на адсорбцию кальция в кишечнике. Железы располагаются над верхними и нижними полюсами щитовидной железы. ГПТ возникает при аденоме железы и гиперплазии желез, их карциноме, множественной эндокринной неоплазии I и II типов, что сопровождается гиперпродукцией ПТГ (М.И.Балаболкин. Эндокринология. М., 1998; Дедов И.И., Мельниченко Г.А. Фадеев В.В. Эндокринология, М., 2007). Клиника ГПТ многообразна и ее диагностика чрезвычайно затруднена. Синдромы заболевания пестры в зависимости от точки приложения ПТГ, вариант: костный, желудочно-кишечный, урологический нервно-психический, стоматологический, сердечно-сосудистый. Известны способы определения паратгормона: сцинтиграфия паращитовидных желез с помощью применения радиоактивного фармпрепарата (РФП) и иммунохемилюминисцентный способ «Сэндвич» (Diagnostic imaging nuclear medicine; Система Адвиа Кентавр ХР (США, фирма Баер). АНАЛОГ – Стинтиграфия паращитовидных желез с использованием радиоактивного технеция -РФП, активность 99 m Тc МИБИ, 250-550 МБК (Diagnostic imaging nuclear medicine. Авторы: Morton. Clark. Blodgelf. Christensen. O’Malley Sverens. Chinu. Woxman. Nance homson. Droten. Heston. 7 раздел 12 стр. Drawings-Copyrighf 2007 Aminsys Yns.). В основе способа сцинтиграфии паращитовидных желез РФП лежит дополнительное поглощение митохондриями аденом паращитовидных желез 99 m МИБИ, и его замедленное вымывание из аденомы по сравнению с окружающими тканями щитовидной железы. Использование этого способа позволяет выявить аденому паращитовидной железы в 85-90%. Исследование состоит из 2 стадий. Вводят препарат 99 m Tc МИБИ, 250-50 Мбк. 1. Фаза тиреоидная – через 30 мин. после введения 99 m Те МИБИ, происходит включение препарата в щитовидной железе, паращитовидных железах, слюнных железах, миокарде. 2. Фаза гиперпаратиреоидная, отсроченная, через 2 часа (в норме через 2 часа полностью высвобождается РФП из здоровых желез). 3. Фиксация результатов с помощью технического устройства для записи сцинтиграмм. Недостатки способа. 1. Применение радиоактивного препарата. 2. Лучевая нагрузка на организм человека. 3. Использование дорогостоящего технического устройства. БЛИЖАЙШИЙ АНАЛОГ – Иммунохемилюминесцентный способ «Сэндвич» (Система Адвиа Кентавр ХР (США, фирма Баер). В основе способа лежит взаимодействие антигена (аналит в пробе) и антитела, меченого акридиновым эфиром (АЭ). В ходе этой реакции выделяется энергия в виде света, количество которого зависит от количества аналита в пробе. 1. 200 мкл сыворотки помещают в кювету. 2. Добавляют 50 мкл светового реагента, содержащего антитела, меченные акридиновым эфиром. Антитела, меченные акридиновым эфиром, связываются только с аналитспецифичным антигеном, находящимся в пробе. 3. Далее добавляют твердую фазу, содержащую парамагнитные частицы, покрытые антителами, специфичными к антигену, находящемуся в пробе. Кювета инкубируется при температуре – 37,0°С (2.5 мин). Парамагнитные частицы (ПМЧ) связываются с антигенами, которые уже связаны с антителами, мечеными АЭ. 4. Выполняют отмывку и аспирацию (кювета попадает в магнитное поле, которое притягивает парамагнитные частицы магнитом. Пока он удерживает парамагнитные частицы на месте, материал, несвязавшийся с ними, отмывают из кюветы. 5. Добавляют 300 мкл кислоты и щелочи, происходит инициация хемилюминесцентной реакции. Хемилюминометр оценивает эмиссию света в относительных световых единицах. При использовании «Сэндвич» метода, концентрация аналита пропорциональна свечению. Недостатки способа 1. Использование сыворотки крови человека. 2. Применение дорогостоящих реагентов. 3. Использование дорогостоящей системы – автоматизированного иммунологического анализатора. 4. Автоматическое выполнение результатов, которое может дать «сбой». Задачи предлагаемого изобретения 1. Обеспечение экспресс – диагностики гиперфункции паращитовидных желез, продуцирующих паратиреоидный гормон. 2. Повышение информативности диагностики. 3. Снижение материально-технических затрат. В разработке предлагаемого изобретения используют возможность регистрации биологического излучения паращитовидных желез при помощи 1% водного раствора аспарагиновой аминокислоты (АА). Биологическое информационное излучение от различных объектов (живых, биокосных, косных) – один из общих принципов энергоинформационного взаимодействия в природе (В.