Патент на изобретение №2380894

Published by on




РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ



ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(19) RU (11) 2380894 (13) C2
(51) МПК

A01H15/00 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

Статус: по данным на 17.09.2010 – может прекратить свое действие

(21), (22) Заявка: 2008111282/13, 26.03.2008

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

26.03.2008

(43) Дата публикации заявки: 10.10.2009

(46) Опубликовано: 10.02.2010

(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске:
SU 1790350 A3, 23.01.1993. SU 1311673 A1, 23.05.1987. RU 2175189 C2, 27.10.2001. RU 2120740 C1, 27.10.1998. US 4536474 A, 20.08.1985.

Адрес для переписки:

107045, Москва, а/я 102, Международный фонд технологий и инвестиций

(72) Автор(ы):

Лобакова Елена Сергеевна (RU),
Смирнов Иван Алексеевич (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Общество с ограниченной ответственностью “Инновационная биологическая компания” (RU)

(54) СПОСОБ СТЕРИЛИЗАЦИИ ЭКСПЛАНТОВ ЛИШАЙНИКА ИСЛАНДСКИЙ МОХ (Cetraria islandica (L.) ACH.)

(57) Реферат:

Экспланты лишайника Исландский мох (Cetraria islandica) сначала обрабатывают этанолом в концентрации от 3 до 98%, а затем – этаноловым экстрактом усниновой кислоты в концентрации 10-1000 мг/мл. При общем времени стерилизации в течение от 5 минут до 2 часов достигается значительное снижение поражения эксплантов контаминантными микроорганизмами без повреждения самих симбионтов лишайников. 1 табл.

Изобретение относится к области биологии, в частности к области биотехнологии, экспериментальной лихенологии, микробиологии, и может быть использовано в фармацевтической и пищевой промышленности, парафармацевтике, ветеринарии.

Уровень техники

Для высших растений разработаны методы стерилизации эксплантов (Бутенко Р.Г., 1999. Биология клеток растений in vitro и биотехнологии на их основе. – M: ФБК-пресс, 159 с.).

В патентной и научно-технической литературе нет других упоминаний о стерилизации лишайниковых эксплантов.

Задачей настоящего изобретения является создание нового способа стерилизации лишайниковых эксплантов, который обладает следующими качествами: снижает поражение эксплантов контаминантными микроорганизмами (минимум на 10%), не повреждает самих симбионтов лишайников.

Поставленная задача решается созданием нового способа стерилизации эксплантов лишайника Исландский мох (Cetraria islandica}, заключающегося в в последовательной обработке лишайниковых эксплантов стерилизующими агентами, отличающейся тем, что в качестве стерилизующих агентов используют последовательную обработку этанолом (в концентрации от 3 до 98%) и этаноловым экстрактом усниновой кислоты (концентрация от 10 до 1000 мг/мл) при времени обработки от 5 минут до 2 часов

Выход за пределы по последовательности использования специфических и неспецифических стерилизующих агентов и их концентрации приводит к следующим изменениям. При стерилизации менее 5 минут эффекта от обработки стерилизующими агентами не наблюдается, при чересчур длительной стерилизации (более 2 часов) возможно повреждение симбионтов лишайников. Использование этанола в концентрации ниже 3% неэффективно, а применение их в концентрациях выше 98 и 37% соответственно невозможно из-за отсутствия подобных растворов при нормальных условиях (данных растворов не бывает в природе).

Суть изобретения заключается в использовании для поверхностной стерилизации комбинации этанола и этанолового экстракта усниновой кислоты. Поверхность слоевищ лишайников обильно заселена ассоциативными микроорганизмами. Большинство из них относится к тем же систематическим группам, что и симбионты лишайников, поэтому использование одних только специфических стерилизующих агентов не эффективно. Выходом является использование комбинации из этанола и этанолового экстракта усниновой кислоты.

