Патент на изобретение №2167940
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗНОГО МИКРОБА
(57) Реферат: Изобретение относится к медицинской микробиологии и биотехнологии и может быть использовано для выделения псевдотуберкулезного микроба из инфицированного материала. Питательная среда содержит питательную основу гидролизаты казеина и кормовых дрожжей, агар, натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный, марганец сернокислый, натрий лимоннокислый, глюкозу, мочевину, желчь, бромтимоловый синий и дистиллированную воду. Питательная среда позволяет получить рост эпидемически значимых рYV+ штаммов псевдотуберкулезного микробоа с различным плазмидным спектром в виде колоний диаметром до 1,5 мм через 24 ч инкубации при температуре 28 и 37oC, обеспечивает рост 5 – 6 колоний при посеве 10 микробных клеток. Использование среды обеспечивает повышение чувствительности и скорости роста культур. 2 табл. Изобретение относится к медицинской микробиологии и биотехнологии и может быть использовано для выделения псевдотуберкулезного микроба из инфицированного материала. Совершенствование лабораторной диагностики псевдотуберкулеза связано с применением различных дифференциально-диагностических питательных сред для выделения псевдотуберкулезного микроба. Но сроки роста возбудителя на применяемых средах достаточно длительны, и поэтому существует необходимость в разработке чувствительных питательных сред, на которых наблюдается отчетливо различимый рост возбудителей псевдотуберкулеза с различным плазмидным спектром через 24-26 ч. Известна питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза, содержащая панкреатический гидролизат рыбной муки, желчь, глюкозу, мочевину, натрий хлористый, натрий углекислый, бромтимоловый синий, агар (патент N 2101342 РФ). Недостаток известной среды заключается в том, что через 24 ч инкубации при температуре 28oC на среде отмечается рост псевдотуберкулезного микроба в виде колоний диаметром менее 0,5 мм. Рост колоний диаметром 1,5-2 мм наблюдается только через 48 ч. Кроме того, при 37oC среда обеспечивает рост не всех эпидемически значимых клонов возбудителя псевдотуберкулеза. Целью изобретения является повышение чувствительности среды и скорости роста бактерий, культивируемых на ней. Эта цель достигается тем, что питательная среда для выделения псевдотуберкулезного микроба содержит питательную основу (гидролизаты казеина и кормовых дрожжей), агар, минеральные соли (натрий фосфорнокислый, калий фосфорнокислый, марганец сернокислый), натрий лимоннокислый, глюкозу, мочевину, желчь, бромтимоловый синий и дистиллированную воду при следующем количественном соотношении компонентов, г: Гидролизат казеина (порошок) – 11,0 – 13,0 Гидролизат кормовых дрожжей (порошок) – 1,1 – 1,3 Натрий фосфорнокислый двузамещенный – 7,8 – 8,2 Калий фосфорнокислый однозамещенный – 1,9 – 2,1 Натрий лимоннокислый – 1,9 – 2,1 Марганец сернокислый – 0,018 – 0,022 Глюкоза – 4,8 – 5,2 Мочевина – 2,4 – 2,6 Желчь (порошок) – 4,8 – 5,2 Бромтимоловый синий – 0,126 – 0,130 Агар – 11,0 – 13,0 Вода дистиллированная – До 1 л Сопоставительный анализ с прототипом показал, что предлагаемая питательная среда отличается от известной тем, что она содержит гидролизаты казеина и кормовых дрожжей, натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный, натрий лимоннокислый, марганец сернокислый в предлагаемых количественных соотношениях компонентов. Таким образом, данная питательная среда соответствует критерию изобретения “новизна”. Проведенный анализ патентной и научно-технической литературы показал, что предлагаемое техническое решение отличается не только от прототипа, но и других технических решений в данной и смежных отраслях. Так, авторами не найдена питательная среда для выделения псевдотуберкулезного микроба, которая содержала бы