Патент на изобретение №2392956

(54) СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНТИГИПОКСИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ

(57) Реферат:

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к созданию средства, обладающего антигипоксическим действием. В качестве данного средства применяют экстракт на 40% этаноле надземной части посконника коноплевидного (Eupatorium cannabinum L.). Средство расширяет арсенал антигипоксических средств природного происхождения, удлиняет латентное время в условиях гипоксии гермообъема. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, конкретно к клинической фармакологии, и касается антигипоксических средств, получаемых из растительного сырья и служащих для повышения устойчивости организма к состояниям, сопровождающимся кислородной недостаточностью.

Разработка препаратов, обладающих антигипоксическими свойствами, в частности получаемых из растительного сырья, является чрезвычайно актуальной задачей, так как гипоксия как типовой процесс сопровождает практически все известные заболевания. Кроме того, гипоксические состояния могут быть обусловлены внешними факторами: условия высокогорья, повышенные физические нагрузки, стрессовые ситуации и т.д.

Используемые в качестве антигипоксантов синтетические лекарственные средства (пирацетам, натрия оксибутират) имеют узкую направленность действия, недостаточную терапевтическую эффективность, обладают рядом побочных эффектов [1]. Фитопрепараты могут сыграть существенную роль в решении этой проблемы. Известны предложения по применению в качестве антигипоксического средства экстракта корня солодки сухого (авторское свидетельство СССР 1782600), экстракта шлемника байкальского (патент РФ 2121357), экстракта травы живокости высокой (заявка на изобретение РФ 2006124332). Однако ввиду большого многообразия патологических состояний, сопровождающихся гипоксией, необходимо расширение арсенала антигипоксических средств растительного происхождения.

Наиболее близким к предлагаемому решению является экстракт надземной части лабазника обыкновенного (Filipendula vulgaris) (прототип), обладающий ноотропным и антигипоксическим действием [2].

Задачей изобретения является расширение арсенала антигипоксических средств природного происхождения, повышающих устойчивость организма к состояниям, сопровождающимся кислородной недостаточностью.

Поставленную задачу решают путем использования экстракта на 40% этаноле надземной части посконника коноплевидного (Eupatorium cannabinum L.) в качестве антигипоксического средства.

Новым является то, что впервые в качестве средства, обладающего антигипоксическим действием, используют экстракт на 40% этаноле надземной части посконника коноплевидного (Eupatorium cannabinum L.).

Посконник коноплевидный (Eupatorium cannabinum L.) – многолетнее травянистое растение высотой 75-175 см с прямостоячим стеблем. Надземная часть содержит следующие группы биологически активных веществ: углеводы и родственные соединения, эфирное масло, сесквитерпеноиды, тритерпеноиды, сапонины, алкалоиды, фенолкарбоновые кислоты и их производные, кумарины, флавоноиды, дубильные вещества [3].

Известно, что посконник коноплевидный (Eupatorium cannabinum L.) обладает слабительным, мочегонным, желчегонным, противоглистным эффектами; оказывает бактерицидное, противовоспалительное и ранозаживляющее действие [3].

В литературе отсутствуют данные о применении надземной части посконника коноплевидного (Eupatorium cannabinum L.) в качестве средства, обладающего антигипоксическим действием.

Использование экстракта на 40% этаноле надземной части посконника коноплевидного (Eupatorium cannabinum L.) в качестве антигипоксического средства стало возможным благодаря выявлению экспериментально его новых свойств, а именно повышать устойчивость организма к состояниям, сопровождающимся кислородной недостаточностью.

Новое свойство обнаружено в результате проведенного экспериментального изучения антигипоксического действия экстракта на 40% этаноле надземной части посконника коноплевидного (Eupatorium cannabinum L.).

Антигипоксическое действие экстракта на 40% этаноле надземной части посконника коноплевидного (Eupatorium cannabinum L.) оценивали по влиянию на поведение животных в условиях моделей «гипоксия гермообъема», «открытое поле» и «выработка и воспроизведение условного рефлекса пассивного избегания». Исследование поведения в условиях двух последних моделей выполнялись на фоне гипоксического воздействия, полученного в первой модели.

Существенные признаки изобретения проявили в заявленной совокупности новые свойства, явным образом не вытекающие из уровня техники в данной области и неочевидные для специалиста. Впервые установлено, что в качестве средства, обладающего антигипоксическим действием, можно использовать экстракт на 40% этаноле надземной части посконника коноплевидного (Eupatorium cannabinum L.).

Идентичной совокупности признаков не обнаружено в патентной и научно-медицинской литературе. Предлагаемое средство может быть использовано на практике для повышения устойчивости организма к состояниям, сопровождающимся кислородной недостаточностью.

Исходя из вышеизложенного следует считать предлагаемое изобретение соответствующим условиям патентоспособности «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».

Изобретение будет понятно из следующего описания.