И.Вернадский. Химическое строение биосферы Земли и ее окружение. М., 1965; В.П.Казначеев, Л.П.Михайлова. Биоинформационные функции естественных электромагнитных полей. Новосибирск, 1985). В настоящее время в науке активно разрабатываются принципы информационно-волновой биологии и медицины. Под влиянием фронта информационного волнового излучения исследуемого объекта, аминокислоты, изменяя свою структуру, тем самым передают информацию о структуре источника излучения, в итоге в ней формируется «зеркальное» отражение исследуемого объекта (И.В.Прангишвили. П.П.Гаряев, Г.Г.Тертышный и др. Трехмерная модель процессов эндогенного голографического управления развитием пространственной структуры биосистем. М., 2004; Л.В.Савина. Энергоинформационные взаимодействия. Краснодар, 2008). Технической новизной предложения является физический метод исследования функции паращитовидных желез – состояние гиперпаратиреоза, отличающийся тем, что в зоны проекции паращитовидных желез локально в области над верхними и нижними полюсами щитовидной железы симметрично помещают четыре стеклянные пластины, на которые в виде дорожки наносят АА – 1% водный раствор аспарагиновой аминокислоты, объемом 0,01-0,03 мл на каждую, выдерживают пластины на протяжении 3-5 минут затем препарат высушивают в термостате при Т=+18-20°С в течение 2-3 минут, затем исследуют под микроскопом в поляризованном свете с кварцевым компенсатором и при наличии в препаратах кристаллов – агрегаций из радиально-лучевых сферолитов диагностируют гиперпаратиреоз. Преимущества предложенного способа – Для диагностики гиперфункции паращитовидных желез использован 1% водный раствор аспарагиновой аминокислоты (АА), регистрирующей биологическое излучение желез. – Способ обеспечивает высокую селективную информативность, эффективность диагностики. Соблюдается физиологичность и нативность способа. По сравнению с базовыми способами диагностики гиперпаратиреоза время исследования сокращается на 70%, а материальные затраты – на 88-90%. Способ осуществляют следующим образом. 1. Готовят 1% водный раствор АА. 2. Тарированной пипеткой АА наносят на четыре стеклянные пластины в виде тонкой пленки-дорожки, объемом 0,01-0,03 мл на каждую. 3. Стеклянные пластины с нанесенными на них АА симметрично помещают в зоны проекции паращитовидных желез локально в области над верхними и нижними полюсами щитовидной железы, выдерживают на протяжении 3-5 минут. 4. Препараты высушивают в термостате при Т=+18-20°C в течение 2-3 минут. 5. Образцы исследуют в поляризованном свете с кварцевым компенсатором. При наличии в препаратах кристаллов – агрегаций из радиально-лучевых сферолитов диагностируют гиперпаратиреоз. Приводим структуру 1% водного раствора АА, фиг.1, присутствуют кристаллы преимущественно ромбической формы. На фиг.2 приведен гистологический препарат строения паращитовидной железы здорового человека (В.В.Алмазов, Л.С.Сутулов. Атлас по гистологии и эмбриологии. М., 1978). На фиг.3 представлена типовая структура АА, полученная при регистрации информации с гормона паращитовидных желез – паратиреоидина. Для этой цели на стеклянную пластину наносят АА и окружают его по периферии валиком из гормона паратиреоидина, выдерживают в нем 3-5 минут, затем сушат при Т=+18-20°С в течение 2-3 минут, затем исследуют в поляризованном свете с кварцевым компенсатором (КК). См. патент изобретения «Способ экспресс-идентификации фарма- и парафармацевтиков, вводимых в организм человека». Авторы: Савина Л.В., Кузнецова Е.