предлагаемые ингредиенты в предлагаемом количественном соотношении компонентов. А именно, данный состав среды позволяет повысить ее чувствительность в отношении штаммов псевдотуберкулезного микроба с различным плазмидным спектром и добиться его роста в виде колоний диаметром до 1,5 мм через 24 ч инкубации при температуре 28 и 37oC. Данная среда может быть использована в медицинской микробиологии. Питательную среду готовят смешиванием сухих компонентов в следующем количественном соотношении, г: Гидролизат казеина (порошок) – 11,0 – 13,0 Гидролизат кормовых дрожжей (порошок) – 1,1 – 1,3 Натрий фосфорнокислый двузамещенный – 7,8 – 8,2 Калий фосфорнокислый однозамещенный – 1,9 – 2,1 Натрий лимоннокислый – 1,9 – 2,1 Марганец сернокислый – 0,018 – 0,022 Глюкоза – 4,8 – 5,2 Мочевина – 2,4 – 2,6 Желчь (порошок) – 4,8 – 5,2 Бромтимоловый синий – 0,126 – 0,130 Агар – 11,0 – 13,0 Вода дистиллированная – До 1 литра Полученную навеску среды размешивают в 1 л дистиллированной воды, доводят до кипения при перемешивании, кипятят в течение 5-7 мин до полного расплавления агара, охлаждают до температуры 45-50oC, тщательно взбалтывают и разливают в стерильные чашки Петри. Засеянные чашки инкубируют при температуре 28 или 37oC в течение 24 ч. Пример 1. Питательную среду готовят, как описано выше, при этом используют следующий количественный состав, г: Гидролизат казеина (порошок) – 11,0 Гидролизат кормовых дрожжей (порошок) – 1,1 Натрий фосфорнокислый двузамещенный – 7,8 Калий фосфорнокислый однозамещенный – 1,9 Натрий лимоннокислый – 1,9 Марганец сернокислый – 0,018 Глюкоза – 4,8 Мочевина – 2,4 Желчь (порошок) – 4,8 Бромтимоловый синий – 0,126 Агар – 11,0 Вода дистиллированная – До 1 литра Засеянные чашки инкубируют при температуре 28 или 37oC в течение 24 ч. Пример 2. Питательную среду готовят, как описано выше, при этом используют следующий количественный состав, г: Гидролизат казеина (порошок) – 13,0 Гидролизат кормовых дрожжей (порошок) – 1,3 Натрий фосфорнокислый двузамещенный – 8,2 Калий фосфорнокислый однозамещенный – 2,1 Натрий лимоннокислый – 2,1 Марганец сернокислый – 0,022 Глюкоза – 5,2 Мочевина – 2,6 Желчь (порошок) – 5,2 Бромтимоловый синий – 0,130 Агар – 13,0 Вода дистиллированная – До 1 литра Засеянные чашки инкубируют при температуре 28 или 37oC в течение 24 ч. Чувствительность предлагаемой среды и скорость роста возбудителя псевдотуберкулеза оценивали путем посева 10 и 100 микробных клеток суточной агаровой культуры штаммов псевдотуберкулезного микроба с различным плазмидным спектром через 24-48 ч инкубации при температуре 28 и 37oC. Результаты роста псевдотуберкулезного микроба на предлагаемой среде приведены в табл. 1 и 2. Среда значительно ускоряет рост возбудителя псевдотуберкулеза: через 24 ч наблюдается рост колоний диаметром до 1,5 мм; на среде-прототипе в эти же сроки размер колоний менее 0,5 мм. Предлагаемая среда обладает высокой чувствительностью, обеспечивающей рост 5-6 колоний при посеве 10 микробных клеток через 24 ч инкубации. Среда обеспечивает рост эпидемически значимых pYV+ штаммов псевдотуберкулезного микроба при 37oC через 24 ч инкубации, тогда как на среде-прототипе при этой температуре даже через 48 ч инкубации рост полностью отсутствует. Формула изобретения
Гидролизат казеина (порошок) – 11,0-13,0 Гидролизат кормовых дрожжей (порошок) – 1,1-1,3 Натрий фосфорнокислый двузамещенный – 7,8-8,2 Калий фосфорнокислый однозамещенный – 1,9-2,1 Натрий лимоннокислый – 1,9-2,1 Марганец сернокислый – 0,018-0,022 Глюкоза – 4,8-5,2 Мочевина – 2,4-2,6 Желчь (порошок) – 4,8-5,2 Бромтимоловый синий – 0,126-0,130 Агар – 11,0-13,0 Вода дистиллированная – До 1 л РИСУНКИ
MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 26.05.2002
Номер и год публикации бюллетеня: 32-2003
Извещение опубликовано: 20.11.2003
|
||||||||||||||||||||||||||