Пример 1

Гипоксическую травму изучали в условиях гипоксии гермообъема [4]. Фармакологические исследования выполняли на белых беспородных мышах-самцах массой 25-30 грамм. Животные 1 категории (конвенциональные линейные) получены из коллекционного фонда лаборатории экспериментального биомоделирования ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН. Эксперименты проводили в осенне-зимний период. Работы в рамках экспериментальных методик выполняли с 10 ч утра и заканчивали к 15 ч. Животных содержали в виварии на обычном рационе кормления при свободном доступе к воде и пище. Умерщвление животных осуществляли передозировкой эфирного наркоза.

Гермокамера представляла собой стеклянный сосуд с выверенным объемом в 500 мл (±<1,0%) и герметически закрывающейся крышкой. Животные помещались в гермокамеру, после чего ее крышка плотно закрывалась. Мыши находились там до появления предсмертного судорожного припадка или первого агонального вдоха (латентное время), после чего их извлекали и давали «раздышаться». Препараты начинали вводить за 5 дней до эксперимента в желудок, контрольным животным вводили воду. В день эксперимента через 1 час после введения препаратов мышей помещали в гермокамеры и фиксировали латентное время. Экспериментальные данные обрабатывали статистически. О достоверности различий судили методом проверки вероятности нулевой гипотезы с использованием t критерия Стьюдента. Различия считали достоверными при p0,05 [5]. Полученные результаты представлены в таблице 1.

Введение экстракта на 40% этаноле посконника коноплевидного (Eupatorium cannabinum L.) увеличивает резистентность животных к гипоксическому воздействию. Эффект зависит от дозы, достоверно повышает латентное время относительно группы гипоксического контроля доза 20 мл/кг 5% настойки на 40% этаноле посконника коноплевидного (Eupatorium cannabinum L.).

Пример 2

Функциональное состояние центральной нервной системы оценивали через 1 час после извлечения мышей из гермокамеры, изучая у них ориентировочно-исследовательское поведение в «Открытом поле» [6, 7].

Экспериментальная установка «Открытое поле» представляет собой камеру размером 40×40×20 см с квадратным полом и стенками белого цвета. Ее пол, разделенный на 16 квадратов, имеет в каждом из них круглое отверстие диаметром 3 см. Сверху камера освещается электрической лампой накаливания мощностью 100 Вт, расположенной на высоте 1 м от пола. Мышь помещали в один из углов камеры и в течение 3 минут регистрировали количество перемещений с квадрата на квадрат (горизонтальная активность), количество вставаний на задние лапки (вертикальная активность), количество обследований отверстий (норковый рефлекс), количество умываний (груминг) и число актов дефекаций по количеству фекальных шариков (болюсов); определяли суммарную двигательную активность, складывая указанные выше показатели и вычисляя коэффициент асимметрии поведения в виде отношения количества горизонтальных перемещений к общей двигательной активности, выраженного в процентах. Экспериментальные данные обрабатывали статистически. О достоверности различий судили методом проверки вероятности нулевой гипотезы с использованием t критерия Стьюдента. Различия считали достоверными при p0,05 [5]. Полученные результаты представлены в таблице 2.

Гипоксическая травма снижает как общую двигательную активность, так и отдельные показатели ориентировочно-исследовательского поведения в модели «Открытое поле» (гипоксический контроль). Профилактическое введение экстракта на 40% этаноле посконника коноплевидного (Eupatorium cannabinum L.) до гипоксического воздействия оказывает антигипоксическое действие, сохраняя показатели ориентировочно-исследовательского поведения мышей в тесте «Открытое поле» на уровне интактного контроля или превышая их. Выраженный антигипоксический эффект оказывают дозы 20 мл/кг и 10 мл/кг.

Пример 3

Второй моделью для оценки влияния веществ на формирование и воспроизведение памятного следа в условиях его нарушения (гипоксическая амнезия) являлась методика условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ) [4, 6]. Исследование выполнялось на белых беспородных мышах-самцах массой 25-30 грамм, I категории, полученных из коллекционного фонда лаборатории экспериментального биомоделирования НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется). Перед выработкой УРПИ животные подвергались гипоксическому воздействию (кроме группы интактного контроля). О качестве рефлекса судили по доле животных с наличием рефлекса (% сохранности рефлекса). Дополнительными показателями, характеризующими условно-рефлекторную деятельность и поведенческий статус, служили количество подходов к входу в темную камеру, количество заходов в темную камеру, время первого подхода к входу в темную камеру, суммарная двигательная активность, которая включала в себя: горизонтальные перемещения, количество вертикальных стоек, эпизодов груминга и число болюсов дефекаций. Животные, которые после помещения в светлый отсек сохраняли неподвижность при подсчете результатов не учитывались. Проверку рефлекса осуществляли через 48 часов после выработки, 7, 14 и 21 суток после нее. В дни проверки сохранности рефлекса животным вводили препарат, чтобы исключить влияние феномена диссоциации, контрольным группам вводили в эквивалентных количествах воду. Экспериментальные данные обрабатывали статистически. О достоверности различий судили методом проверки вероятности нулевой гипотезы с использованием t критерия Стьюдента. Различия считали достоверными при p0,05 [5]. Сохранность УРПИ представлена в таблице 3.