Изобретение подтверждается следующими примерами:

Пример 1

Лишайник Исландский мох (Cetraria islandica) промывают стерильной водой, нарезают на небольшие фрагменты площадью 1 см2. Фрагменты помещают в химические стаканы объемом 100 мл. Сначала в стакан наливают 50 мл 3% этанола (на 10 минут), а затем этанол выливают, лишайник промывают стерильной водой и добавляют 50 мл этанолового экстракта усниновой кислоты концентрацией 100 мг/мл (на 10 минут). Общее время стерилизации составляет 20 минут.

После обработки стерилизующим агентом экспланты промывают стерильной водой и помещают в чашки Петри с агаризованной средой Чапека. Культивирование проводят в термостате (25°С), в темноте в течение 2 недель. Спустя 2 недели контаминантами оказывается поражено 60% инокулированных фрагментов (поражение составляет 60%; в контроле без обработки – 100%).

Спустя 2 недели после инокуляции по краям лопастей слоевищ Цетрарии исландской наблюдался первичный неассоциированный рост симбионтов лишайников.

Пример 2

Лишайник Исландский мох (Cetraria islandica) промывают стерильной водой, нарезают на небольшие фрагменты площадью 1 см2. Фрагменты помещают в химические стаканы объемом 100 мл. Сначала в стакан наливают 50 мл 30% этанола (на 10 минут), а затем этанол выливают, лишайник промывают стерильной водой и добавляют 50 мл этанолового экстракта усниновой кислоты концентрацией 100 мг/мл (на 10 минут). Общее время стерилизации составляет 20 минут.

После обработки стерилизующим агентом экспланты промывают стерильной водой и помещают в чашки Петри с агаризованной средой Чапека. Культивирование проводят в термостате (25°С), в темноте в течение 2 недель. Спустя 2 недели контаминантами оказывается поражено 50% инокулированных фрагментов (поражение составляет 50%; в контроле без обработки – 100%).

Спустя 2 недели после инокуляции по краям лопастей слоевищ Цетрарии исландской наблюдался первичный неассоциированный рост симбионтов лишайников.

Пример 3

Лишайник Исландский мох (Cetraria islandica} промывают стерильной водой, нарезают на небольшие фрагменты площадью 1 см2. Фрагменты помещают в химические стаканы объемом 100 мл. Сначала в стакан наливают 50 мл 98% этанола (на 10 минут), а затем этанол выливают, лишайник промывают стерильной водой и добавляют 50 мл этанолового экстракта усниновой кислоты концентрацией 100 мг/мл (на 10 минут). Общее время стерилизации составляет 20 минут.

После обработки стерилизующим агентом экспланты промывают стерильной водой и помещают в чашки Петри с агаризованной средой Чапека. Культивирование проводят в термостате (25°С), в темноте в течение 2 недель. Спустя 2 недели контаминантами оказывается поражено 40% инокулированных фрагментов (поражение составляет 40%; в контроле без обработки – 100%).

Спустя 2 недели после инокуляции по краям лопастей слоевищ Цетрарии исландской наблюдался первичный неассоциированный рост симбионтов лишайников.

Пример 4

Лишайник Исландский мох (Cetraria islandica) промывают стерильной водой, нарезают на небольшие фрагменты площадью 1 см2. Фрагменты помещают в химические стаканы объемом 100 мл. Сначала в стакан наливают 50 мл 30% этанола (на 10 минут), а затем этанол выливают, лишайник промывают стерильной водой и добавляют 50 мл этанолового экстракта усниновой кислоты концентрацией 10 мг/мл (на 10 минут). Общее время стерилизации составляет 20 минут.

После обработки стерилизующим агентом экспланты промывают стерильной водой и помещают в чашки Петри с агаризованной средой Чапека. Культивирование проводят в термостате (25°С), в темноте в течение 2 недель. Спустя 2 недели контаминантами оказывается поражено 70% инокулированных фрагментов (поражение составляет 70%; в контроле без обработки – 100%).

Спустя 2 недели после инокуляции по краям лопастей слоевищ Цетрарии исландской наблюдался первичный неассоциированный рост симбионтов лишайников.

