Патент на изобретение №2384327

(54) ПРОТИВОИШЕМИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО

(57) Реферат:

Предложено применение 4-(2-гидроксиэтил)фенола (n-тирозола) в качестве лекарственного средства, обладающего противоишемическими свойствами. Внутривенное введение n-тирозола увеличивает выживаемость животных, перенесших ишемию миокарда с реперфузией, уменьшает зону ишемии миокарда и способствует более высокой сохранности ткани миокарда. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается средства, обладающего противоишемическими свойствами.

Известны средства, проявляющие противоишемические свойства: триметазидин [1, 2], милдронат [2, 3], эмоксипин [4], мексидол [5].

Наиболее близким лекарственным средством (прототипом) является мексидол, обладающей противоишемическими и антиоксидантными свойствами [5-7].

Задачей изобретения является расширение номенклатуры противоишемических средств.

Поставленная задача решается применением 4-(2-гидроксиэтил)-фенола (n-тирозола) в качестве противоишемического средства.

Известно, что n-тирозол обладает антиоксидантными, гемореологическими, антигипоксическими и антитромбоцитарными свойствами [8-13].

Использование n-тирозола как противоишемического средства в литературе не описано.

Принципиально новым в предлагаемом изобретении является то, что в качестве противоишемического средства используется n-тирозол. Данное свойство его явным образом не вытекает из уровня техники в данной области и неочевидно для специалиста. n-Тирозол можно использовать для лечения больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями.

Таким образом, данное техническое решение соответствует условиям патентоспособности «новизна», «изобретательский уровень», «промышленная применимость».

Материал и методы

Эксперименты по изучению противоишемических свойств n-тирозола проводили на 44 крысах-самцах Вистар массой 200-250 г. Животные были разделены на 3 группы: 18 крысам внутривенно вводили физиологический раствор в эквиобъемных количествах (контроль), 13 крысам внутривенно вводили мексидол в дозе 10 мг/кг, 13 крысам внутривенно вводили n-тирозол в дозе 20 мг/кг.

Противоишемическое свойства n-тирозола и мексидола исследовали с помощью электрокардиографического (ЭКГ) и морфологического методов.

Для создания ишемии миокарда у наркотизированных метогекситалом натрия (100 мг/кг внутрибрюшинно) крыс после интубирования и подключения к аппарату искусственной вентиляции легких (ИВЛ) АИД-2 накладывали лигатуру на левую коронарную артерию по методу А.Х.Когана [14] без нарушения топографии сердца в грудной клетке. Через 45 мин лигатуру развязывали, ушивали рану, помещая концы лигатуры под кожу. ИВЛ отключали после восстановления самостоятельного дыхания; интубационную трубку извлекали после появления произвольных движений (рефлекса переворачивания). n-Тирозол, мексидол или эквиобъемное количество физиологического раствора (контроль) вводили внутривенно на 10 мин ишемии, через 4 и 22 ч после начала реперфузии.

Через 25 часов после реперфузии крыс вновь наркотизировали, регистрировали ЭКГ, подключали ИВЛ и затягивали лигатуру. Для выявления зоны гипоперфузии внутривенно болюсом вводили 0,2 мл 5% раствора красителя patent blue violet («Sigma») и через 10-20 с извлекали сердце. Участки миокарда с сохраненной перфузией окрашивались в зеленый цвет, неперфузируемые оставались неокрашенными.

Поперечные срезы сердца толщиной 300 мкм приготавливали на замораживающем микротоме. Полученные срезы (39-42 – в зависимости от размеров сердца) распределяли по 3 предметным стеклам, размещая на каждое по одному из трех смежных срезов. Срезы на одном стекле оставляли в нативном виде (для оценки зоны гипоперфузии), срезы на двух других стеклах окрашивали нитросиним тетразолием (НСТ) («Sigma») по Зелигману и Рутенбергу [15] для выявления в ткани дегидрогеназной активности. Срезы заключали в глицериново-желатиновый гель и сканировали. Оценку размера зон гипоперфузии и изменения дегидрогеназной активности проводили с использованием программы Adobe Photoshop CS2.

Окрашивание срезов НСТ показало, что в зонах миокарда, подвергшихся 45-минутной ишемии, присутствуют участки с различной степенью снижения дегидрогеназной активности; при этом, как правило, участки с отсутствием активности и резко сниженной активностью мозаично располагались среди зон с менее значительным изменением ферментативной активности. Наблюдаемое нами неравномерное изменение активности дегидрогеназ в зоне, подвергшейся 45-минутному ишемическому воздействию, является отражением высоких возможностей коллатерального кровоснабжения у крыс [14]. Поэтому за зону инфаркта условно принимали зоны с резким снижением дегидрогеназной активности. Для этого на срезах миокарда выделяли участки, суммарная интенсивность окраски которых была снижена в 2,5 раза и более относительно интактных областей миокарда.

На протяжении всего эксперимента проводили ЭКГ-мониторинг и размер зоны ишемизированных кардиомиоцитов оценивали через 25 ч после реперфузии также по данным ЭКГ.

Статистическую обработку результатов проводили стандартными методами с применением t-критерия Стъюдента и критерия ² с помощью пакета программ «Statistica for Windows 5.0».

