Патент на изобретение №2391979
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) ДИГИДРОБРОМИД 2-(3,4-ДИГИДРОКСИФЕНИЛ)-9-ДИЭТИЛАМИНОЭТИЛИМИДАЗО[1,2-a] БЕНЗИМИДАЗОЛА И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ЕГО ОСНОВЕ
(57) Реферат:
Изобретение относится к области медицины, в частности к фармации, и касается применения дигидробромид 2-(3,4-дигидроксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола при производстве лекарственного средства, обладающего противоишемическими, гемореологическими и антирадикальными свойствами, а также фармацевтической композиции, содержащей указанный активный компонент и обладающей указанными выше свойствами. Средство обладает высокой и не обладает выраженными побочными эффектами. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 18 табл., 1 ил.
Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтической химии, фармакологии и технологии лекарственных форм, и направлено на создание лекарственного препарата с противоишемическими, гемореологическими и антирадикальными свойствами.
Техническим результатом изобретения является создание средства, обладающего более высокой противоишемической, гемореологической и антирадикальной активностью. Технический результат достигается дигидробромидом 2-(3,4-диоксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола формулы I
Известно, что дигидробромид 2-(3,4-диоксифенил)-9-диэтил-аминоэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола оказывает церебропротекторное действие при радиационных поражениях (Патент РФ Способ получения дигидробромида 2-(3,4-дигидроксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола заключается в конденсации 1-диэтиламиноэтил-2-аминобензимидазола с 3,4-диметоксифенацилбромидом, последующей циклизации образующегося в результате конденсации бромида 1-диэтиламиноэтил-3-(3,4-диметоксифенацил)-2-аминобензимидазолия в 48%-ной бромистоводородной кислоте (т.кип. 127°С), сопровождающейся деметилированием метоксигрупп и образованием искомого дигидробромида 2-(3,4-дигидроксифенил)замещенного имидазо[1,2-а]бензимидазола (аналогию см. Хим.-фарм. журнал, 2006 г., т.40, Ниже приведен пример получения соединения I. Пример. Дигидробромид 2-(3,4-диоксифенил)-9-этиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола (I). В раствор 2,32 г (10 ммоль) 2-амино-1-диэтиламиноэтилбензимидазола в 25 мл ацетона вносят 2,6 г (10 ммоль) 3,4-диметоксифенацилбромида. Выпавший осадок бромида 2-амино-1-(2-диэтиламиноэтил)-3-(3,4-диметоксифенацил)бензимидазолия отфильтровывают, промывают ацетоном. Выход 4,6 г (93,5%). Т.пл. 182°С (разложение, из спирта). Найдено, %: C 56,2; H 6,4; Br 16,4; N 11,3. C23H30N4O3·HBr. Вычислено, %: C 56,2; H 6,4; Br 16,3; N 11,4. ИК-спектр (вазелиновое масло): 1685 см-1 (C=O). Кипятят 4 г (~8 ммоль) полученного бромида в 160 мл конц. HBr (т.кип.127°С) до полного протекания реакции (контроль – ТСХ: исчезновение пятна исходного имина и промежуточно образующегося 2-(3,4-диметоксифенил)замещенного имидазо[1,2-а]бензимидазола). По охлаждении осадок искомого дигидробромида отфильтровывают, промывают ацетоном. Выход 4,1 г (96%). Кристаллизуется соль из 80%-ного водного спирта в виде белоснежных волокнистых кристаллов, которые после высушивания при 110-120°С имеют т.пл. 289-290°С (разложение). Кристаллогидрат с 1 молекулой воды плавится при 180°С. В ИК-спектре полученного дигидробромида отсутствует полоса поглощения карбонильной группы, присутствующая в ИК-спектре четвертичной соли. Найдено, %: C 47,6; H 5,3; Br 30,0; N 10,7. C21H24N4O2·2HBr. Вычислено, %: C 47,9; H 5,0; Br 30,4; N 10,7. Фармакологические свойства заявленного соединения I. Данное соединение (I) проявляет противоишемические и гемореологические свойства, обладает широким спектром антирадикальной активности. Исследование противоишемической активности соединения I in vivo (модель 4-сосудистой перевязки артерий мозга с реперфузией у крыс) Материалы и методы Опыты выполнены на 40 неинбредных крысах обоего пола массой 180-230 г, которых содержали в условиях вивария с естественным световым режимом на стандартной диете лабораторных животных (ГОСТ Р50258-92) с соблюдением Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997), а также правил лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ. Забой животных проводили согласно требованиям, изложенным в «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1989). Соединение I (5 мг/кг) и препарат сравнения кавинтон (5 мг/кг) вводили однократно внутрибрюшинно за 10 мин перед окклюзией каротидных артерий. Для исследования было сформировано 3 группы: 1) контроль – ложнооперированные крысы; 2) ишемия; 3) животные с ишемией, которым за 10 мин до окклюзии вводили исследуемое вещество.