Пример 5

Лишайник Исландский мох (Cetraria islandica) промывают стерильной водой, нарезают на небольшие фрагменты площадью 1 см2. Фрагменты помещают в химические стаканы объемом 100 мл. Сначала в стакан наливают 50 мл 30% этанола (на 10 минут), а затем этанол выливают, лишайник промывают стерильной водой и добавляют 50 мл этанолового экстракта усниновой кислоты концентрацией 1000 мг/мл (на 10 минут). Общее время стерилизации составляет 20 минут.

После обработки стерилизующим агентом экспланты промывают стерильной водой и помещают в чашки Петри с агаризованной средой Чапека. Культивирование проводят в термостате (25°С), в темноте в течение 2 недель. Спустя 2 недели контаминантами оказывается поражено 48% инокулированных фрагментов (поражение составляет 48%; в контроле без обработки – 100%).

Спустя 2 недели после инокуляции по краям лопастей слоевищ Цетрарии исландской наблюдался первичный неассоциированный рост симбионтов лишайников.

Пример 6

Лишайник Исландский мох (Cetraria islandica) промывают стерильной водой, нарезают на небольшие фрагменты площадью 1 см2. Фрагменты помещают в химические стаканы объемом 100 мл. Сначала в стакан наливают 50 мл 30% этанола (на 1 час), а затем этанол выливают, лишайник промывают стерильной водой и добавляют 50 мл этанолового экстракта усниновой кислоты концентрацией 100 мг/мл (на 1 час). Общее время стерилизации составляет 2 часов.

После обработки стерилизующим агентом экспланты промывают стерильной водой и помещают в чашки Петри с агаризованной средой Чапека. Культивирование проводят в термостате (25°С), в темноте в течение 2 недель. Спустя 2 недели контаминантами оказывается поражено 37% инокулированных фрагментов (поражение составляет 40%; в контроле без обработки – 100%).

Спустя 2 недели после инокуляции по краям лопастей слоевищ Цетрарии исландской наблюдался первичный неассоциированный рост симбионтов лишайников.

Пример 7

Лишайник Исландский мох (Cetraria islandica) промывают стерильной водой, нарезают на небольшие фрагменты площадью 1 см2. Фрагменты помещают в химические стаканы объемом 100 мл. Сначала в стакан наливают 50 мл 30% этанола (на 2 мин 30 с), а затем этанол выливают, лишайник промывают стерильной водой и добавляют 50 мл этанолового экстракта усниновой кислоты концентрацией 100 мг/мл (на 2 мин 30 с). Общее время стерилизации составляет 5 минут.

После обработки стерилизующим агентом экспланты промывают стерильной водой и помещают в чашки Петри с агаризованной средой Чапека. Культивирование проводят в термостате (25°С), в темноте в течение 2 недель. Спустя 2 недели контаминантами оказывается поражено 70% инокулированных фрагментов (поражение составляет 70%; в контроле без обработки – 100%).

Спустя 2 недели после инокуляции по краям лопастей слоевищ Цетрарии исландской наблюдался первичный неассоциированный рост симбионтов лишайников.

Из результатов таблицы следует, что оптимальные условия стерилизации достигаются в примерах 3, 6. Увеличению эффективности стерилизации способствует увеличение времени обработки слоевищ лишайников (пример 6). Хороший результат дает увеличение концентрации стерилизующего агента (примеры 3, 5). Во всех приведенных примерах через 2 недели после инокуляции был отмечен рост симбионтов Цетрарии исландской, что говорит о том, что в результате стерилизации жизнеспособность симбионтов была сохранена.

Формула изобретения

Способ стерилизации эксплантов лишайника Исландский мох (Cetraria islandica), заключающийся в последовательной обработке лишайниковых эксплантов стерилизующими агентами, отличающийся тем, что обработку осуществляют последовательно этанолом в концентрации от 3 до 98% и этаноловым экстрактом усниновой кислоты с концентрацией от 10 до 1000 мг/мл при общем времени обработки от 5 мин до 2 ч.

Categories: BD_2380000-2380999