Результаты исследований представлены в примерах 1-3.

Пример 1. В контрольной группе животных в течение 1 сут после восстановления кровоснабжения миокарда левого желудочка погибло 7 крыс из 18 (39%), летальный исход во всех случаях наступал в первые 2-3 ч реперфузии (табл.1).

В этой группе крыс через 1 сут после возобновления перфузии миокарда левого желудочка на ЭКГ наблюдалось появление патологического зубца Q, свидетельствующего о наличии некротических изменений в миокарде, и снижение амплитуды зубца Т относительно исходных значений. Снижение вольтажа зубца Т в контрольной группе было весьма значительным и обусловлено наличием у 5 животных из 11 на ЭКГ отрицательного зубца Т (табл.2). Присутствие в подострой стадии инфаркта миокарда на ЭКГ отрицательного зубца Т характеризует наличие зоны ишемизированных кардиомиоцитов, окружающих область некроза [16]. Через 1 сут после восстановления кровоснабжения миокарда в контрольной группе сохранялось существенное снижение амплитуды зубца R относительно исходных значений (табл.2), характеризующее нарушение процесса деполяризации желудочков вследствие выключения части миокарда из процессов возбуждения [16].

Зона гипоперфузии в контрольной группе занимала 32,1±2,2%. Зона резко сниженой дегидрогеназной активности составила в среднем 23,0±2,0% от общей площади срезов миокарда и занимала 72,7±5,1% от площади зоны гипоперфузии (табл.3).

Пример 2. В группе крыс с введением мексидола погибли 3 крысы из 13 (23%) (табл.1).

В этой группе крыс через 1 сут после реперфузии зубец Q на ЭКГ отмечен у 5 животных из 10, что соответствует показателям контроля. Средняя величина зубца Т не отличалась от контрольных значений, отрицательный зубец Т отмечен у 4 животных из 10. Снижение зубца R через 1 сут после реперфузии относительно исходных значений не носило достоверного характера (табл.2).

Зона гипоперфузии в группе животных, получавших мексидол, занимала 36,9±3,8% от общей площади поперечных срезов миокарда. Зона резко сниженной дегидрогеназной активности составила 15,5±2,8% от общей площади миокарда и 43,5±8,1% от площади зоны гипоперфузии и была на 29% меньше, чем в контрольной группе (табл.3).

Таким образом, внутривенное введение мексидола приводило к повышению выживаемости животных, перенесших ишемию миокарда с реперфузией. Применение мексидола у крыс в период острой ишемии миокарда с последующей реперфузией, судя по данным ЭКГ, уменьшает зону ишемии миокарда и способствует более высокой по сравнению с контролем сохранности ткани миокарда в период ишемии с последующей реперфузией.

Пример 3. В группе крыс с введением n-тирозола погибло 1 животное из 13 (8%) (табл.1).

В группе животных с введением n-тирозола через 1 сут после реперфузии миокарда частота встречаемости зубца Q на ЭКГ после эпизода ишемии-реперфузии в опытной группе была аналогична контрольным показателям. Снижение амплитуды зубца Т было менее выраженным, чем в контроле; частота наблюдений отрицательного зубца Т в группе с введением n-тирозола была также достоверно ниже контрольных значений (1 из 12). В этой группе крыс выявлялась отчетливая тенденция (p<0,1) к нормализации амплитуды зубца R относительно контрольной группы, а снижение этого показателя от носительно исходных значений через 1 сут не носило достоверного характера (табл.2).

Зона гипоперфузии в группе животных, получавших n-тирозол, занимала 31,9±2,3% от общей площади поперечных срезов миокарда. Зона резко сниженной дегидрогеназной активности составила 16,7%±1,8% от общей площади миокарда и 53,7±6,3% от площади зона гипоперфузии и была на 19% меньше, чем в контрольной группе (табл.3).

Таким образом, внутривенное введение n-тирозола значимо увеличивало выживаемость животных, перенесших ишемию миокарда с реперфузией, как по сравнению с контролем, так и с группой животных, получавших мексидол. Введение n-тирозола крысам в период острой ишемии миокарда с последующей реперфузией, судя по данным ЭКГ, уменьшает зону ишемии миокарда и способствует более высокой по сравнению с контролем сохранности ткани миокарда в период ишемии с последующей реперфузией.

Источники информации, принятые во внимание

6. – С.18-25.

2. Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств. – М.: «РЛС-2007», 2006. – Вып.15. – С.573, 891.

1. – С.22-25.

4. Большая Российская энциклопедия лекарственных средств – М.: Ремедиум, 2001. – С.770.

4. – С.366-368.

3. – С.14-17.

9. – С.814-815.

1. – С.67-69.

1. – С.67-69.

12. Патент РФ 2239423 «Гемореологическое и антитробоцитарное средство».

3. – С.79-81.

15. Пирс Э. Гистохимия. – М.: Изд-во иностранной литературы, 1956. – 488 с.

16. Мурашко В.В., Струтынский В.В. Электрокардиография. – М.: МЕДпресс, 2000. – 312 с.

Формула изобретения

Применение 4-(2-гидроксиэтил)фенола в качестве противоишемического средства.