Смертность в ходе эксперимента колебалась между 25 и 35%. Гибель после термокоагуляции вертебробазилярных артерий составляла не более 10%. После 2-го этапа – наложения окклюзора на каротидные артерии гибели животных не наблюдали. Статистическую обработку данных проводили в пакете Statistica 6.0. па (StatSoft, США) с использованием дисперсионного анализа множественных сравнений и критерия Шеффе (p Результаты. При изучении влияния соединения I на восстановление крыс в реперфузионном периоде после ишемии было установлено, что соединение I превосходило препарат сравнения кавинтон по активности, более выражено восстанавливая нарушенную двигательную активность в 1-е и 2-е сут реперфузии (Таблица 1). Соединение I достоверно улучшало неврологический статус и вызывало его полную нормализацию на 7-е сут наблюдений (Таблица 2), а также практически полное восстановление мышечной силы (Таблица 3). Кавинтон не приводил к полной нормализации неврологического статуса и динамометрии – на 7-е сут дефицит составлял 34% и 23,5% соответственно. Соединение I нормализовало запоминание обучающего задания в тесте УРПИ у животных, перенесших тотальную ишемию мозга, сокращая дефицит памяти до 15,3% (p<0,01) (Таблица 4). Препарат сравнения также оказывал некоторое корректирующее влияние на памятный след, однако дефицит памяти под влиянием кавинтона составлял 50,3%. Таким образом, соединение I превосходит препараты сравнения дибунол и кавинтон по противоишемической активности. Исследование антирадикальной активности соединения I in vitro Материалы и методы В качестве препарата сравнения использовали мексидол (НИИ фармакологии РАМН, Россия). Исследование процессов хемилюминесценции проводили на хемилюминометре «Хемилюминомер-03» (Уфа, Россия), связанном интерфейсом с компьютером. Способность веществ взаимодействовать с липидными радикалами LOO
Способность веществ к перехвату и инактивации пероксильного радикала (ROO Изучаемые вещества вводили в среду инкубации за 1 мин перед инициированием реакции в широком диапазоне концентраций. Результаты оценивали статистически в программе Statistica 6.0 с использованием t-критерия Стьюдента с поправкой Бонферони (t). Отличия от контроля во всех группах считали статистически значимыми при Р Результаты Исследуемое вещество I дозозависимо подавляло образование липопероксильных радикалов (Таблица 5) и по величине ИК50 почти на два порядка превосходило мексидол по активности. Соединение I почти в 15 раз превосходило мексидол по способности инактивировать активные формы кислорода в реакции Fe2+-индуцированной хемилюминесценции в присутствии люминола (Таблица 6). У соединения I отмечалась выраженная ингибирующая активность в отношении супероксидного радикала как в реакции с кверцетином (Таблица 7), так и при исследовании хемилюминесценции в системе ксантин-ксантиноксидаза в присутствии люцигенина (Таблица 8). Мексидол по способности к перехвату супероксида уступал соединению I более чем на порядок. Исследуемое соединение I дозозависимо угнетало образование пероксильных радикалов (Таблица 9), регистрируемых с помощью хемилюминесценции, сопровождающей термическое разложение АБАП, почти в десять раз превосходя мексидол по величине ИК50. Таким образом, соединение I превосходило мексидол более чем в десять раз по способности перехватывать липопероксильный, супероксидный и другие активные формы кислорода и АБАП-радикалы. Исследование гемореологических свойств соединения I in vitro и in vivo Материалы и методы
Исследование влияния соединения I и препарата сравнения мексидола на агрегацию тромбоцитов “in vivo” проводили в опытах на 30 интактных нелинейных крысах массой 220-260 г. Соединение I вводили в дозах 30 мг/кг внутрижелудочно в течение 3-х дней, мексидол вводили в эквимолярной дозе. Контрольные животные получали растворитель (дистиллированная вода). Забор крови из брюшной аорты осуществляли под нембуталовым (40 мг/кг) наркозом через 2 часа после введения соединений. Агрегацию тромбоцитов изучали по описанной выше методике с расчетом степени максимальной агрегации и степени дезагрегации (как разность между максимальной агрегацией тромбоцитов и агрегацией на 5-й мин), и скорость агрегации тромбоцитов (по величине максимального наклона кривой), выраженные в процентах к контролю, при этом степень агрегации тромбоцитов в контроле принимали за 100%. Подсчет количества тромбоцитов проводили на счетчике модели 220LA (НПФ “Биола”, Москва) (З.А.Габбасов и др., 1989). -1), моделирующих различную интенсивность кровотока в сосудах. При этом вязкость в области малых скоростей сдвига служит характеристикой агрегации эритроцитов, а в области более высоких скоростей сдвига – показателем их деформируемости. Все исследуемые образцы приводились к единому гематокриту 45 у.