А. На фиг.4 приведены типовые структуры АА, полученные при регистрации биологического излучения паращитовидных желез здорового человека, для чего четыре стеклянные пластины с нанесенным на них АА помещали в зоны проекции желез – над верхними и нижними полюсами щитовидной железы. Присутствуют единичные кристаллы в виде радиально-лучевых сферолитов. Проведено 189 клинических исследований. Приводим примеры. Пример 1, фиг.5. Б-ой А., история болезни (ИБ) На фиг.5 представлены кристаллы в виде агрегаций из радиально-лучевых сферолитов. Технология. На каждую из четырех стеклянных пластин нанесли по 0,01 мл АА в виде дорожки, поместили в зоны проекции паращитовидных желез (ПЩЖ) локально симметрично в области над верхними и нижними полюсами щитовидной железы (ЩЖ), выдержали в них 3 мин. Пластины высушили при Т=+18°С на протяжении 2 мин, затем исследовали в поляризованном свете с КК. Видны кристаллы агрегации из радиально-лучевых сферолитов. Одномоментно в сыворотке крови (СК) определили концентрацию паратгормона (ПГ), которая оказалась повышенной и составила 34 пмоль/л (норма – 4,5±1,1 пмоль/л). Диагноз гиперпаратиреоза подтвердился. Пример 2, фиг.6. Б-ой У. Ds: Гиперпаратиреоз. Солитарная аденома паращитовидной железы. ИБ Технология. На каждую из четырех стеклянных пластин нанесли по 0,02 мл АА в виде дорожки и поместили в зоны проекции ПЩЖ локально симметрично в области над верхними и нижними полюсами ЩЖ, выдержали в них 4 мин, высушили при Т=+19°С на протяжении 3 мин и исследовали в поляризованном свете с КК. Присутствуют кристаллы агрегации из радиально-лучевых сферолитов. Одномоментно в СК определили уровень ПГ, который оказался повышен – 16,2 пмоль/л. Диагноз гиперпаратиреоза подтвердился. Пример 3, фиг.7. Б-ая Ш. Ds: Гиперпаратиреоз. Гиперплазия паращитовидных желез. ИБ Технология. На каждую из четырех стеклянных пластин нанесли по 0,03 мл АА в виде дорожки и поместили в зоны проекции ПЩЖ локально симметрично в области над верхними и нижними полюсами ЩЖ, выдержали в них 5 мин, высушили при Т=+20°С на протяжении 3 мин и исследовали в поляризованном свете с КК. В препаратах обнаружили кристаллы агрегации из радиально-лучевых сферолитов. Одномоментно в СК определили уровень ПГ, который оказался повышенным и составил – 15 пмоль/л. Диагноз гиперпаратиреоза подтвердился. Пример 4, фиг.8. Б-ой И. Ds: Гиперпаратиреоз. Рак околощитовидных желез. ИБ Технология. На каждую из четырех стеклянных пластин нанесли по 0,02 мл АА в виде дорожки и поместили в зоны проекции ПЩЖ локально симметрично в области над верхними и нижними полюсами ЩЖ, выдержали 4 мин, высушили при Т=+19°С на протяжении 3 мин, исследовали в поляризованном свете с КК. Присутствуют агрегации из радиально-лучевых сферолитов. Одновременно в СК определили содержание ПГ, которое оказалось повышенным и составило – 18,8 пмоль/л. Диагноз гиперпаратиреоза подтвердился. Пример 5, фиг.9. Б-ая Б. Ds: Гиперпаратиреоз. Карцинома паращитовидных желез. ИБ Технология. На каждую из четырех стеклянных пластин нанесли по 0,03 мл АА в виде дорожки и поместили в зоны проекции ПЩЖ над верхними и нижними полюсами ЩЖ, выдержали 3 мин, высушили при Т=+18°С на протяжении 2 мин. Препараты исследовали в поляризационном микроскопе с КК. Найдены агрегации из радиально-лучевых сферолитов. Одномоментно в СК определили уровень ПГ, который оказался повышен и составил – 21,8 пмоль/л. Диагноз гиперпаратиреоза подтвердился.
Формула изобретения
Способ экспресс-диагностики гиперпаратиреоза, включающий физический метод исследования, отличающийся тем, что в зоны проекции паращитовидных желез локально в области над верхними и нижними полюсами щитовидной железы, симметрично помещают четыре стеклянные пластины, на которые в виде дорожки наносят 1%-ный водный раствор аспарагиновой аминокислоты объемом 0,01-0,03 мл на каждую пластину, выдерживают пластины на протяжении 3-5 мин, препараты высушивают в термостате при Т=18-20°С в течение 2-3 мин, затем исследуют в поляризованном свете с кварцевым компенсатором и при наличии в препаратах кристаллов-агрегаций из радиально-лучевых сферолитов диагностируют гиперпаратиреоз.
РИСУНКИ
|
||||||||||||||||||||||||||
1, с.44-45. КОТОВА И.В. Диагностика и хирургическое лечение первичного гиперпаратиреоза. Автореф. дис. на соиск. учен. степ. д-ра мед. наук. – 2004, 43 с. BIEGLMAYER С. et al. Parathyroid hormonemonitoring during total parathyroidectomy for renal hyperparathyroidism: pilot study of the impact of renal function and assay specificity, Clin Chem. 2006 Jun; 52(6):1112-9, (реферат), [он-лайн], [найдено 02.11.2009], найдено из базы данных PubMed. PROSST R.L. et al. Kinetics of intraoperative fluorescence diagnosis of parathyroid glands, Eur J Endocrinol. 2004 May; 150(5):743-7, (реферат), [он-лайн], [найдено 02.11.2009], найдено из базы данных PubMed.