Гипоксическая травма нарушала воспроизведение памятного следа УРПИ (группа гипоксического контроля). У животных, получавших экстракт на 40% этаноле посконника коноплевидного (Eupatorium cannabinum L.) до гипоксического воздействия наблюдается сохранность УРПИ на уровне значений интактного контроля. Наиболее выраженный эффект дают дозы 20 мл/кг и 10 мл/кг.

Таким образом, экспериментальные исследования показали, что экстракт на 40% этаноле надземной части посконника коноплевидного (Eupatorium cannabinum L.) удлиняет латентное время в условиях гипоксии гермообъема, способствует сохранению показателей ориентировочно-исследовательского поведения после гипоксического воздействия в «Открытом поле» и % сохранности УРПИ на уровне значений интактного контроля.

Положительный эффект достигнут благодаря использованию экстракта на 40% этаноле надземной части посконника коноплевидного (Eupatorium cannabinum L.) в качестве антигипоксического средства, что позволило расширить арсенал антигипоксических средств природного происхождения.

Источники информации

1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. – М.: Новая волна, 2002. – T.1. – с.102-104.

2. Шилова И.В., Суслов Н.И., Слепушкина О.П. и др. Ноотропное средство, обладающее антигипоксической активностью. Патент РФ 2314115 от 27.04.2006.

3. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование: Семейство Asteraceae (Compositae). – СПб.: Наука, 1993. – с.114-115.

5. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. – Л.: Медицина, 1963. – С.81-147.

6. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Дж.П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. – М.: Высшая школа, 1991. – с.119-175.

Таблица 2
Влияние настойки посконника (5% на 40% этаноле) на ориентировочно-исследовательское поведение мышей в открытом поле за три минуты наблюдения (X±m, n=9), после гипоксического воздействия, препарат сравнения – водный экстракт лабазника обыкновенного (50 мг/кг).
	Суммарная двигательная активность	Горизонтальные перемещения	Вертикальные стойки	Норковый рефлекс	Эпизоды груминга	Болюсы дефекаций	Коэффициент асимметрии кАП%
Интактный контроль	71,38±10,26	44,25±6,74	5,13±1,27	19,75±3,0	1,5±0,27	0,75±0,49	60,63±3,12
Гипоксический контроль	26,33±10,88*	17,67±7,9*	2,89±1,31	4,89±1,58*	0,89±0,56	0,0±0,0	49,67±10,11
Посконник 0,5 мл/кг	17,56±8,6*	12,89±6,6*	0,78±0,36*	2,33±1,18*	1,56±0,78	0,0±0,0	64,29±11,63
Посконник 2,0 мл/кг	39,67±7,16*	26,78±4,23*	3,78±1,04	7,44±2,16*	1,33±0,44	0,11±0,11	72,0±4,64*+
Посконник 10,0 мл/кг	72,44±8,78+	47,56±5,44+	9,11±1,75+	14,78±2,63+	1,0±0,24	0,0±0,0	66,78±1,96
Посконник 20,0 мл/кг	85,33±7,59+	50,11±5,42+	7,89±0,89*+	26,11±1,87*+	1,22±0,64	0,0±0,0	58,11±1,78
Экстракт лабазника	66,47±7,42+	43,11±4,16+	6,93±2,04+	15,33±1,94+	1,1±0,4	0,0±0,0	63,31±2,57
* – отмечено достоверное различие показателя от его значения у животных в группе интактного контроля при Р<0,05
+ – отмечено достоверное различие показателя от его значения у животных в группе гипоксического контроля при Р<0,05

Таблица 3
Влияние настойки посконника (5% на 40% этаноле) на сохранность УРПИ (Х±m, n=9), после гипоксического воздействия, в %, препарат сравнения – водный экстракт лабазника обыкновенного (50 мг/кг).
	48 часов	7 дней	14 дней	21 день
Интактный контроль	88	88	88	88
Гипоксический контроль	0	0	0	0
Посконник 0,5 мл/кг	78	78	67	44
Посконник 2,0 мл/кг	78	56	67	33
Посконник 10,0 мл/кг	89	78	89	100
Посконник 20,0 мл/кг	100	100	67	44
Экстракт лабазника	100	90	90	81

Формула изобретения

Применение экстракта на 40%-ном этаноле надземной части посконника коноплевидного (Eupatorium cannabinum L.) в качестве средства, обладающего антигипоксическим действием.