е., измеряемому на микрогемоцентрифуге МГЦ-8 (8000 об/мин, 2 мин). Исследования изучаемых соединений in vitro проводили в концентрациях от 1×10-4 до 1×10-6 М. Соединение I и препарат сравнения пентоксифиллин растворяли в физиологическом растворе, непосредственно перед исследованием, и 20 мкл раствора добавляли к исследуемой пробе перед термостатированием. В контрольные образцы вносили эквивалентное количество физиологического раствора (37°С). Кровь забирали из локтевой вены здоровых доноров и стабилизировали 3,8% раствором цитрата натрия в соотношении 1:9. Изучение влияния соединения I на реологические свойства крови при реперфузионном поражении головного мозга проводили на 40 нелинейных крысах-самцах массой 240-280 г, наркотизированных хлоралгидратом в дозе 400 мг/кг. Измерение вязкости крови проводили как описано выше. Глобальную ишемию головного мозга воспроизводили билатеральной окклюзией общих сонной артерий в сочетании с контролируемой гипотензией (Методические указания по экспериментальному изучению перпаратов для лечения нарушений мозгового кровообращения и мигрени: Метод, рекомендации. / Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ; Сост.: Р.С.Мирзоян, А.С.Саратиков, М.Б.Плотников и др. – М., 2000. – 398 с.). Предварительно артериальное давление снижалось под влиянием забора крови из яремных вен до 50 мм рт.ст. (полученные образцы использовались для оценки исходных реологических показателей). Соединение I в дозе 10 мг/кг и пентоксифиллин в дозе 8 мг/кг вводили перорально за 30 мин до ишемии. Контрольным группам (ишемия – контроль и ложнооперированные животные) вводили физиологический раствор в аналогичном объеме. В качестве нормального контроля использовалась группа ложнооперированных животных. Через 1 час ишемии производили снятие лигатур с сонных артерий, что обеспечивало реперфузию головного мозга. Спустя час после реперфузии кровь забирали из нижней полой вены. Кровь стабилизировали 3,8% раствором цитрата натрия в соотношении 1:9. Для изучения влияния веществ на оксидативный гемолиз эритроцитов забор крови производили из ушной вены кролика в пробирки с 3,8% раствором натрия цитрата в соотношении 1:9. Эритроциты трехкратно отмывали трис-NaCl-буфером pH 7,4, Суспензия эритроцитов в буфере приводилась к единому гематокриту 45 у.е. Соединение I и препарат сравнения мексидол вводили в эритроцитарную суспензию непосредственно перед термостатированием в дозах 10-4, 10-5 и 10-6 Статистическую обработку результатов экспериментов производили в пакете прикладных программ «Statistika 6.0» с использованием парного критерия Стьюдента при предварительной проверке выборки на нормальность распределения или критерия Манна-Уитни. Результаты. При изучении влияния соединения I и препаратов сравнения мексидола и ацетилсалициловой кислоты на агрегацию тромбоцитов in vitro, индуцированную 5 мкМ АДФ, было установлено (Таблица 10), что соединение I, ЭК50 которого составила 3,30×10-4 М, превосходило препараты сравнения по активности. Было установлено, что соединение I обладает способностью дозозависимо ингибировать АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов и в условиях целого организма (Таблица 11). Оно уменьшало как степень максимальной агрегации тромбоцитов, так и скорость образования агрегатов, а также проявляло дезагрегирующие свойства, практически не меняя количество тромбоцитов, что свидетельствует о том, что изменение способности тромбоцитов к агрегации связано не с изменением их числа, а с возникшей под действием соединения I гипореактивностью кровяных пластинок. Мексидол уступал соединению I как по влиянию на степень максимальной агрегации тромбоцитов и скорость образования агрегатов, так и по влиянию на дезагрегацию. Соединение I дозозависимо снижало вязкость крови доноров при всех скоростях сдвига (Таблица 12). Так при скорости сдвига 200 сПз соединение I снижало вязкость крови на 4,24%, а пентоксифиллин – на 3,15%, что свидетельствует о влиянии соединений на пластичность мембраны эритроцитов. При снижении концентрации веществ в пробе при указанной скорости сдвига эффективность соединения I снижается и составляет 1,32%, а пентоксифиллин практически не оказывает влияния на вязкость крови. Со снижением скорости сдвига влияние соединения I на данный параметр увеличивается, являясь достоверным в концентрациях вещества 1×10-4 и 1×10-5 М. Препарат сравнения, в указанных концентрациях, оказывается практически не эффективным. Таким образом, наибольший эффект соединения I на вязкость крови доноров проявляется при низких скоростях сдвига, что подтверждается статистически достоверными изменениями индекса агрегации. Соединение I также достоверно снижало вязкость крови у крыс с экспериментальной ишемией головного мозга особенно при низких скоростях сдвига (Таблица 13) (на 30% по сравнению с ишемизированной группой животных), и его эффект был сравним с пентоксифиллином. При инкубировании в течение 2 ч в присутствии гидрофильного радикального инициатора АБАП можно было наблюдать существенный гемолиз эритроцитов по сравнению с контролем, который составил 81% (Таблица 14) (p<0,05) по сравнению с 29% в контроле с буфером. Соединение I в максимальной дозе 100 мкМ в суспензию эритроцитов приводило к дозозависимому достоверному снижению гемолиза до 39,3%. Мексидол оказался менее эффективен, чем соединение I в соответствующих концентрациях.
Создание фармацевтической композиции для получения таблеток Разработана фармацевтическая композиция, содержащая в качестве действующего вещества – дигидробромид 2-(3,4-диоксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола и в качестве вспомогательных веществ коллидон, лактозу, поливинилпирролидон, тальк, кальция стеарат и натрия метабисульфит. Исследованы композиции при следующем соотношении ингредиентов, вес (г):
Для получения фармацевтической композиции используют метод прямого прессования смеси лекарственного вещества и вспомогательных веществ. Для этого отвешивают все ингредиенты из расчета на 100 кг таблеточной массы и просеивают через сито с диаметром отверстий 0,25 мм, после чего смешивают в смесителе в следующей последовательности: лактоза, натрия метабисульфит, соединение I, поливинилпирролидон низкомолекулярный медицинский, коллидон, тальк и кальция стеарат. Полученную смесь проверяют на однородность смешения: действующего вещества в таблеточной массе должно быть не менее 58,5% и не более 59,0%. При получении положительного результата таблеточную массу прессуют на таблеточном прессе типа РТМ-24М при давлении прессования 120 МПа. С целью стандартизации таблеток согласно ОСТ 91500.05.001-00 выбраны следующие критерии: описание, подлинность, средняя масса и однородность по массе, тальк, распадаемость, посторонние примеси, микробиологическая чистота и количественное определение соединения I (Таблица 15).
Был разработан состав защитного пленочного покрытия, обеспечивающего стабильность при хранении и растворимость в желудке. Из пленкообразователей, обеспечивающих желудочно-растворимые покрытия, нами апробированы следующие: коллидон-30, плаздон S-630, метилцеллюлоза МЦ-16, а также их комбинации. В качестве фотозащитных добавок использованы: тартразин, метиловый оранжевый, двуокись титана и их комбинации. Нанесение покрытия проводили в дражировочном котле путем распыления растворов пленкообразователей с последующей сушкой при t не больше 60°С до увеличения средней массы таблеток в сухом виде на 5%. Состав покрытий приведен ниже (Таблица 16).
Качество нанесенных покрытий оценивали по следующим показателям: 1. Внешний вид (равномерность покрытия, качество). 2. Распадаемость (мин, вода 37°С). 3. Фотозащитные свойства (отсутствие изменения цвета после снятия покрытия у таблеток, хранившихся при облучении лампой дневного света 10 Вт в течение 10 суток). 4. Отклонение от средней массы (не более 5%). Таблица 17 содержит результаты оценки качества покрытий.
Как следует из таблицы, оптимальными качествами обладает состав Предлагаемое соотношение действующих, вспомогательных веществ и покрытия является оптимальным, обеспечивает получение качественных таблетированных лекарственных препаратов соединения I и достижение необходимого терапевтического эффекта. Создание фармацевтической композиции для получения лиофилизированного порошка для инъекций Разработана фармацевтическая композиция, содержащая в качестве действующего вещества дигидробромида 2-(3,4-диоксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола и в качестве вспомогательных веществ поливинилпирролидон и лимонную кислоту. Исследованы композиции при следующем соотношении ингредиентов, вес (г):
Изучение биодоступности фармацевтической композиции Эксперименты по изучению фармакокинетики субстанции соединения I и ее фармацевтической композиции проводилось на 10 кроликах-самцах породы шиншилла массой 2,7-3,7 кг, содержавшихся в условиях вивария на стандартной диете. Накануне эксперимента кролики голодали в течение 12 часов без ограничения доступа к воде. Таблетки и субстанцию вводили животным внутрижелудочно через резиновый зонд. Субстанцию вводили в аналогичной дозе, содержащейся в таблетированных лекарственных формах. Кровь забирали из ушной вены самотеком перед введением препарата и затем через определенные временные интервалы после введения. Между экспериментами делали двухнедельный перерыв. В качестве стандарта использовали субстанцию в дозе 54 мг/кг. Забор проб крови производили через 0,5; 1; 1,5; 3; 6; 9 и 12 часов после введения. Содержание соединения I определяли методом ВЭЖХ на жидкостном хроматографе «Gilson» серии 6000 (Франция) с флуоресцентным детектором на колонке С18 4,6×250 мм, 5 µм. Подвижная фаза составляет смесь ацетонитрила (60%) и ацетатного буфера с pH 5,0 (40%). Длина волны возбуждения 270 нм, длина волны эмиссии 330 и 410 нм. Чувствительность метода составляет для эноксифола 1 µг/мл и для продуктов его окисления 100 nг/мл. Идентификацию исследуемых веществ и расчет их концентрации проводили по методу абсолютных стандартов. Время удерживания для соединения I составило 4,4-4,8 мин, для продукта окисления – 5,8-6,0 мин.
Содержание соединения I в крови кроликов при введении субстанции и таблетки с фотозащитным покрытием в дозе 50 мг приведены на чертеже, где по оси абсцисс приведено время (час), по оси ординат – концентрация мкг/мл. Как видно из чертежа, при введении таблетки с фотозащитным покрытием фармакокинетическая кривая практически не отличается от таковой при введении субстанции. Фармакокинетические параметры субстанции и таблетированной лекарственной формы эноксифола представлены в Таблица 18. Относительная биодоступность (f отн.) таблетки с фотозащитным покрытием составляет 95%.
Таким образом, при проведении биофармацевтического анализа установлено, что таблетированная лекарственная форма является биоэквивалентной по отношению к субстанции и не препятствует высвобождению и всасыванию лекарственных веществ в желудочно-кишечном тракте. Таблетки соединения I с фотозащитным пленочным покрытием обладают высокой биологической доступностью (выше 90%). Фармакокинетические параметры при введении лекарственной формы практически не отличаются от таковых при введении субстанции.
Формула изобретения
1. Применение дигидробромида 2-(3,4-дигидроксифенил)-9-диэтиламино-этилимидазо[1,2-а]бензимидазола формулы 2. Фармацевтическая композиция, обладающая противоишемическими, гемореологическими и антирадикальными свойствами, содержащая дигидробромид 2-(3,4-дигидроксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола в эффективном количестве и фармацевтически приемлемый носитель. 3. Фармацевтическая композиция по п.2, отличающаяся тем, что носитель представляет собой вещество, выбранное из группы коллидон, лактоза, поливинилпирролидон, тальк, кальция стеарат, натрия метабисульфит и их комбинации. 4. Фармацевтическая композиция по любому из пп.2 или 3, отличающаяся тем, что содержит дигидробромид 2-(3,4-дигидроксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола в количестве 0,05-1,0 г на единичную дозу. 5. Фармацевтическая композиция по п.3, отличающаяся тем, что содержит следующее количественное соотношение компонентов, г:
6. Фармацевтическая композиция по п.2, отличающаяся тем, что она выполнена в виде лиофилизированного порошка для инъекций. 7. Фармацевтическая композиция по п.6, отличающаяся тем, что в качестве носителя она содержит поливинилпирролидон и лимонную кислоту. 8. Фармацевтическая композиция по любому из пп.6 или 7, отличающаяся тем, что содержит дигидробромид 2-(3,4-дигидроксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола в количестве 0,01-2,0 г на единичную дозу. 9. Фармацевтическая композиция по п.7, отличающаяся тем, что содержит следующее количественное соотношение компонентов, г:
10. Фармацевтическая композиция по п.5, отличающаяся тем, что она выполнена в виде твердой лекарственной формы и покрыта защитным пленочным покрытием, содержащим следующее количественное соотношение компонентов, г:
РИСУНКИ
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1. – P.59-66).
0,05 или p
исследовали на модели Fe2+4 (чда, Украина) в конечной концентрации 2,5 мМ при интенсивном перемешивании и t 37°C, после чего в течение 10 мин измеряли кинетику хемилюминесценции.
406 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм. Степень ингибирования реакции рассчитавали: % инг=100-(
Dвещ/
